#1  
قديم 11-20-2015, 08:46 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
  
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي المناعي ديسريغولاتيون الجين النظام في التوحد والفصام

 

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/1...neu.22044/full

الكلمات الدالة:

  • انفصام في الشخصية؛
  • مرض التوحد.
  • المناعي؛
  • بيئة؛
  • تفعيل المناعي للأم

ملخص


الجينات * تفاعلات البيئة تلعب أدوارا حاسمة في ظهور مرض التوحد وانفصام الشخصية الفيزيولوجيا المرضية. في كل من الاضطرابات، وقد وفرت الدراسات جمعية الجينية الأخيرة دليل على الاختلاف مرتبطة مرض في الجينات جهاز المناعة ودراسات التعبير الجيني بعد الوفاة أظهرت تشوهات المناعية المزمنة واسعة في العقول المريضة من الموضوعات. وعلاوة على ذلك، كشفت الدراسات العلامات البيولوجية الطرفية أن كلا النظامين المناعية الفطرية والتكيفية هي dysregulated. في كل الاضطرابات أعراض المرض ترتبط مع ضعف الجهاز المناعي؛ حتى الآن، على التوحد هذه العملية يبدو أن المزمن والمستدام، بينما في الفصام ويتفاقم ذلك أثناء النوبات الحادة. وعلاوة على ذلك، منذ تشوهات المناعة يدوم حتى سن البلوغ والمضادة للالتهابات وكلاء تظهر أن تكون مفيدة، فمن المرجح أن هذه التغيرات المناعية يسهم بفعالية في أعراض المرض. نمذجة هذه التغييرات في الحيوانات تقدم دليلا إضافيا على أن ما قبل الولادة تفعيل المناعي للأم يغير من النمو العصبي ويؤدي إلى التغيرات السلوكية التي هي ذات الصلة لمرض التوحد وانفصام الشخصية. الأدلة المتقاربة تجادل بقوة أن الشتائم في مأمن العصبية النمائية والخلفية الوراثية تتفاعل خطيرة وتؤدي إلى زيادة خطر من مرض التوحد وانفصام الشخصية. مزيد من البحوث في هذه المجالات قد يحسن صحة غربلة قبل الولادة في العائلات وراثيا المعرضين للخطر، وقد تؤدي أيضا إلى استراتيجيات وقائية و / أو علاجية جديدة. © 2012 ايلي الدوريات، وشركة تطوير Neurobiol، 2012


مقدمة


يتميز اضطراب طيف التوحد (ASD) من خلال الأعراض في مجالات التفاعل الاجتماعي، والاتصالات، والمصالح المقيدة والمتكررة والسلوكيات (ماير وآخرون، 2011؛ ​​نوتردام، 2011؛ ​​Ratajczak، 2011). في المقابل، المظاهر السريرية للمرض انفصام الشخصية (SCZ) وتشمل الأعراض الإيجابية، والأعراض السلبية والعجز المعرفي (Frangou وموراي، 2000؛ تاندون وآخرون، 2009). وعلى الرغم من العروض سريرية مختلفة، وهناك الأسس الفيزيولوجية المرضية مشتركة في كل من هذه الاضطرابات. ASD وSCZ تنشأ نتيجة قوية عوامل الخطر الجينية والبيئية التي تتفاعل بطرق معقدة لإعطاء ارتفاع اثنين من العمليات المرض متميزة. وقد وفرت دراسات التوائم تقديرات التوريث في ASD وSCZ تصل إلى 90 و 80٪ على التوالي، مما يشير إلى أن الاختلافات الوراثية تلعب دورا محوريا في المسببات لهذه الاضطرابات السلوكية (تاندون وآخرون، 2008؛ Geschwind، 2009). ومع ذلك، درست دراسة التوأم الأخيرة على وجه التحديد الآثار المحتملة على البيئة في ASD وخلص إلى أن حوالي 58٪ من التوريث ذكر يمكن أن يعزى إلى العوامل البيئية التي تؤثر عادة على أزواج التوأم (Hallmayer وآخرون، 2011). وبالمثل، فإن التحليل التلوي من دراسات التوأم في الفصام العثور على مكون بيئي قوي (سوليفان وآخرون، 2003). وعلاوة على ذلك، كان التوائم الزيجوت يشتركون في المشيمة (أحادي المشيماء) أعلى بكثير التوافق للفصام من تلك التي مع مشيمة منفصلة (ثنائي المشيماء)، بحجة أن العوامل البيئية قبل الولادة تمنح خطر لاضطرابات النمو العصبي حتى عندما يكون التركيب الجيني مطابق (ديفيس ETAL.، 1995) .

فمن الواضح أن كلا من الوراثة والبيئة تساهم في ظهور ASD وSCZ، ولكن كيف يمكن أن العوامل البيئية تغير البرامج المشفرة وراثيا وتؤدي إلى المرض؟ "البيئة" والأكثر شيوعا المشار إليها بوصفها مجموعة من المؤثرات الخارجية التي تؤثر على مختلف الآليات واسعة التماثل الساكن للكائن الحي. العوامل البيئية تمارس نفوذها مباشرة عن طريق التأثير في العمليات الخلوية محددة (على سبيل المثال، والسموم، والآثار على المدى القصير من المخدرات) أو بشكل غير مباشر عن طريق التلاعب في التعبير عن الجينات [على سبيل المثال، والهرمونات، والآثار على المدى الطويل من المخدرات، وتفعيل نظام المناعة، وممارسة (راسيل ، 2003)]. هذه الجينات التغييرات التعبير عن أثار البيئة يمكن أن تكون مفيدة أو ضارة في الاضطرابات مثل مرض الزهايمر (لازاروف وآخرون، 2005؛ Radak وآخرون، 2010)، مرض باركنسون (زيجموند وآخرون، 2009) أو إصابات في الدماغ ( ديفين وZafonte، 2009). على سبيل المثال، وقد ثبت أن الظروف البيئية مثل ممارسة للتأثير النظم البيولوجية من خلال التغييرات في التعبير عن شلالات الجينات المختلفة (ميتشل وآخرون، 2012). ومع ذلك، يبدو أن التأثيرات البيئية على التعبير الجيني في كل ASD وSCZ أن يكون ضارا في المقام الأول، والمساهمة في عملية المرض. لذلك، ما هي العوامل البيئية الرئيسية في ظهور ASD وSCZ وكيف يمكن أنها تزيد من خطر المرض؟ منذ أكثر من 40 عاما، وحددت الدراسات الوبائية إصابة الأم أثناء الحمل المبكر باعتباره عامل خطر كبير للASD (الشطرنج، 1971). وبالمثل، وزيادة نسبة التوافق من SCZ في مقابل المشيماء التوائم ثنائي المشيماء يمكن تفسير الدورة الدموية مشتركة والمشيمة المشتركة، مما يوحي بأن عدوى سوف تؤثر على كل من التوائم monchorionic بالمثل (ديفيس وآخرون، 1995). وبالإضافة إلى ذلك، حددت دراسات مختلفة أن التعرض لمجموعة واسعة من العوامل البكتيرية والفيروسية يزيد من خطر ASD وSCZ (براون وDerkits، 2010؛ Ratajczak، 2011)، بحجة أن تنشيط جهاز المناعة العام، وليس وكيل المعدية محدد هو المسؤول عن زيادة مخاطر في كلا المرضين.

علم الجينوم الأخيرة، وعلم الوراثة، والدراسات الفنية ونموذج حيواني من ASD وSCZ تدعم بقوة هذا التفسير. التعرف على التحليل التلوي من الجينوم السابق دراسة جمعية اسعة (GWAS) مجموعات البيانات أنواع من الجينات المعنية في الاستجابة المناعية التي ترتبط بشكل كبير مع SCZ التشخيص (Ripke ETAL.، 2011) وقد وجدت دراسات التعبير بعد الوفاة dysregulated المناعة نسخ الجين النظام في العقول (. ينتاس آخرون، المرضى الذين يعانون من ASD 2012) وSCZ (أريون وآخرون، 2007؛ سيكويرا وآخرون، 2012). وعلاوة على ذلك، في الدماغ من الموضوعات مع ASD، فارغاس وآخرون. لاحظنا تفعيل قوي من الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية، وكذلك مستويات خلوى مرتفعة، مما يشير إلى أن يتميز ASD من قبل تنشيط الجهاز المناعي المستمر (فارغاس وآخرون، 2005). وأشير أيضا إلى تفعيل دبقية للعب دور في SCZ، على الرغم من يبقى دليلا على أن يقسم شامل (بيرنشتاين وآخرون، 2009؛ منجي آخرون، في الصحافة). بالإضافة إلى ذلك، كشفت الدراسات من الدم المحيطي مستويات خلوى المتغيرة بشكل واضح عبر كل من الاضطرابات (تشان وآخرون، 2011؛ ​​Onore وآخرون، 2012). وأخيرا، قدمت الأمهات تنشيط جهاز المناعة (MIA) دراسات في القوارض الدليل على تشريحية، التعبير الجيني والتغيرات السلوكية المتعلقة ASD أو SCZ (باترسون، 2009؛ Boksa، 2010؛ مولر وشوارتز، 2010).

ومع ذلك، فهمنا من ضعف الجهاز المناعي في هذه الاضطرابات اثنين لا تزال غير مكتملة حتى الآن. حاليا لدينا فهم محدود جدا من كيف يعطل ضعف الجهاز المناعي التنمية المخ المعتادة ويساهم في ظهور المرض. وبشكل أكثر تحديدا، نحن لا نعرف (1) كيف يمكن للعناصر الوراثية والشتائم البيئية تتفاعل. (2) ما إذا كان الخلل neuroimmune هو جزء أساسي أو التكيف عملية المرض؛ (3) كيف مأمن نظام الاضطرابات تتغير خلال كل مرض. و (4) ما إذا تشوهات الجهاز المناعي مسؤولة مسؤولية مباشرة عن الظواهر السلوكية ينظر في المرضى الذين يعانون وما إذا كانت تمثل أهدافا دواء جيد.

التباين الوراثي تورط الجينات ذات الصلة جهاز المناعة


الجينوم دراسة جمعية اسعة (GWAS) هي، طريقة خالية من الفرضية المعتمدة على الحمض النووي الذي يحلل الاختلاف الجيني بين الأفراد في عدد كبير من السكان. وتهدف في المقام الأول لكشف الاختلاف الجيني مثل الأشكال واحدة النوكليوتيدات (النيوكلوتايد)، والحذف الصغرى، أو تغيرات في عدد النسخ (التنوعات في عدد النسخ) التي ترتبط مع خاص سمة، الشرط، أو اضطراب. مع عدد كبير من السكان ومجموعة بيانات مرجعية جيدة، وهذه التقنية هي قوية جدا لتحديد الأليلات ومناطق الجينوم لا ترتبط سابقا مع المرض (Raychaudhuri، 2011). ومع ذلك، هذا الأسلوب هو عرضة للأخطاء اكتب II (السلبيات كاذبة) والأليلات نادرة تحدث إلا في جزء صغير من السكان يمكن أن تبقى غير مكتشفة. في اضطرابات طيف مثل ASD وSCZ، وهذا ما يضاعف من عدم التجانس الوراثي كبيرا في السكان المريض. وعلاوة على ذلك، لم يجر أي تحقيق في تأثير وظيفي للأغلبية حددت تعدد الأشكال شامل (خاصة غير المرمزة noncoding الموجودة تعدد الأشكال). ومع ذلك، يمكن أن يكون الدراسات GWA مفيدة جدا في توفير يؤدي لمتابعة والدراسات يحركها فرضية مع الهدف الأساسي لفهم الآثار البيولوجية التي اضطرابات التعبير الجيني يغير تطور الدماغ. مثل هذه الدراسات على أساس فرضية بدورها لديها القدرة التحليلية أعلى ويمكن تحليل بسهولة إشارة معينة مع ضرورة الحد الأدنى لتصحيح الإحصائي.

في المرضى الذين يعانون SCZ، كشفت الدراسات GWA وجود ارتباط بين التوافق النسيجي الرئيسي موضع (MHC) والتشخيص. موضع MHC يحتوي على الجينات الحفظ المتعددة التي تشارك في الفطري، على التكيف، وأنظمة المناعة الذاتية (Traherne، 2008). وقد تساءل العديد من المرضى من السكان من أصول جغرافية مختلفة. ذكرت بعض الدراسات جمعيات كبيرة من تعدد الأشكال في مكان MHC (سوليفان وآخرون، 2008؛ الحاجة وآخرون، 2009؛. بورسيل ETAL، 2009؛ شي وآخرون، 2009؛. ستيفانسون وآخرون، 2009؛ يو وآخرون. ، 2011)، في حين فشل الآخرون لتكرار هذه النتائج (أودونوفان وآخرون، 2008؛. Shifman ETAL، 2008؛ والش وآخرون، 2008؛ Athanasiu وآخرون، 2010؛ ما آخرون، 2011؛ ​​يامادا وآخرون .، 2011). ولكن عندما تم الجمع بين هذه الدراسات في التحليل التلوي، تم تحديد 129 الأشكال المتعلقة المرض في MHC موضع الموسعة (Ripke وآخرون، 2011). وعلاوة على ذلك، كشفت عن وجود نهج الجين مرشح يحركها الفرضية القائلة بأن الأشكال في العامل النووي كابا B (NFκB) (هاشيموتو وآخرون، 2011)، انترلوكين 2، 4 (شوارتز وآخرون، 2006)، 3 (شين وآخرون، 2007 ) و 6 و 10 (Bocchio Chiavetto ETAL. 2002؛ بول Samojedny ETAL، 2010؛ Almoguera وآخرون، 2011) كانت مرتبطة أيضا إلى SCZ.

في المقابل، ودراسات GWA من ASD لم تكشف عن ارتباط ملموس مع الجينات المتورطة في الوظيفة المناعية (ما وآخرون، 2009؛ وانغ وآخرون، 2009؛ وايس وآخرون، 2009؛. Anney وآخرون، 2010). ومع ذلك، كشفت التقييمات الوراثية يحركها فرضية أن HLA A2 (MHC الدرجة الأولى) وHLA DR4 (MHC من الدرجة الثانية) مواضع يرد تعدد الأشكال المرتبطة ASD، مما يشير إلى أن الاختلاف الجيني في المنطقة MHC يرتبط أيضا مع ASD (لي وآخرون، 2006؛ توريس وآخرون، 2006؛ Guerini وآخرون، 2009؛. Guerini ETAL، 2011). لذلك، والتباين الوراثي في ​​جينات جهاز المناعة يجب أن يتم تقييم مزيد كعامل خطر محتمل لكلا ASD وSCZ.

ومن المثير للاهتمام، وتشير الدراسات GWA الجينات المخاطر المتداخلة المرتبطة ASD / SCZ وأمراض الجهاز المناعي. اشتراك في موضع MHC على سبيل المثال يبدو أن واحدة من أقوى النتائج في دراسات GWA الأمراض الالتهابية المزمنة (Wucherpfennig وسيتي، 2011). وعلاوة على ذلك، يرتبط الاختلاف في موضع HLA DRB1 المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي، وهو مرض المناعة الذاتية التي يبدو أن انخفاض معدل الإصابة في المرضى الذين يعانون من SCZ وحدوث زيادة في أمهات الأطفال الذين يعانون من التوحد (كريسبي وThiselton، 2011). وأخيرا، حددت الدراسات GWA أيضا أن بعض الأليلات neurexin يؤهب إلى الإصابة بأمراض المناعة الذاتية مثل التهاب المفاصل الروماتيزمي ومرض كرون ومرض التصلب المتعدد (بارانزيني، 2009) وneurexin كما تم تحديدها باعتبارها ASD وSCZ قابلية الجين (غوتييه وآخرون، 2011 ).

وعموما، تشير الدراسات GWA أن عناصر في جينات الاستجابة المناعية الهامة قد تساهم في ظهور المرض الفيزيولوجيا المرضية في كل ASD وSCZ. فإن الدور الدقيق (ق) من هذه الأليلات يتعين معالجتها في الدراسات المستقبلية، وخاصة بالنظر إلى أن الجينات الموجودة على مكان MHC ومجموعة متنوعة من الوظائف في جهاز المناعة والجهاز العصبي.

GENE بعد الوفاة التغيرات التعبير


يمكن أن الاختلافات الجينية تعطي مباشرة تؤدي إلى تغيرات التعبير الجيني، يغير بنية البروتين ووظيفته، تعدل التعبير الجيني بالتنسيق مع العوامل البيئية، أو ليس لها أي أثر. التغييرات التعبير الجيني التي تم العثور عليها في أنسجة الدماغ بعد الوفاة هي المنتجات المتراكمة لعلم الوراثة، وسبب الوفاة، ومدة المرض، والعلاج، والأحداث البيولوجية الأخرى التي ليست سوى المرتبطة محيطيا مع الفيزيولوجيا المرضية المرض. ومع ذلك، يمكن لدراسة التعبير الجيني بعد الوفاة تسيطر عليها بشكل جيد، تحديد التغييرات التعبير الجيني والممرات التي هي محددة لهذا المرض.

في SCZ، كشفت الدراسات Transcriptome على الجهاز المناعي، متشابك، دبقية قليلة التغصن، والأيض المرتبطة الاضطرابات الطاقة (فالودي وMirnics، 2011). ومن المرجح أن تكون ذات صلة، على الرغم من أن في الوقت الحاضر لدينا فهم محدود لكيفية تفاعل هذه المجالات هذه التغييرات. بوضوح، قد يؤدي اختلال النظام المناعي في عملية التمثيل الغذائي تغير الطاقة والقضاء المشبك، بعد القضاء متشابك أو تغيير وظيفة دبقية قليلة التغصن قد يؤدي أيضا الاستجابات المناعية / كوصي. على الرغم من أننا لا نفهم تماما التسلسل الزمني الذي التغييرات Transcriptome على الظهور، والأنسجة بعد الوفاة من الموضوعات مع SCZ أو ASD معارض قوي ديسريغولاتيون neuroimmune Transcriptome على. في أدمغة من الموضوعات مع الفصام، أريون وآخرون. وSaetre وآخرون. قدمت أدلة المتقاربة لقوي upregulation نسخة المناعة في قشرة الفص الجبهي تتكون من SERPINA3، IFITM2، وIFITM3. الأهم من ذلك، كل من الدراسات لاحظت التغييرات التعبير الجيني التي كانت مستقلة من الأدوية التاريخ المرضى (أريون وآخرون، 2007؛. Saetre وآخرون، 2007). وبالمثل، Garbett وآخرون. وجدت العديد من التغييرات التعبير ذات الصلة في مأمن في منطقة برودمان (BA) 46 من المرضى، في حين أفادت شاو وVawter تعبيرا عن زيادة الخلطية جينات الاستجابة المناعية في منطقة الدماغ نفسها (Garbett وآخرون، 2008؛. شاو وVawter، 2008). ومع ذلك، شميت وآخرون. لاحظ القمع المنهجي للنصوص المناعية في BA22 من الفص الصدغي، مما يوحي بأن الاضطرابات neuroimmune قد يكون لها طابع إقليمي في الفصام (شميت وآخرون، 2011). وأيد هذا التحديد يحتمل الإقليمية أيضا من خلال دراسة خرائط الدماغ شاملة Katsel وآخرون، الذي أبلغ عن النمط المكاني للاهتمام ومعقدة جدا من التقلبات المناعي عبر مناطق الدماغ (Katsel وآخرون، 2005).

باختصار، تشير تتلاقى دراسات تشريح الجثة SCZ أن تنشيط الجهاز المناعي هو مزمن، عملية تدريجية في جزء من السكان من المرضى، ويبدو أن هذا التوقيع التعبير المتبقية من أوائل تنشيط الجهاز المناعي. وعلاوة على ذلك، يرتبط المناعة النص التعريفي لغيرها من التغييرات التعبير الجيني، وخاصة downregulation النصوص علامة متشابك والنصوص استقلاب الطاقة ذات الصلة. وأخيرا، والتغييرات في نظام المناعة معقدة وتشمل كلا الجين يزيد التعبير والنقصان في نمط الخاصة بكل منطقة، مع الحصين والقشرة الأمامية الجبهية التي تبين أبرز neuroimmune نسخة التقلبات.

تفعيل نظام المناعة في ASD معقد على حد سواء. وقد كشفت الدراسات Transcriptome على التقلبات في المقام الأول ASD المصاحب من المناعة، ومتشابك النصوص التنموية. دراسة Garbett وآخرون. قدمت أدلة لتحريض قوي من كل من الفطرية وكذلك جهاز المناعة التكيفية (Garbett وآخرون، 2008). وبالمثل، فوانيجو وآخرون. الإبلاغ عن تحريض قوي في التعبير الجيني تشارك في الاستجابة المناعية والتهابات في قشرات الجبهي والزمنية، ولكن لوحظ عدم وجود ارتباط كبير بين الأليلات المرتبطة ASD في GWAS ومستويات مرنا الجينات المناعية. ووجد الباحثون أيضا أن التخصص الإقليمي والموهن إلى حد كبير في الموضوعات مع ASD (فوانيجو وآخرون، 2011). وأخيرا، وتستخدم Ziats ورينيرت والمتاحة للجمهور أطلس الجينات التعبير من 16 مناطق الدماغ التي تتراوح بين 21 أسبوعا من الحمل إلى 40 سنة من العمر، وبحثت عن أعربت غاية ASD-الجينات المخاطر في نمو الدماغ وتحليل المسارات المستخدمة لتحديد محاور يشير للتقارب الجينات خطر. ووجد الباحثون أن 219 التي سبق تحديدها المفترضة الجينات خطر ASD قد تتلاقى على مسارات خلوى الإشارات، مما يشير إلى أن تنشيط جهاز المناعة في وقت مبكر قد يكون سمة أساسية من ASD الفيزيولوجيا المرضية (Ziats ورينيرت، 2011).

جنبا إلى جنب، وتشير الدراسات Transcriptome على ASD أن الجهاز المناعي الاستقراء هو مزمن ومعقد، وربما ليسوا من أصل وراثي. بدلا من ذلك، فمن المحتمل أن يكون نتيجة للعمليات البيئية أو التكيف الناشئة عن تنشيط جهاز المناعة في وقت مبكر. على غرار التغييرات في SCZ، يرتبط تنشيط الجهاز المناعي في ASD بإحكام مع متشابك نسخة downregulation ويشمل الفطرية وكذلك التكيف النصوص الجهاز المناعي. هناك تداخل ملحوظ من أنماط التعبير الجيني محددة بين هذه الاضطرابات اثنين، من بينهم اثنان من انترفيرون محرض النصوص، IFITM2 وIFITM3 (أريون وآخرون، 2007؛. Saetre وآخرون، 2007؛ Garbett ETAL. 2008؛ فوانيجو وآخرون. ، 2011). ومع ذلك، وعلى النقيض من SCZ، تظهر التغييرات في نظام المناعة في ASD أن تكون موحدة في جميع أنحاء المناطق القشرية. الأهم من ذلك، هذه الدراسات تدعم احتمال أن قبل الولادة تنشيط جهاز المناعة قد يكون مساهما المشترك إلى ظهور ASD أو SCZ. ولكن منذ دراسات تشريح توفر لقطات فقط من Transcriptome على، فإن ظهور الزمني للتغيرات في جهاز المناعة يجب أن يحدده الطرق الطولية الأخرى.

المؤشرات الحيوية الطرفية


دراسات Transcriptome على بعد الوفاة بناء قضية مقنعة لاضطرابات neuroimmune في ASD وSCZ المرضى، ولكن هي هذه التغييرات المرتبطة المؤشرات الحيوية المحيطية على حدوث الالتهابات التي يمكن استخدامها لمساعدة التشخيص المبكر أو مراقبة فعالية العلاج؟ العديد من الدراسات هي مفيدة في هذا الصدد.

وقد وفرت الدراسات في وقت مبكر من علامات المناعة الطرفية نتائج متباينة، ولكن التحليل التلوي مؤخرا ميلر وآخرون. أبلغت عن زيادة في السيتوكينات الالتهابية IL-1β، IL-6، وTGFβ تحديدا أثناء النوبات الحادة للمرض (ميلر وآخرون، 2011). وتشير هذه الأدلة التعريفي محددة للدولة من علامات المناعة خلال فترات نشطة من SCZ، التي أثبتها تاكاهاشي آخرون. الذين وجدوا أن ظهور مؤخرا أو الحلقات النشطة يؤدي إلى تحريض العمليات البيولوجية والمناعية الالتهابية ذات الصلة (تاكاهاشي وآخرون، 2010). بالإضافة إلى ذلك، كوريان وآخرون. وذكرت أن هلوسة عالية والوهم عشرات ترتبط مع التعبير المرتبطة انترلوكين في مصل المرضى (كوريان وآخرون، 2011)، في حين Drexhage وآخرون. العثور على كبير يصل التنظيم من IL 1β، IL-6، وTNFα في الخلايا وحيدة النواة الدموية المحيطية في مرضى مؤخرا الحدوث (Drexhage وآخرون، 2010). مزيد من الدعم يأتي من دراسة أجراها كلمات وآخرون، التي أكدت زيادة TNFα وIL-1β مرنا ومستويات البروتين في المرضى ولم يتلقوا علاجا الحلقة الأولى (كلمات وآخرون، 2009). وهكذا، يبدو أن في المرضى الذين يعانون من SCZ، المرحلة الحادة من المرض يرتبط مع التغيرات الطرفية في كلا النظامين المناعية الفطرية والتكيفية.

في ASD، تنشيط جهاز المناعة الطرفية معقد على قدم المساواة ويبدو أن تنطوي على كل من أنظمة المناعية الفطرية والتكيفية. وعلاوة على ذلك، يبدو أن مستويات غيرت من علامات المناعة الطرفية للإشارة إلى شدة الأعراض. دراسات متعددة تدعم هذا الاستنتاج. ارتبطت التغيرات التعبير أولا، TNFα المتعلقة اشارة مع التشخيص وشدة ASD (هو وآخرون. 2006، هو وآخرون. 2009). وبالمثل، تم زيادة مستويات السيتوكينات proinflammatory مثل IL-1β، IL-6، وIL-8 في المرضى الذين يعانون من التوحد ويرتبط مع انخفاض السلوكي أكثر وضوحا (أشووود وآخرون، 2011). وبالإضافة إلى ذلك، ومستويات التعبير عن خلوى المضادة للالتهابات TGFβ تنخفض كلما ساءت الأعراض السلوكية (أشووود وآخرون، 2008). ولذلك، يبدو أن ميزان السيتوكينات الموالية للالتهابات ومضادة للالتهابات يتم تبديل في ASD وأن مستويات خلوى ترتبط مع شدة الأعراض بما في ذلك مهارات الاتصال الفقراء والسلوكيات الاجتماعية الضعيفة.

باختصار، دراسات العلامات البيولوجية مصل ASD وSCZ تشير العديد من أوجه التشابه بين هذه الاضطرابات اثنين. في كل ASD وSCZ، الخلل المناعي هو النظامية وليس مقصورا على الجهاز العصبي المركزي. ومن المهم أيضا أن نلاحظ أن كلا علامات المناعية الفطرية والتكيفية تظهر مستويات المتغيرة، ويبدو أن مستويات خلوى الطرفية لربط مع أعراض المرض في ظهور هذه الاضطرابات السلوكية (المرحلة الحادة في الفصام وشدة الأعراض في ASD).

إذا تسهم الاضطرابات المناعية لمظاهر ASD / SCZ، يمكن علاجهم تخفيف أعراض المرض؟ ومن المثير للاهتمام، ويبدو أن الأدوية المضادة للذهان يصد الاستجابة المناعية الطرفية في مرضى SCZ. على سبيل المثال، العلاج 4 أسابيع طويلة مع ريسبيريدون انخفاض مستويات المصل من IL-1β مرنا والبروتين والتي كانت مرتبطة مع الحد من شدة الأعراض (كلمات وآخرون، 2009). وقد اقترح مؤخرا أن تنظيم الجهاز المناعي قد تكون جزءا من التخفيف من حدة أعراض [انظر أيضا (Drzyzga وآخرون، 2006؛ Strous وShoenfeld، 2006؛ ميلر وآخرون، 2011)]. ونتيجة لذلك حققت العديد من الدراسات ما إذا كان العلاج مباشرة من الخلل المناعي يؤدي إلى تحسن في الأعراض. وكشفت هذه الجهود أن العلاج بالعقاقير المضادة للالتهابات مع الأسبرين (LAAN وآخرون، 2010 أو مثبط COX2) (مولر وآخرون، 2002؛ مولر وآخرون، 2010) تحسين الاستجابة للعلاج في المرضى الذين يعانون SCZ مع مستويات مرتفعة من علامات للالتهابات الطرفية أو الأعراض الحادة. في ASD، والمعاملة مع العقاقير المضادة للالتهاب تخفف باعتدال مجموعة فرعية من الأعراض ASD (روسينول، 2009). وعلاوة على ذلك، ذكرت دراسة حديثة أن حمى يقلل من شدة الأعراض في الأطفال المصابين بالتوحد (كوران وآخرون، 2007). الآليات الكامنة وراء هذا التأثير غير واضحة، ولكن يمكن للمرء أن يتكهن بأن تغيير التوازن خلوى قد تستفيد وظيفة الدماغ لدى هؤلاء المرضى.

ومع ذلك، فإن السؤال المركزي في أي دراسة العلامات البيولوجية هو: "يمكن لمجموعة من الجزيئات الطرفية يكون التنبؤي التشخيص، وصفي لتطور المرض، أو فعال في فعالية العلاج الرصد؟" يجب أن يكون هناك اختبار سريري يمكن الاعتماد عليها على حد سواء محددة (تحديد مواضيع الوحيدة مع الشرط) وحساس (تحديد جميع المواد مع الشرط). ونتيجة لذلك، فإن فائدة الجهاز المناعي القائم على العلامات البيولوجية التشخيص الطرفية لASD أو SCZ من المستبعد جدا، لأن أي تغيير الأمراض المرتبطة فمن المحتمل أن يخفيها استجابات النظام المناعي لمجموعة من داخلي (مثلا، المواد الغذائية، والنشاط البدني، والنوم) والخارجية (على سبيل المثال، والاتصال مع المواد الكيميائية أو العوامل المعدية) المحفزات. بالإضافة إلى ذلك، يتم التحكم في التعبير عن الجينات الطرفية جهاز المناعة في المقام الأول من الأحداث المحلية، لا تسبب CNS العمليات. وعلاوة على ذلك، فإن نسبة عالية من الظروف المرضية في المرضى النفسيين يجعل صعوبة في عزو التغييرات علامة محصنة ضد المرض الأساسي، خصوصا أن تظهر بعض علامات المناعة تفتقر إلى مرض خصوصية في مختلف الاضطرابات النفسية (عبد الله وآخرون، في الصحافة) . ومع ذلك، في حين أن علامات جهاز المناعة الطرفية من غير المرجح أن تكون أدوات التشخيص جيدة وحدها، المتكاملة "-omics" اختبارات تستند لديها فرصة أفضل لتحقيق الحساسية التشخيصية المطلوبة وخصوصية. رصد مستمر، تكاملية "لمحات -omics" شخصية تظهر الوعد في التمييز الاصحاء الحالات المرضية، على الرغم من أن هذا النهج ليس على استعداد ليتم اعتمادها في الممارسة السريرية في الوقت الحالي (شين وآخرون، 2012).

عموما، وقد حددت كلا الدراستين الدم بعد الوفاة والطرفية في ASD باستمرار تشوهات المناعي في مجموعة واسعة سن مجموعة من المرضى، مما يشير إلى تنشيط جهاز المناعة المزمن الذي يزيد مع شدة الأعراض. في الواقع، يتميز ملف السريري للمرضى ASD من قبل الاستمرارية النسبية للأعراض بدلا من الطابع العرضية من الذهان النشط في SCZ. وعلى النقيض من ASD، يبدو أن يتميز SCZ بواسطة علامات للالتهابات الطرفية التي هي أكثر قوة خلال النوبات الحادة. وهذا يشير إلى الملف الشخصي التهابي مزمن في SCZ مما يؤدي إلى تفاقم خلال فترات المرض النشطة. وهكذا، مؤثرات الخارجية عجل الحلقات ذهانية في SCZ (على سبيل المثال، والإجهاد) قد تعمل على شذوذ المناعية المزمنة مما أدى إلى اشتعال من العمليات الالتهابية. مثل هذه الاستجابة الالتهابية يمكن أن يؤدي إلى تفاقم التدريجي للشذوذ المناعية المزمنة، والتي قد تكمن وراء تأثير ضار من الحلقات ذهانية غير المعالجة، فضلا عن الأثر الإيجابي لاستخدام الفوري والمستمر للدواء (Frangou وموراي، 2000). ومع ذلك، تشير البيانات بعد الوفاة والعلامات البيولوجية الشاملة التي المزمن نسخة ديسريغولاتيون المناعة قد يكون سمة من جزء من السكان المريض وهذه الفئات السكانية لا تزال محددة بشكل واضح حتى الآن. سيكون إجراء المزيد من الدراسات لتحسين العلاقة بين الاضطرابات neuroimmune وأعراض المرض. في المستقبل، التحليل التلوي من بعد الوفاة البيانات التعبير الجيني من المرضى في مختلف مراحل المرض (مدة المرض وشدة الأعراض) قد توفر مزيد من المعلومات حول مسار الخلل Transcriptome على.

النمذجة المناعة الاضطرابات


البيانات من فوانيجو ETAL. أقترح أن بعد الوفاة المناعة تغييرات على النظام نص في ASD قد لا يكون سبب الاختلاف الجيني (فوانيجو وآخرون، 2011). وعلاوة على ذلك، تشير الدراسات الوبائية أن مجموعة واسعة من العوامل البكتيرية والفيروسية تزيد من خطر لASD وSCZ (براون وDerkits، 2010؛ Ratajczak، 2011)، ويقال زيادة مستويات خلوى في الأمهات الحوامل الذين يصابون فيما بعد الأطفال ASD وSCZ (براون . وآخرون، 2004؛ جوينز وآخرون، 2011). وهذا يثير سؤالين أساسيين: ما هو تأثير التنشيط المناعي للأم (MIA) على أن يكون وضع الجنين، ويمكن تحقيق هذه التغييرات باستخدام نماذج حيوانية؟

كشفت دراسات أجريت على الحيوانات معالجة هذه الأسئلة عدة ASD وSCZ الميزات ذات الصلة. بعد MIA، وارتفاع مستويات خلوى في مصل الأم فضلا عن دماغ الجنين (الجولان وآخرون، 2005؛ ماير وآخرون، 2006) وذرية أظهرت تشوهات في المخ المورفولوجية التي تحاكي تلك التي ظهرت في ASD وSCZ (Boksa، 2010 ؛ Kneeland وفاطمي، 2012).بالإضافة إلى ذلك، وقد لوحظت تغييرات النص المعقدة في دماغ الجنين مع التغييرات التالية عدوى فيروسية الأمهات المعروفة بأنها تلعب دورا في الفيزيولوجيا المرضية لASD وSCZ (فاطمي وآخرون، 2009؛ فاطمي وآخرون، 2009؛ Kneeland وفاطمي، 2012) . وعلاوة على ذلك، أظهرت الأدلة المتقاربة أن التغيرات السلوكية في النسل MIA مكشوفة كانت تذكرنا ASD وSCZ (Boksa، 2010، ماير، في الصحافة)، وأن بعض هذه العجوزات السلوكية وتحسينها بعد التعرض للأدوية المضادة للذهان (Piontkewitz وآخرون. ، 2009؛ ماير وآخرون، 2010؛. Piontkewitz وآخرون، 2011). وتوفر هذه الدراسات أدلة دامغة على أن ذرية MIA يتعرض في النماذج الحيوانية يحمل العديد من الميزات الهامة التي لوحظ أيضا في المرضى الذين يعانون من التوحد أو SCZ، مما يوحي بأن تفعيل المناعي للأم يلعب دورا في التسبب في هذه الاضطرابات.

ومع ذلك، كشفت هذه الدراسات أيضا أن العوامل المعدية لا يتصرف مباشرة على دماغ الجنين، وإنما من خلال تفعيل أجهزة الطرد المركزي المناعية. أظهر الأدلة في وقت مبكر أن أدمغة الأجنة أظهرت مستويات لا يمكن اكتشافها من الجينات الفيروسية بعد التعرض الفيروسي الأمهات (شي وآخرون، 2005). وتم تمديد هذه النتيجة تبين أن التعرض لالتناظرية من عدوى بكتيرية (lipopolysaccharide في، LPS) أدى إلى ارتفاع مستويات خلوى في دماغ الجنين والدورة الدموية للأم، ولكن لم تسفر عن تغير تركيب خلوى مرنا في دماغ الجنين، مما يشير إلى الأم وليس استجابة مناعية الجنين (Oskvig وآخرون، 2012). وعلاوة على ذلك، تعرض الأم لIL-6 وحده إلى تغيرات سلوكية ونسخة مماثلة لتلك التي ظهرت بعد التعرض للبولي المحاكاة الفيروسي noninfective (I: C) (سميث وآخرون، 2007؛ Garbett وآخرون، في الصحافة). جلب هذه النتائج معا، والعدوى الفيروسية، وبولي (I: C) وIL-6 أدى ليس فقط في أنماط مماثلة من التغييرات نص في دماغ الجنين (Garbett وآخرون، في الصحافة، ولكن تم منع التغييرات السلوكية وTranscriptome على من قبل الإدارة) من IL-6 تحييد الأجسام المضادة التالية بولي (I: C) تعرض (سميث وآخرون، 2007). وبالتالي، فإن هذه النتائج تقدم دليلا على أن الإصابة بالأمراض المعدية المختلفة تسبب تفعيل النظامية الأمهات المناعة الذي يؤثر على الجنين عن طريق السيتوكينات المتداولة، IL-6 على وجه الخصوص. ولذلك، فإن مسار IL-6 قد تمثل هدفا واعدا لمنع الآثار الضارة للMIA على الدماغ النامية.

تحريض المرحلة الحادة البروتينات الاستجابة المناعية هو موثقة جيدا، لكنه لا يزال معظمهم من غير الواضح كيف يمكن لنظام الحث المناعي يمكن أن تؤثر على نمو الدماغ. وكانت الدراسات على الحيوانات الأخيرة أيضا المفيد في هذا الصدد، وتقديم أدلة على أن جهاز المناعة يتفاعل مع آليات النمو العصبي. أولا، تم العثور على الخلايا العصبية معرضة للخطر في الفئران IL-6 بالضربة القاضية (بوين وآخرون، 2011). وعلاوة على ذلك، تعديل للخلوى الموالية للالتهابات TNFα غيرت الاستقرار والتقليم من نقاط الاشتباك العصبي (لي وآخرون، 2010، وتبين أنها تلعب دورا في اللدونة متشابك وتقليم متشابك (بيتي وآخرون،). 2002؛ Stellwagen وMalenka، 2006). بالإضافة إلى ذلك، تم العثور على IL1β لتعديل قوة متشابك في الدوائر GABAergic (Serantes وآخرون، 2006) وعثر على مكان MHC أن تلعب دورا حاسما في النتيجة مسار النشاط يعتمد العصبية والاستقرار في الاتصالات النشطة (Shatz، 2009). وأخيرا، كان تفعيل دبقية حاسم لنشأة والهجرة والاستقرار الانتقائي للخلايا عصبية جديدة (تشونغ وبارس، 2011؛ ​​Ekdahl، 2012)، تقليم متشابك (Paolicelli وآخرون، 2011) واللدونة العصبية (بن عاشور وباسكوال، 2010 ). يوفر هذه البيانات دليلا مقنعا على أن الوظيفة المناعية المعدلة الآثار ليس فقط الخلايا العصبية ولكن أيضا يؤدي إلى تعديلات حاسمة في اتصال الدماغ. ومن المثير للاهتمام، وتتميز عملية المرض في SCZ التي كتبها overpruning من نقاط الاشتباك العصبي (فالودي وMirnics، 2011)، في حين ASD، وعدم التقليم المناسب و / أو الاستقرار المبكر من نقاط الاشتباك العصبي يمكن أن يؤدي إلى وجود فائض من الاتصالات المشبكية، مما أدى في نهاية المطاف ظهور فرط رد الفعل وفرط البلاستيك الدوائر العصبية (ماركرام وآخرون، 2007 وminicolumns القشرية تغييرها) (Buxhoeveden وآخرون، 2006؛. كازانوفا وآخرون، 2006). هذا يجادل بقوة أن هذا الجين * تفاعل البيئة في الدماغ البشري لديه نتيجة مختلفة في SCZ بدلا من ASD. ومن المهم أيضا أن نلاحظ أن طبيعة التغييرات النص، تدابير خلوى، والتشوهات الهيكلية التالية MIA تعتمد على مرحلة تنموية للجنين في وقت التعرض، وتوفير دليل على أن التوقيت الدقيق لMIA يمكن أن يؤدي إلى مضاعفات المرضية متميزة في النماذج الحيوانية (ماير وآخرون، 2007؛ فاطمي وآخرون، 2012؛ Kneeland وفاطمي، 2012). ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن ليس كل طفل من أم مصابة البكتريا أو فيروسي يطور حالة العصبية والنفسية (سيلتن وآخرون، 2010؛ وبراون، 2011). ولذلك فمن المرجح أن تأثيرات من MIA تعتمد على قوة الإصابة و / أو الجينات * تفاعل البيئة، وكذلك توقيت التنموي للإهانة. الدراسات على الحيوانات تدعم بقوة هذا الرأي كما MIA تعرض Nurr1 وDISC1 نماذج الماوس المعدلة وراثيا تفاقم الظواهر التشريحية والسلوكية. وعلاوة على ذلك، فمن المثير للاهتمام أن هذه الفئران أيضا عرضت توازن خلوى تغير دون التعرض MIA، مما يشير إلى أن بعض الطفرات في حد ذاتها يمكن أن تؤثر أيضا على الجهاز المناعي، وربما جعل كائن أكثر حساسية للإهانة المناعة (Abazyan وآخرون، 2010؛ Vuillermot وآخرون، 2012).

باختصار، الدراسات على الحيوانات من MIA ضرورية لفك رموز الطرق الجهاز المناعي يغير بنية الدماغ والربط وظيفة (Deverman وباترسون، 2009). ودمج هذه البيانات مع الملاحظات السريرية وبعد الوفاة البشرية أمرا بالغ الأهمية لفهم الجينات * تفاعلات البيئة التي تؤدي إلى ASD وSCZ الفيزيولوجيا المرضية. ومن الواضح أن الجينات هي متعددة الوظائف وأي تصنيف منهم إلى "متشابك"، "محصنة"، أو "فئات الدبقية" مصطنع إلى حد كبير. تنفيذ التقييم على أساس interactome مثل الجين المرجح تحليل الشبكة coexpression (WGCNA) (Mirnics، 2008؛ أولدهام وآخرون، 2008) سوف يكون السبيل الوحيد لفهم العلاقة الوظيفية بين شبكات الجينات وكيف يمكن أن الاضطرابات التي تدفع علم الأمراض.

الاستنتاجات


الخلل المناعي هو جزء لا يتجزأ من ASD وSCZ الفيزيولوجيا المرضية. الدراسات الوبائية، GWAS، دراسات الدماغ بعد الوفاة، المؤشرات الحيوية الطرفية، وMIA عن توفير المتقاربة دليل على وجود تأثير عميق من اضطرابات الجهاز المناعي على النمو العصبي التي هي ذات الصلة لASD / SCZ المسببات مباشرة. وعلاوة على ذلك، فإن وجود دائم الاضطرابات المناعية في المخ أثناء حياة الكبار ويرى أن هذه التغييرات هي المساهمة بشكل فعال في عملية المرض. ومع ذلك تبقى علامات الاستفهام وافرة. ومن غير المعروف ما إذا كان خطر لتطوير مرض يتطلب عدة ضربات الوراثية / البيئية أو تركيبة معينة من وراثية * يضرب البيئية. وعلاوة على ذلك، فإنه يبقى أن نحدد ما إذا كانت هذه التغيرات هي الجوانب الأساسية لكل اضطراب أو ما إذا كانت آليات التكيف / غير القادرة على التأقلم ردا على إهانة الأولية منفصلة. بغض النظر عن أصل هذه التغييرات، من المهم أن الأدوية المضادة للالتهابات تظهر أن يكون مفيدا في كل من عدد المرضى. مزيد من البحوث في هذه المجالات قد يحسن صحة غربلة قبل الولادة في العائلات وراثيا المعرضين للخطر، وقد تؤدي أيضا إلى استراتيجيات وقائية وعلاجية جديدة.

المراجع

  • Abazyan B، نومورا J، كنان G، إيشيزكا K، Tamashiro KL، Nucifora F، بوجوريلوف V، وآخرون 2010. التفاعل قبل الولادة من DISC1 متحولة وتنشيط جهاز المناعة ينتج النفسية للبالغين. بيول الطب النفسي 68: 1172 - 1181.
  • عبد الله MW، لارسن N، بستان J، Nørgaard بيدرسن B، تورسن P، مورتنسن EL، Hougaard DM. الأمنيوسي السيتوكينات الالتهابية السوائل: علامات المحتملة لضعف مناعي في اضطرابات طيف التوحد. العالم J بيول الطب النفسي. PMID: 22175527، تحت الطبع.
  • Almoguera B، Riveiro ألفاريز R، لوبيز كاسترومان J، دورادو P، لوبيز رودريجيز R، فيرنانديز نافارو P، باكا-غارسيا E، وآخرون. 2011. homozigosity ATA في المروج الجين IL-10 هو أحد عوامل الخطر ل الفصام في الإناث الإسبانية: دراسة حالة السيطرة. BMC ميد جينيه 12: 81.
  • Anney R، Klei L، بينتو D، ريغان R، كونروي J، ماجالهايس TR، كوريا C، وآخرون. 2010. الاشعة على نطاق الجينوم لالأليلات شيوعا التي تؤثر على خطر لمرض التوحد. همهمة مول جينيه 19: 4072 - 4082.
  • أريون D، أنجر T، لويس DA، ليفيت P، Mirnics K. 2007. الأدلة الجزيئية لزيادة التعبير عن الجينات المتعلقة الوظيفة المناعية وكوصي في قشرة الفص الجبهي في الفصام. بيول الطب النفسي 62: 711 - 721.
  • أشووود P، Enstrom A، Krakowiak P، هيرتز Picciotto I، هانسن RL، Croen LA، Ozonoff S، وآخرون. 2008. انخفاض عامل النمو المحول beta1 في التوحد: ارتباط محتمل بين التقلبات المناعة وضعف في النتائج السلوكية السريرية. J Neuroimmunol 204: 149 - 153.
  • أشووود P، Krakowiak P، هيرتز Picciotto I، هانسن R، عيد الفصح I، فان دي المياه J. 2011. السيتوكينات البلازما مرتفعة في اضطرابات طيف التوحد توفر دليل على ضعف المناعة، وترتبط مع نتائج سلوكية ضعف. الدماغ Behav إمان 25: 40 - 45.
  • Athanasiu L، Mattingsdal M، كالر AK، براون، غوستافسون O، Agartz I، Giegling أنا، وآخرون. 2010. يتم نسخ المتغيرات الجينات المرتبطة الفصام في دراسة الجينوم على نطاق النرويجية في لفيف الأوروبية الكبيرة. JPsychiatr الدقة 44: 748 - 753.
  • بارانزيني SE. 2009. وعلم الوراثة من أمراض المناعة الذاتية: منظور بالشبكة. داء أوبان IMMUNOL 21: 596 - 605.
  • بيتي EC، Stellwagen D، موريشيتا W، بريسناهان JC، ها BK، فون Zastrow M، بيتي MS، وآخرون. 2002. التحكم في قوة متشابك من قبل الدبقية TNFalpha. العلوم 295: 2282 - 2285.
  • بن عاشور S، باسكوال O. 2010. الدبقية: إن العديد من الطرق لتعدل اللدونة متشابك. نوروتشيم كثافة العمليات 57: 440 - 445.
  • بيرنشتاين HG، شتاينر J، Bogerts B. 2009. الخلايا الدبقية في الفصام: أهمية المرضية والعواقب المحتملة للعلاج. الخبراء القس Neurother 9: 1059 - 1071.
  • Bocchio Chiavetto L، بوان F، Zanardini R، بوبولي M، Michelato A، Bignotti S، طره GB، وآخرون. 2002. الشراكة بين المروج النسخ المتنوعة متعددة الأشكال انترلوكين 10 جينة وانفصام الشخصية. بيول الطب النفسي 51: 480 - 484.

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #2  
قديم 12-06-2015, 06:15 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
  
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي عادة يتم التعبير عن 15q11-13 GABA A مستقبلات الجينات biallelically في الدماغ بعد تخضع لديسريغولاتيون جينية في اضطرابات التوحد

 

http://hmg.oxfordjournals.org/content/16/6/691.full

ملخص

الكروموسوم البشري 15q11-13 هو مكان معقد يحتوي على جينات مطبوع، فضلا عن مجموعة من ثلاثة GABA A مستقبلات الوحيدات (جبر) GABRB3 genes-، GABRA5 وGABRG3. حذف أو ازدواجية 15q11-13 الجينات جبر يحدث في العديد من الاضطرابات العصبية النمائية الإنسان بما في ذلك متلازمة برادر ويلي (PWS)، متلازمة أنجلمان (AS) والتوحد. يتم تخفيض GABRB3 البروتين التعبير أيضا في متلازمة ريت (RTT)، التي تسببها طفرات في MECP2 على Xq28. على الرغم من Gabrb3 وأعرب عن biallelically في مخ الفأر، توجد بيانات متضاربة بشأن الوضع يطبع من الجينات 15q11-13 جبر في البشر. باستخدام الترميز الأشكال النووية المنفردة وتبين لنا أن كل الجينات جبر ثلاثة يتم التعبير عن biallelically في 21 عينة الدماغ السيطرة، مما يدل على أن هذه الجينات لا مطبوع في القشرة الإنسان العادي. ومن المثير للاهتمام، وأربعة من ثمانية التوحد واحدة من خمس عينات الدماغ RTT أظهرت monoallelic أو منحرفا للغاية التعبير أليلية واحد أو أكثر جبر الجيني، مما يشير إلى أن التقلبات جينية من هذه الجينات هو شائع لظهور هذه الاضطرابات السلوكية. كشف الكمي في الوقت الحقيقي تحليل RT-PCR من PWS وAS العينات مع الأب والحذف 15q11-13 الأمهات تحيز التعبير الأب من GABRB3، في حين أظهرت عينات الدماغ RTT انخفاض كبير في GABRB3 وUBE3A. أظهر مناعي لونين وتسلسل بيسلفيت في الخلايا العصبية SH-SY5Y أن MeCP2 بربط المواقع الدليل السياسي الشامل مثيلة داخل GABRB3. أظهرت دراساتنا السابقة أن الاقتران مثلي 15q11-13 في الخلايا العصبية يتوقف على MeCP2 وعطلت في RTT والتوحد القشرة. جنبا إلى جنب، وتشير هذه النتائج إلى أن MeCP2 بمثابة منظم لونين للتعبير الأمثل لكل من الأليلات من GABRB3 في الخلايا العصبية.

المقدمة

الكروموسوم البشري 15q11-13 هو مكان معقد يحتوي على جينات مطبوع تشارك في اثنين من العصبية متلازمة الاضطرابات برادر ويلي (PWS) ومتلازمة أنجلمان (AS). PWS، وهو اضطراب يتميز فرط الأكل مما يؤدي إلى السمنة مع خفيفة الى معتدلة التخلف العقلي، وينتج عن نقص الأب من 15q11-13. AS، تتميز التخلف العقلي الشديد مع عدم وجود الكلام والضحك غير مناسب المفرط، والناجمة عن الأمهات 15q11-13 نقص (1). غالبية PWS وAS الحالات (~70٪) نتيجة من دي نوفو الحذف تمتد المنطقة 4 ميجا بايت من 15q11-13. disomy أحد الأبوين (UPD) من كروموسوم الأمهات سبب آخر شائع (~25٪ من الحالات) من PWS، في حين أن الأب UPD هو سبب نادر من AS. الطفرات داخل أعربت أمهات مطبوع UBE3A الجينات، كافية للتسبب AS (2، 3)، وتحدث في ~10٪ من الحالات (1).
التوحد هو اضطراب النمو العصبي المعقدة التي تتميز ضعف في التفاعل الاجتماعي، والسلوكيات المحظورة والنمطية، والعجز في اللغة والتواصل (4). بالرغم من وجود عنصر وراثي قوي لمرض التوحد، تم تحديد عدد قليل من الجينات المرشحة (5). كروموسوم 15q11-13 هو واحد من المواضع الجينية المتورطين في التوحد، والازدواجية الأمهات في هذه المنطقة لا تزال واحدة من تشوهات الوراثية الخلوية الأكثر شيوعا وجدت في حالات التوحد مجهول السبب (6). أدلة إضافية من الربط وجمعية دراسات متعددة تشير تشارك 15q11-13 الجينات في مرض التوحد (+7 - 10).
متلازمة ريت (RTT) هو اضطراب النمو العصبي الشديد الذي يؤثر في المقام الأول الإناث والتي تسببها طفرات في العاشر مرتبطة MECP2 الجيني، والميثيل الدليل السياسي الشامل بروتين 2 (11). يتميز RTT في أوائل التنمية ما بعد الولادة الطبيعية تليها خسارة مفاجئة من المعالم التنموية حول 6-18 شهرا من العمر مما يؤدي إلى غياب الكلام، والتخلف العقلي الشديد وفقدان حركات اليد هادفة (12). مثل التوحد، يتم تصنيفها RTT كاضطراب النمو المتفشي (PDD)، وهو الوحيد من خمسة ثائق تصميم المشاريع مع سبب وراثي معروف (4). في دراسة جزيئية الأخيرة من الدماغ البشري بعد الوفاة، سواء RTT وعينات التوحد أظهرت عيوب التعبير في اثنين من الجينات 15q11-13، UBE3A وGABRB3، مما يشير إلى أن مسارات متداخلة وdysregulated في هذه الاضطرابات (13).
كروموسوم 15q11-13 يحتوي على مجموعة من ثلاثة GABA A مستقبلات الجينات الوحيدات، GABRB3، GABRA5 وGABRG3، ترميز مفارز مستقبلات الناقل العصبي المثبط للالغاما غاما حمض (GABA). وorthologues الماوس، الواردة ضمن كتلة syntenic على الصبغي 7qB5، يتم التعبير عن biallelically في الدماغ (+14 - +16)، ومع ذلك، توجد بيانات متضاربة حول الوضع يطبع من البشر 15q11-13 GABA A جينات مستقبلة الوحيدات (17 - 21). اقترحت دراسة مبكرة من GABRB3 التعبير في الخلد عداري الشكل والأنسجة البشرية الزغب العادية تفضيلية التعبير الجيني الأم (20). جبريل وآخرون. (21) الكشف في وقت لاحق 15q11-13 GABA تعبير مستقبلات في خطوط هجين بين الإنسان والفأر خلية جسدية متعددة تحتوي على الأم أو الأب الكروموسوم البشري 15، مما يشير إلى أن هذه الجينات هي غير مطبوع. ميغورو آخرون. (17) يقوم بنقل الخلية بوساطة microcell لخلق الماوس الهجينة A9 إيواء إما العادي الأب أو الأم الكروموسوم البشري 15. إن الإنسان أعربت أبويا الجينات مطبوع احتفظت يطبع طبيعية في الهجينة A9، ومع ذلك، فإن GABA وأعرب عن جينات مستقبلة فقط من كروموسوم الأب. Bittel وآخرون. (18، 19) أثبتت أدلة تدعم الأب التحيز التعبير عن GABA الإنسان جينات مستقبلة مع ميكروأري تحليلات. كلتا الدراستين، مقارنة الحذف وUPD خطوط الخلايا lymphoblastoid من PWS وAS المرضى، وجد التحيز الأب ثابت من GABRB3 والتعبير GABRA5 الجينات.
أدلة توحي إضافي ليطبع من الإنسان 15q11-13 GABA A مستقبلات يأتي من الخلافات توقيت تكرار أليل معين من تسلسل الجينوم بالقرب من GABA A جينات مستقبلة (22)، وفروق في التوقيت النسخ المتماثل بين المتماثلات الأبوية هي سمة من الجينات مطبوع (23) . كلاهما مطلوب مساهمات الكروموسومات الأبوية لتوقيت تكرار السليم لل15q11-13 GABA A جينات مستقبلة، مما يشير إلى التفاعلات العابرة بين homologs الوالدين (24). وعلاوة على ذلك، جمعية مثلي من 15q11-13 المجالات يحدث في الخلايا الليمفاوية الطبيعية، ولكن ناقصة في PWS وAS العينات، مما يدل على أن التفاعل عبر ينطوي على جمعية المتماثلات مطبوع معاكس (25). جمعية مثلي من 15q11-13 الأليلات GABRB3 يحدث في الخلايا العصبية الناضجة داخل الدماغ، وناقصة في RTT والتوحد (26).
وبما أن تورط 15q11-13 GABA A مستقبلات الجينات في الإنسان اضطرابات متعددة، بما في ذلك مرض التوحد، وتحديد نهائيا الوضع يطبع من هذه الجينات في الدماغ البشري أمر بالغ الأهمية لفهم دورها المحتمل في التسبب في اضطرابات النمو العصبي. في هذه الدراسة، تم استخدام الأشكال النووية المنفردة (النيوكلوتايد) في المنطقة ترميز GABRB3، GABRA5 وGABRG3 للتحقيق في التعبير أليلية النصوص من القشرة الدماغية. منذ عدة جينات مطبوع، بما في ذلك UBE3A، يحمل الخلايا العصبية محددة يطبع (16، 27 - +29)، وقد أجريت هذه الدراسة يطبع باستخدام ما بعد الوفاة أنسجة المخ البشري. والإنسان 15q11-13 GABA تم تحديد مستقبلات الجينات الوحيدات أن يكون التعبير biallelic على قدم المساواة في جميع العينات السيطرة، مما يدل على أن هذه الجينات لا مطبوع في العادية القشرة الأمامية. في المقابل، كشف تحليل التعبير أليلية أن أربع عينات التوحد مجهول السبب وعينة واحدة RTT أظهرت monoallelic أو منحرفا للغاية التعبير أليلية من GABA واحد أو أكثر من الجين المستقبل. وعلاوة على ذلك، أظهر التحليل الكمي للGABRB3 نص في PWS وAS عينات الدماغ دليل على وجود تحيز التعبير الأب عندما متحدر من والدين 15q11-13 مساهمة تفتقر. هذه النتائج تفسر الملاحظات السابقة بالانحياز الأب من GABRB3 التعبير، وتشير إلى أن تشوهات جينية في 15q11-13 التي تعمل على dysregulate GABRB3 التعبير قد يكون أمرا شائعا نسبيا في الأفراد المصابين بالتوحد دون التعديلات الوراثية الخلوية يمكن اكتشافها.

النتائج

عادة يتم التعبير عن الجينات 15q11-13 GABA A مستقبلات biallelically في القشرة، ولكن monoallelically أعرب في بعض العينات RTT والتوحد

من أجل تحديد بشكل قاطع إذا 15q11-13 GABA تعبير جينات مستقبلات المعرض مطبوع، تم تحليل التعبير أليلية في عينات الدماغ السيطرة من القشرة الأمامية، أدرجت منطقة برودمان 9. RTT والتوحد عينات الدماغ أيضا في تحليل لاختبار دليل على جينية التقلبات. تم عزل DNA و RNA من المجمدة عينات الدماغ بعد الوفاة مع فاصل زمني بعد الوفاة (PMI) <30 ساعة (التفاصيل في المواد التكميلية، الجدول S1). تم تحليل نسخة من كروموسوم رقم 15q11-13 من قبل مضان DNA الموقع التهجين (FISH DNA) في استخدام مسبار GABRB3 (26)، تهجين لعينات الدماغ على ميكروأري الأنسجة (30). وتم التحقق العادية disomic 15q11-13 مساهمات في جميع السيطرة، RTT وAUT عينات الدماغ (لا تظهر البيانات).
لتحديد الأشكال للتمييز التعبير أليلية، تم فحص تعدد الأشكال في المنطقة ترميز GABRB3، GABRA5 وGABRG3 للتغاير في عينات من الحمض النووي الجيني من القشرة الدماغية الإنسان. تم تحديد المورثات التي أليل معين انزيم الهضم تقييد المنتجات PCR أو عن طريق التسلسل المباشر. وكانت الترددات أليل تحت سيطرة واضطراب طيف التوحد العينات التي تم تحليلها مقارنة بالقيم التي أعلن عنها في قاعدة البيانات SNP (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) لrs2912582، rs140679 وrs140682 (الجدول 1). وكان تردد البيانات أليلية غير متوفر لrs20318 SNP داخل GABRB3، ومع ذلك تغاير لهذا SNP كان من الشائع في إطار دراسة السكان (الجدول 1).

الجدول 1.
ملخص الترددات أليل لتعدد الأشكال المستخدمة في تحليل التعبير أليلية

تم تحديد التعبير أليلية في عينات متخالف بواسطة RT-PCR، تليها أليل معين تقييد الهضم أو كدنا] تسلسل (الشكل 1). كل 21 الضوابط متخالف تحليلها أظهرت التعبير biallelic المساواة لكل GABA A بالمعلومات SNP جين مستقبلات الوحيدات (الجدول 2 وبيانات تمثيلية في الشكل 1). بالإضافة إلى ذلك، كما أظهرت العينة الضابطة واحد التعبير biallelic المتساوي للrs2912582 GABRB3 3'-UTR SNP (لا تظهر البيانات). حلل أظهرت معظم RTT (أربع من خمس سنوات) وأربعة من ثمانية عينات التوحد الدماغ التعبير biallelic المتساوي للGABA A جينات مستقبلات الوحيدات، ولكن أربعة من ثمانية التوحد بالمعلومات واحد من أصل خمسة عينات RTT بالمعلومات أظهرت التعبير monoallelic أو منحرفا للغاية، تلخيصها في الجدول 3 مع بيانات تمثيلية هو مبين في الشكل 1. كان التعبير عن GABA A مستقبلات النصوص لا يمكن كشفها في عدة RTT والتوحد عينات (ND، الجدول 3)، على الأرجح بسبب مستويات منخفضة جدا من التعبير، التي سبق وصفها لGABRB3 (13). تم التحقق من جودة النص بواسطة RT-PCR من الجينات التدبير المنزلي، GAPDH. جميع العينات، بما في ذلك RTT 1748، RTT 1815 وAUT 5173 أظهرت مستويات طبيعية من GAPDH بواسطة RT-PCR (لا تظهر البيانات)، مما يدل على أن مستويات GABA A مستقبلات نص لا يمكن اكتشافها على وجه التحديد في هذه العينات. العدد الكلي للعينات السيطرة تحليلها (21 كان) أكبر من عدد RTT (5) أو التوحد (8) العينات التي تم تحليلها لكل الجينات، مما يشير إلى أن التعبير monoallelic من 15q11-13 GABA A جينات مستقبلة ليس متغير في عموم السكان ولكن محددة إلى RTT وعينات من مرض التوحد.

الشكل 1.
يطبع تحليل 15q11-13 GABA A جينات مستقبلة. (A) الاستشرابية التسلسل تثبت التعبير biallelic متساو من GABRB3 (SNP rs20318) وGABRG3 في عينات السيطرة. تسلسل في لوحات العليا هي الحمض النووي ومتواليات في لوحات أقل الجيني هم من كدنا]. السهام السوداء تبرز SNP في كل اللوني. AUT 797 يظهر واضحا التعبير monoallelic من GABRB3 وGABRG3 وRTT 5214 قد انحرفت التعبير عن أليل T في GABRG3. والتسلسل كلا الاتجاهين الأمامي والخلفي لكل فرد وكانت الاستشرابية ثابت. (B) أليل محددة تحليل تقييد هضم GABRA5 يوضح العادي التعبير المساواة biallelic في الضوابط ومعظم التوحد والعينات RTT. تحتوي لوحة العليا لجنة التنسيق الإدارية I-هضم الحمض النووي الجيني من كل فرد ويحتوي على لوحة أقل المنتجات [كدنا لجنة التنسيق الإدارية I هضمها. لجنة التنسيق الإدارية I يقطع أليل C ولكن لا قطع أليل T من GABRA5 SNP. الضوابط والعديد من التوحد والعينات RTT تثبت التعبير biallelic على قدم المساواة، تم الكشف عن ولكن فقط أليل C من GABRA5 في AUT 5173.


الجدول 2.
النمط الجيني وأليلية التعبير النتائج للعينات سيطرة الدماغ


الجدول 3.
النمط الجيني والتعبير أليلية النتائج للعينات الدماغ RTT وAUT

15q11-13 GABA A مستقبلات الخسارة من biallelic التعبير يرتبط مع بروتين العيوب GABRB3 في عينات التوحد الدماغ

سابقا، وجدنا انخفاض كبير في البروتين GABRB3 في مجموعة فرعية من عينات التوحد الدماغ (13). لتحديد ما إذا كانت الخسارة من وbiallelic (لوب) تعبيرا عن GABA A جينات مستقبلات الوحيدات في عينات التوحد يرتبط مع انخفاض مستويات البروتين GABRB3، قارنا القيم البروتين السابقة GABRB3 تطبيع يحددها طخة مناعية شبه الكمي (13) بين مجموعات من الأفراد بناء في حالة التعبير أليلية. عينات التوحد مع لوب تعبير عن واحد أو أكثر 15q11-13 GABA A مستقبلات الوحيدات الجينات قد خفضت بشكل ملحوظ للغاية نسبة البروتين GABRB3 مقارنة مع الضوابط والتعبير عن biallelically عينات التوحد (الشكل 2 A). لم يكن هناك اختلاف في البروتين GABRB3 بين عينات الرقابة وعينات التوحد مع GABA biallelic تعبير مستقبلات (الشكل 2 A). وتشير هذه النتائج إلى أن الوضع أليلية التعبير عن 15q11-13 GABA A مستقبلات الجينات الوحيدات تتوقع العيوب البروتين التعبير عن GABRB3 في التوحد.

الرقم 2.
GABRB3 البروتين ونص المستويات في عينات التوحد الدماغ. (A) مستويات البروتين GABRB3 المنشورة سابقا (13) كنسبة يعني ± SEM من جميع العينات في كل فئة وتمت مقارنة بين الضوابط (شريط أبيض)، وعينات من التوحد مع التعبير biallelic (شريط رمادي فاتح) وعينات من التوحد مع لوب 15q11-13 GABA تعبير مستقبلات واحد على الأقل الجينات جبر (لوب، شريط رمادي غامق). عدد الأفراد المدرجة في كل فئة يظهر بين قوسين إلى جانب تسمية كل خ -axis. عينات لوب التوحد أظهرت أقل بكثير تعبير البروتين GABRB3 من الضوابط (P = 0.0004) وعينات التوحد biallelic (P = 0.004)، ولكن لم يكن هناك اختلاف كبير (NS) بين الضوابط وعينات التوحد biallelic. تم قياس (B) مستويات النص GABRB3 في التوحد والسيطرة على عينات القشرة المخية التي كتبها الكمي في الوقت الحقيقي وأظهرت مستويات RT-PCR. GABRB3 نسخة طبيعية لGAPDH لعناصر (شريط أبيض، تمثل متوسط ​​± SEM من سبع عينات) وعينات التوحد الفردية تمثل يعني ± SEM من مكررات ثلاثة لكل عينة التوحد. يشار إلى عينات لوب التوحد مع أشرطة رمادية داكنة والحانات رمادي فاتح تمثل عينات التوحد مع التعبير biallelic. اثنين من أربع عينات لوب التوحد، AUT 1174 وAUT 5173، عرضت بشكل ملحوظ انخفضت مستويات النص مقارنة مع الضوابط.

الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR ثم يقوم بنفس عينات [كدنا التوحد الدماغ تحليلها في الجدولين 2 و 3 لتحديد ما إذا كان الوضع التعبير أليلية يعكس مستوى النص الكامل. وعلى النقيض من اختلافات واضحة في بروتين GABRB3، كانت مستويات النص GABRB3 المتغيرة في عينات التوحد لوب التعبير. شخصين (AUT 1174 وAUT 5173) أظهرت انخفاضا كبيرا GABRB3 نسخة وشخصين (AUT 797 وAUT 4925) أظهرت مستويات النص لا تختلف كثيرا من الضوابط (الشكل 2 B). تم تنفيذ الكمية RT-PCR أيضا لGABRG3 وGABRA5. وكانت مستويات التعبير عن GABRG3 وGABRA5 على ما يبدو 1000 أضعاف أقل من GABRB3 عندما تطبيع GAPDH، ولكن الضوابط والتوحد والعينات RTT أظهرت انخفاض مستويات مماثلة من التعبير عن كل من GABRG3 وGABRA5 (التكميلي المواد، الشكل S1).

الكمية RT-PCR يكشف عن التحيز الأب في GABRB3 التعبير في 15q11-13 عينات الحذف وانخفاض كبير GABRB3 التعبير في RTT

لمزيد من التحقيق يطبع الآثار على GABRB3 التعبير، تم تنفيذ الكمي في الوقت الحقيقي تحليل RT-PCR على PWS وAS [كدنا الدماغ مع الحذف 15q11-13 الأب أو الأم، على التوالي (الشكل 3 A). كانت تسيطر الاختلافات في نوعية الحمض النووي الريبي لتطبيع GAPDH الجينات التدبير المنزلي. كان GABRB3 نسخة أقل بكثير من عينات مراقبة في كل PWS وAS عينات الحذف، ولكن كان عينات حذف PWS التعبير أقل بكثير من عينات AS الحذف، مما يشير إلى وجود تحيز الأب في التعبير الجيني عند منطقة 15q11-13 واحدة موجودة. PWS عينات UPD الأمهات، على الرغم من وجود نسختين من GABRB3، عرضت انخفاضا كبيرا التعبير GABRB3 بالمقارنة مع الضوابط، مما يشير إلى وجود تحيز التعبير الأب في حالة عدم وجود متحدر من والدين كروموسوم 15 مساهمة.

الرقم 3.
الكمية RT-PCR من 15q11-13 الجينات في القشرة الإنسان. تم إجراء الكمي التضخيم RT-PCR من GABRB3، UBE3A وSNRPN في التجارب ثلاث نسخ على بعد الوفاة كدنا] دماغ الإنسان من السيطرة، RTT، AS الحذف، PWS الحذف وPWS عينات UPD الأمهات. يتم عرض عدد من الأفراد تحليل لكل فئة بين قوسين تحت تسمية س -axis. تم تطبيع جميع الجينات ضد GAPDH تحكم الجينات التدبير المنزلي والقيم -axis ص تمثل يعني ± SEM من كل يعيد لجميع الأفراد في كل فئة. و(A) مستويات GABRB3 نسخة انخفاضا كبيرا في جميع الفئات اضطراب مقارنة مع الضوابط (يشار -values ​​P مع العلامات النجمية ومدرجة أدناه الشكل). AS الحذف وعينات حذف PWS تمت مقارنة وكانت أيضا مختلفة إلى حد كبير. (B) UBE3A التعبير كان أقل من ذلك بكثير في RTT وAS عينات الحذف وأعلى بكثير في عينات PWS UPD. (C) SNRPN التعبير كان غائبا في PWS الحذف وعينات UPD وانخفاض كبير في AS عينات الحذف.

UBE3A، جينة مطبوع أعربت أمهات، وSNRPN، وقد تم تحليل الجينات مطبوع أعرب أبويا كما جينات التحكم لالكمي RT-PCR مقايسة (الشكل 3 B و C). وعينات حذف AS أظهرت انخفاضا كبيرا التعبير UBE3A، أظهرت كما هو متوقع بالمقارنة مع الضوابط العينات حذف PWS أي تغيير في UBE3A التعبير، وكان PWS عينات UPD الأمهات ارتفاع كبير في مستويات UBE3A (الشكل 3 B). كما هو متوقع، كان SNRPN غائبة في PWS الحذف وعينات UPD (الشكل 3 C). AS عينات الحذف، ومع ذلك، أظهرت وجود خلل خفية لكنه مهم من المستغرب في SNRPN (الشكل 3 C).
وقد أظهرت عينات مخ الفأر -deficient كلا RTT وMecp2 سابقا من نقص في البروتين كبيرة GABRB3 (13). كما عرضت Mecp2 الماوس -deficient الدماغ عيب النسخي في Gabrb3، ولذلك أدرجت عينات الدماغ RTT في التحليل GABRB3 نسخة الكمي. كما هو متوقع من الدراسات الماوس، لوحظ وجود خلل كبير في GABRB3 نص في RTT المخ بالمقارنة مع التحكم (الشكل 3 A). على الرغم من أن تم الإبلاغ عن بيانات متضاربة حول التقلبات من Ube3a في Mecp2 الماوس -deficient (13، 31، 32)، وقد وجد انخفاض ملحوظ في UBE3A التعبير في RTT الدماغ (الشكل 3 B)، بما يتفق مع البروتين انخفضت لوحظ سابقا ( 13). على الرغم من MeCP2 بربط المروج من SNRPN (13، 26)، لم يلاحظ أي فرق في SNRPN نص (الشكل 3، بما يتفق مع صيانة يطبع العادية للSNRPN في RTT (C) 33)، والتعبير العادي في Mecp2 - الدماغ نقص الماوس (13، 34).

MeCP2 بربط تسلسل الحمض النووي intronic المصب من الجزر 5'-CPG في GABRB3 وGABRG3

العيوب GABRB3 التعبير في RTT وMecp2 دماغ الفأر -deficient (13) وقد تورط MeCP2 في تنظيم جينية من 15q11-13 GABA A مستقبلات. بالإضافة إلى ذلك، لوب التعبير عن 15q11-13 GABA A المستقبلات في عينة RTT واحدة وعينات التوحد متعددة مع وصف سابقا MeCP2 عيوب التعبير (30) تشير إلى أن MeCP2 يلعب دورا في تنظيم هذه الجينات. لتحديد ما إذا MeCP2 تشارك مباشرة في تنظيم GABA 15q11-13 A مستقبلات الجينات الوحيدات، لونين مناعي (رقاقة) قد أنجز على لونين عزل من خلايا العصبية SH-SH5Y الإنسان سلطة النقد الفلسطينية متباينة. وقد سبق أن أظهرت MeCP2 لربط المواقع الدليل السياسي الشامل مميثل بزخارف المجاورة تسلسل A / T (35)، لذلك تم تصميم الاشعال الشذرة بناء على هذه المعايير. وقد تبين المروج الميثيلي وأمهات من SNRPN أن يكون الهدف من MeCP2، وكان يستخدم كعنصر تحكم إيجابية (13، 26). وقد تم تحديد منطقتين داخل 5 'نهاية GABRB3 ومنطقة واحدة ضمن 5 "نهاية GABRG3 إيجابية بالنسبة للMeCP2 ملزمة الشذرة (الشكل 4 A). مواقع ملزمة رقاقة إيجابي ضمن المناطق intronic نحو 5 "نهاية الجينات. التجليد كان MeCP2 لا يمكن كشفها في موقع مماثل قرب نهاية 5 'من GABRA5.

الرقم 4.
MeCP2 بربط المواقع الدليل السياسي الشامل مثيلة داخل سلاسل intron من GABRB3 وGABRG3. (A) لونين مناعي من 48 ساعة التفريق بين الخلايا SH-SY5Y. DNA يمثل مساهمة لونين قبل مناعي، MeCP2 أب يمثل ونين immunoprecipitated مع MeCP2 الضد-C المحطة، وقبل المناعي (سلبي) مراقبة الأجسام المضادة. وتظهر الجينات يعاير للربط إلى يسار اللوحة. وقد استخدم المروج SNRPN كعنصر تحكم إيجابية (26). تظهر منطقتين من GABRB3 ومنطقة intronic من GABRG3 كشف MeCP2 ملزمة، ومع ذلك، MeCP2 ملزمة لGABRA5 كان لا يمكن كشفها. (B) تخطيطي من 2.5 كيلوبايت من 5 'نهاية GABRB3. يشار إلى الإكسونات الترميز مع مربعات مرقمة سوداء وصناديق رمادية تمثل 5'-UTR. خط متقطع فوق التخطيطي الجين يمثل موقع الجزيرة الدليل السياسي الشامل "نهاية 5. خطوط سوداء مع السهام أقل من الجينات تظهر الوضع النسبي للمنتجات الشذرة PCR (A) وخطوط مع الدوائر المرقمة أعلاه تظهر الجينات الوضع النسبي للمنتجات التسلسل بيسلفيت. وأظهرت نتائج التسلسل بيسلفيت من 48 ساعة متباينة الخلايا SH-SY5Y أدناه التخطيطي الجينات. كل سطر يمثل استنساخ الأفراد والدوائر وتشير المواقع الدليل السياسي الشامل. الدوائر مليئة تمثل المواقع الدليل السياسي الشامل للمثيلة ودوائر شاغرة تمثل المواقع الدليل السياسي الشامل unmethylated. النجوم فوق مواقع مثيلة بينت المواقع الدليل السياسي الشامل بزخارف تسلسل A / T المجاورة التي هي مواقع الربط قابلية عالية MeCP2 (35). (C) تخطيطي من 2.0 كيلوبايت من 5 'نهاية GABRG3 تبين تسلسل intronic ميثليته للغاية، كما هو موضح أن تكون إيجابية لMeCP2 ملزمة في (A).

للتأكد من أن النتائج الإيجابية الشذرة كان من المقرر أن ربط MeCP2 إلى المواقع الدليل السياسي الشامل ميثليته، تم إجراء التسلسل بيسلفيت. كان الحمض النووي الجيني من الخلايا SH-SH5Y بيسلفيت تحويلها وصممت الاشعال داخل المناطق رقاقة إيجابي عندما يكون ذلك ممكنا. الرقم 4 B و C توضح مناطق GABRB3 وGABRG3 التي تم تحليلها. على الرغم من أن المناطق تحليلها من الجزيرة GABRB3 الدليل السياسي الشامل كانت unmethylated تماما تقريبا، ومنطقة محددة MeCP2 المجاورة إنترون 3 أظهرت مثيلة الجزئي (الشكل 4 B). وبالمثل، التسلسل بيسلفيت المنطقة متجهة MeCP2 من GABRG3 أظهرت مستويات عالية من الدليل السياسي الشامل مثيلة (الشكل 4 C) كذلك يشير إلى أن كل من هذه السلاسل الجينومية وأهداف MeCP2.

الميثيلي مناطق محددة MeCP2 من GABRB3 وGABRG3 في الدماغ البشري

تم تحليل الحمض النووي الجيني الدماغ البشري من خلال التسلسل بيسلفيت لتحديد ما إذا كان مثيلة لوحظ في الخلايا SH-SY5Y موجود أيضا في الدماغ. وقد تم تحليل 10 على الأقل الحيوانات المستنسخة لكل فرد وعدد من الأفراد المدرجة في كل فئة والمدرجة أسفل كل رسم بياني (الشكل 5). النسبة المئوية للمواقع مثيلة تعكس عدد من المواقع الدليل السياسي الشامل مميثل مقسوما على جميع المواقع مثيلة المحتملة التي تم تحليلها. عينات الدماغ السيطرة أظهرت أنماط مثيلة مماثلة لمثيلة لوحظ في الخلايا SH-SY5Y (الشكل 4 B و C)، كما هو موضح في الشكل رقم 5 أ و ب.

الرقم 5.
التسلسل بيسلفيت من الدماغ البشري والحمض النووي الدم. تم تنفيذ التسلسل بيسلفيت على الحمض النووي الجيني البشري من السيطرة، PWS، AS والأفراد التوحد. وقد تم تحليل 10 على الأقل الحيوانات المستنسخة لكل فرد المدرجة، ويعكس في المئة مثيلة نسبة المواقع الدليل السياسي الشامل مثيلة من العدد الإجمالي للمواقع الدليل السياسي الشامل يعاير لجميع الحيوانات المستنسخة من كل عينة. يتم رسم النتائج على النحو يعني ± SEM من مثيلة في المئة لجميع العينات المدرجة في كل فئة. يتم عرض عدد من الأفراد تحليلها في كل فئة تحت تسمية س -axis. (A) GABRB3 تسلسل intronic ميثليته هو مبين في الشكل 4 كان (B) بيسلفيت التسلسل في الدماغ الحمض النووي الجيني من السيطرة، PWS الذكور، PWS أنثى، AS وعينات من مرض التوحد. لم PWS عينات الذكور وعينات التوحد ليس لديها مثيلة تختلف كثيرا من الضوابط. في المقابل، فإن الأنثى عينات PWS وAS العينات أظهرت انخفاضا كبيرا مثيلة GABRB3. (B) تسلسل ميثليته من GABRG3 إنترون 1 هو مبين في الشكل 4 كان (C) بيسلفيت التسلسل في السيطرة، PWS، AS والتوحد عينات الدماغ البشري. جميع العينات التي تم تحليلها أظهرت مماثل مستوى عال من مثيلة. ومقارنة (C) التحكم في الدماغ الحامض النووي من GABRB3 إنترون 3 مع مثيلة في عينات الدم سيطرة الإنسان وعينة من الحيوانات المنوية واحد. عينات الدم والسائل المنوي انخفاضا في مثيلة مقارنة مع الدماغ (P <0.02 في الدم). وتمت مقارنة (D) التحكم في الدماغ ومثيلة الدم المستويات لGABRG3 إنترون 1 و لم يلاحظ أي اختلاف كبير.

لتحديد ما إذا كان مثيلة لاحظ الوالدين، PWS الحذف، AS الحذف وPWS الأم عينات UPD تم تحليل أليل معين. الخلافات البارزة ومن المثير للاهتمام، وعينات PWS معروضة في GABRB3 مثيلة على أساس الجنس، لم تراع الفوارق بين الجنسين ولكن مشابهة لعناصر أو فئات اضطرابات أخرى. كل من الإناث PWS وAS عينات (الذكور والإناث) أظهرت أوجه قصور مهمة في مثيلة لGABRB3 إنترون 3 بالمقارنة مع عينات التحكم (الشكل 5 أ)، مما يوحي بأن مثيلة GABRB3 ليس بين الوالدين ومن أصل معين ولكن قد تعتمد على وضعها الطبيعي مساهمة الكروموسومات متحدر من والدين. وعلى النقيض من GABRB3، لم استنساخ GABRG3 لا تظهر فروق ذات دلالة إحصائية في مثيلة بين الضوابط وPWS / AS العينات، على الرغم من أن المستويات العامة للمثيلة كانت عالية (الشكل 5 B). وقد تم تحليل عينات التوحد الدماغ للتحقيق في احتمال تشوهات الحامض المساهمة في التعبير لوب في بعض هذه العينات. لم يلاحظ أي فرق في مثيلة بين العينات التوحد وضوابط لGABRB3 أو GABRG3 (الشكل 5 أ و ب).
لاختبار الفرضية القائلة بأن مثيلة intronic من GABRB3 يرتبط بشكل إيجابي مع التعبير، ونحن ننظر في أنماط مثيلة في مصادر الأنسجة الإضافية. تحليل GABRB3 مثيلة في الدم والسائل المنوي وكشف مستوى أقل بكثير من مثيلة مقارنة مع القشرة (الشكل 5 C)، مما يعني أن زيادة مثيلة من GABRB3 إنترون 3 تكتسب biallelically في الدماغ. وعلى النقيض من الأنسجة محددة GABRB3 مثيلة، كان GABRG3 مثيلة عالية على قدم المساواة في الدماغ والدم (الشكل 5 D).

نقاش

لأن الكروموسوم البشري 15q11-13 متورط في الاضطرابات العصبية النمائية متعددة، فمن الأهمية بمكان أن نفهم كيف يتم تنظيم الجينات في هذا الموضع والتعبير عنها. في هذه الدراسة، لدينا حل النزاع حول يطبع من 15q11-13 GABA كتلة المستقبل من خلال إظهار أن هذه الجينات يتم التعبير عن biallelically في القشرة الجبهية الإنسان حتى الآن يتم التعبير عن aberrantly في الاضطرابات العصبية النمائية متعددة. كما توفر البيانات لدينا أدلة على التأثيرات العابرة مثلي على مستويات التعبير عن GABRB3، كعينات مع الوالدين إظهار مساهمة التعبير دون المستوى الأمثل واحد. حددنا كل من الآثار العابرة والجنس على مثيلة الدماغ محددة من تسلسل intronic من GABRB3 التي هي بمثابة موقع ملزم للMeCP2. وأخيرا، قدمنا ​​الأدلة الداعمة التي MeCP2 غير منظم الإيجابي للGABRB3 التعبير واقتراح دور الآلية رواية لMeCP2 كمنشط في التعبير الجيني.
بينما يطبع يتميز جيدا لبعض 15q11-13 الجينات، مثل SNRPN (36) وUBE3A (27، 28)، ووضع يطبع من GABA قد شكك كتلة مستقبلات (+18 - 21). قمنا بتحليل مباشرة التعبير أليلية من 15q11-13 GABA A مستقبلات الجينات الوحيدات في الدماغ البشري وأفيد بأن GABRB3، GABRA5 وGABRG3 يتم عادة أعرب biallelically في القشرة المخية الجبهية، ودعم النتائج السابقة في الماوس (14، 15). ومن المثير للاهتمام، اكتشفنا وجود تحيز الأب تعبيرا عن GABRB3 في عينات الدماغ مع واحدة 15q11-13 المساهمات الأبوية، كما لوحظ سابقا في PWS الإنسان وخطوط الخلايا AS lymphoblastoid (18، 19) وبوساطة microcell نقل كروموسوم (17). نحن نفترض أن يتم التعبير عن GABRB3 أكثر كفاءة من كروموسوم الأب من كروموسوم الأمهات في عزلة لأن كروموسوم الأب، تحتوي على العديد من الجينات مطبوع أعرب أبويا، لديها بطبيعتها تكوين لونين أكثر نشاطا من الكروموسوم الأمهات. لم يكن هناك أي دليل على وجود تحيز الأب في سبع عينات مختلفة تحكم متخالف مع المساواة التعبير GABRB3 biallelic (الجدول 2)، مما يشير إلى أن الأمهات عيب GABRB3 التعبير انقاذهم من قبل تكامل مع الأب 15q11-13 أليل.
على الرغم من وجود 15q11-13 المساهمات متحدر من والدين، RTT واحدة وأربع عينات التوحد الدماغ أظهرت خسارة التعبير biallelic متساو من واحد أو أكثر من GABA 15q11-13 A جينات مستقبلات الوحيدات (الجدول 3). على الرغم من أن لوحظ لوب التعبير عن كل ثلاثة من 15q11-13 GABA A مستقبلات الجينات الوحيدات، كان GABRB3 وأعرب معظم غاية وهي الأكثر ملاءمة لاضطرابات التوحد. عينات التوحد مع لوب التعبير عن أي واحد من GABA 15q11-13 وكان مستقبلات الجينات الوحيدات انخفاض كبير في مستويات البروتين GABRB3 مقارنة العينات مع التعبير biallelic. وعلاوة على ذلك، عينة واحدة، AUT 797، متخالف لجميع GABA A ثلاثة جينات مستقبلة، أظهر لوب التعبير لكلا GABRB3 وGABRG3 (الشكل 1). هذه الملاحظات تشير إلى أن العيوب في عينات التوحد موجودة في جميع أنحاء GABA 15q11-13 كتلة المستقبل وربما يرجع ذلك إلى التقلبات جينية من أليل واحد الوالدين. وكانت عينات من الحمض النووي الأبوية غير متوفرة لعينات الدماغ بعد الوفاة، وبالتالي فإن أصل الوالدين من أليل أعرب غير معروف حاليا.
كنا نتوقع GABRB3 نص على أن تخفض بشكل كبير في العينات مع لوب التعبير، ومع ذلك، مستويات النص المترابطة للبروتين انخفاض في اثنين فقط من أربع عينات التوحد مع لوب التعبير. هذا التناقض يمكن تفسير جزئيا خلفيات وراثية معقدة من عينات التوحد. تم الكشف عن أية طفرات ضمن تسلسل ترميز GABRB3 في عينات مرض التوحد، ولكن الاختلافات في تسلسل التنظيمية قد يؤثر بشكل كبير النسخ والاستقرار النصوص. ومن المثير للاهتمام، وGABRB3 أفيد تعدد الأشكال المروج مؤخرا لإضعاف النشاط النسخي في مقايسة luciferase المراسل (37)، ولكن تم العثور على هذا التعدد في كثير من الأحيان ضمن عينات لدينا، ولا يمكن تفسير الاختلافات في GABRB3 التعبير (لا تظهر البيانات). بدلا من ذلك، الفروق الفردية في التنظيم بعد النسخي من GABRB3 داخل عينات التوحد قد يفسر الاختلافات بين النص والبروتين. بالإضافة إلى ذلك، GABA A وقد ثبت مستقبلات الوحيدات الجينات لعرض مجمع تنسيق تنظيم (38)، وبالتالي قد تكون مسؤولة آلية التعويض عن الاختلافات النسخي لوحظ في بعض العينات التوحد الدماغ.
وتمشيا مع الجينات وأعرب بنشاط، والمروج من GABRB3 كان hypomethylated، ولكن منطقة intronic المجاورة ومميثل أكثر شدة في الدماغ البشري مما كانت عليه في الدم (الشكل 5 C). وتبين لدينا بيانات الوقت الحقيقي RT-PCR الكمية التي القشرة الدماغية لديها مستويات عالية من GABRB3 التعبير (الشكل 3 أ)، في حين أن الخلايا lymphoblastoid لها بالكاد يمكن كشفها GABRB3 مستويات التعبير أقل من 1/1000 من مستويات النص الدماغ (لا تظهر البيانات) . الحامض النووي داخل المناطق intronic أو بين الجينات وقد وصفت سابقا لإضفاء تأثير إيجابي على التعبير الجيني (39، 40)، ولذا فإننا نقترح أن مثيلة intronic من GABRB3 يرتبط بشكل إيجابي مع التعبير. في حين PWS وAS عينات الدماغ لم تكشف الأم المنشأ أنماط مثيلة محددة في GABRB3 وGABRG3، AS عينات الحذف وعينات الإناث PWS خفضت بشكل ملحوظ من مستويات GABRB3 إنترون مثيلة. وhypomethylation كل من عينات AS وPWS تشير إلى أن العابرة الآثار بين الأليلات الأبوية تعمل على تنظيم مستويات الحامض المناسبة في هذا الموضع في القشرة. الفرق بين الجنسين في عينات PWS لGABRB3 كان غير متوقع، ولكن، Liljelund وآخرون. (41)، كما وجدت بين الجنسين وبين الوالدين والمنشأ الآثار على Gabrb3 تعبير البروتين في الفئران متخالف لصغير Gabrb3 الحذف التي تضم منطقة syntenic للمواقع مثيلة إنترون 3. لم عينات السيطرة والتوحد الدماغ لا يحمل آثار الجنسين على مثيلة والتوحد العينات مع لوب التعبير لم يكن لديهم عيوب مثيلة داخل المناطق يعاير من GABRB3 أو GABRG3 (الشكل 5). ربما، وانخفاض كبير في التعبير MeCP2 الملاحظة في عينات التوحد مع التعبير لوب (30، 42 قد) يكون الخلل الجيني الرئيسي مما تسبب dysregulated التعبير GABRB3. بالإضافة إلى ذلك، عيوب مثيلة قد تكون موجودة في المناطق البعيدة داخل أو بالقرب GABRB3 باستخدام تقنيات عالية الإنتاجية في عينات التوحد مع لوب GABA 15q11-13 A التعبير مستقبلات في الدراسات المستقبلية.
وصفناها سابقا عملية تنظيم تنمويا من الاقتران مثلي من الإنسان 15q11-13 GABRB3 الأليلات في الدماغ الطبيعي أن تعاني من عجز في PWS، AS، RTT وعينات التوحد (26). أوجه القصور في الخلايا العصبية عبر تم تفاعلات 15q11-13 المجالات ارتباطا مباشرا MeCP2 التي كتبها الاجتثاث من MeCP2 ملزمة في الخلايا العصبية SH-SY5Y أن يخفف كثيرا من الاقتران من GABRB3 الأليلات (26). على الرغم من MeCP2 طفرة أو نقص ليست كافية للتسبب لوب التعبير عن 15q11-13 GABA A جينات مستقبلات في جميع العينات RTT والتوحد، نتائجنا تشير إلى أن عبر التفاعلات بين المتماثلات 15q11-13 الوالدين تسهم في السليم العادي التعبير الجيني biallelic داخل GABA A مجال مستقبلات. الانخفاض الكبير غير المتوقع للSNRPN التعبير في عينات AS الحذف (الشكل 3 C) تشير إلى أن عبر تفاعلات مهمة للحصول على أفضل مستويات التعبير الجيني داخل 15q11-13. وتشير البيانات المتوفرة لدينا أن التعبير monoallelic من GABRB3 لا تحدث في الدماغ العادي، مما يوحي بأن التعبير biallelic من GABRB3 يتم الاحتفاظ بنشاط. نحن نفترض أن قربها من الكتلة مستقبلات GABA 15q11-13 إلى الجينات مطبوع يتطلب عملية نشطة فيه كل GABRB3 الأليلات المنتسبين فعليا من أجل أن تتجلى على النحو الأمثل من كل الأليلات.
عينات RTT مع التعبير biallelic أيضا خفضت بشكل ملحوظ GABRB3 التعبير (الشكل 3 أ)، تورط دورا إيجابيا لMeCP2 في تنظيم GABRB3 التعبير عن طريق الربط بين المواقع الدليل السياسي الشامل مثيلة في كل من رابطة الدول المستقلة والعابرة. نموذج هو موضح في الشكل 6 يوضح احتمالين لتفسير انخفاض biallelic والتعبير monoallelic من GABRB3 في RTT الدماغ. في الدماغ العادي، MeCP2 ملزمة لINTRON 3 مواقع مثيلة يعمل على تنظيم إيجابيا GABRB3 التعبير من خلال جلب كل من الأليلات الأبوية إلى موقع نووي مع الآلات النسخي المثلى، مثل مصنع النسخ (43). في حالات انخفاض التعبير biallelic، لا يتم إقران 15q11-13 المتماثلات بسبب النقص في MeCP2، ونسخه لا كروموسوم الوالدين على النحو الأمثل. وبالمثل، Mecp2 الفئران -deficient أيضا يحمل انخفاض شقين كبير في Gabrb3 على الرغم من التعبير biallelic العادي (13). في التوحد والعينات RTT مع التعبير monoallelic، وتعطلت الاقتران، ولكن جينية إضافية أو خلل جيني يمنع النسخ من أليل واحد (الشكل 6). على الرغم من أننا التكهن بأن أليل الأمهات صامت، وذلك بسبب أدلة على وجود تحيز الأب في التعبير (الشكل 3 أ)، وأصل الوالدين من الأليلات في التوحد وRTT عينات بعد الوفاة الدماغ غير معروف حاليا.

الرقم 6.
نموذج للمشاركة MeCP2 في التنظيم الإيجابي للGABRB3 التعبير في الدماغ. وتظهر الصبغيات الأبوية للأم وكما الوردي (الأم) والأزرق (الأب) الخطوط المنقطة، على التوالي. حجم السهام يمثل المستويات النسبية في التعبير الجيني. وحدة النسخ الأب محددة كبيرة من SNRPN من خلال نص العقاقير من UBE3A هو مبين في شكل سحابة. في عينات المخ المعتادة MeCP2 بربط المواقع الدليل السياسي الشامل مثيلة داخل إنترون من GABRB3 على كل من الكروموسومات ويعزز GABRB3 التعبير والاقتران مثلي كتبها توطين كل من الأليلات لمساحة النسخ نشط مثل مصنع النسخ. في المرضى الذين يعانون متلازمة ريت مع طفرة MeCP2 أو نقص، وتعطلت الاقتران مثلي من 15q11-13، كما هو موضح سابقا في ثاتشر وآخرون. (26). في RTT الأفراد مع انخفاض التعبير biallelic الأليلات كل من الأم والأب وكتب عند مستويات منخفضة بسبب موقعها النووي دون المستوى الأمثل. الأفراد مع لوب التعبير قد يكون لها عيب جينية إضافية مما يؤدي إلى تخفيض الانتقائي للأليل واحد (ممثلة في X). لأن 15q11-13 الحذف يؤدي إلى فقدان الاقتران مثلي والتحيز الأب في GABRB3 التعبير، ونحن نفترض أن الأليل الأب وأعرب عن تفضيلي في مثل هذه الحالات.

في هذا التقرير نعرض بواسطة رقاقة وتسلسل بيسلفيت أن MeCP2 بربط intronic متواليات الدليل السياسي الشامل مثيلة داخل GABRB3 في خلايا SH-SH5Y الإنسان متباينة (الشكل 4). على الرغم من أن ينظر إليها عادة على أنها قامع النسخي (44، 45)، وقد تم مؤخرا أظهرت MeCP2 غير مباشر لتنظيم إيجابا على الجينات المستهدفة عامل التغذية العصبية الدماغي (46) والتعبير الجينوم على نطاق التنميط التحليلات أثبتت العديد يحتمل أن تكون أسفل تنظيم الجينات مع MeCP2 نقص (47 - 49). في نموذجنا (الشكل 6)، نقترح أن ربط MeCP2 إلى مواقع الدليل السياسي الشامل مميثل الدماغ محددة داخل GABRB3 يؤثر إيجابيا التعبير من خلال الترويج عبر التفاعلات بين المتماثلات وتنظيم إيجابيا لونين في رابطة الدول المستقلة. Horike وآخرون. (34) سبق وصفها دور للMeCP2 كمنظم لونين حلقات هذا التعبير الصمت الجينات. نحن نفترض أن ملزمة لمواقع متعددة في رابطة الدول المستقلة في GABA A كتلة المستقبل، MeCP2 يعزز تشكيل هياكل لونين مواتية للنسخ النشط، كما يتضح من قربها من مصنع النسخ النشط في النموذج في الشكل 6.
GABA هو الناقل العصبي المثبط الرئيسي في الدماغ، ويلعب دورا مهما في وظيفة الدماغ. انقطاع جزئي من الخلايا العصبية GABAergic في القشرة من الفئران يسبب نوبات والقلق والسلوك الاجتماعي ضعاف، بما يتفق مع GABA مما يشير إلى عيوب المساهمة في مسببات اضطرابات التوحد (50). على عكس GABRB3، GABRA5 وGABRG3 البروتينات لا توطين في المقام الأول في القشرة المخية (+51 - 53)، بما يتفق مع البيانات التعبير لدينا (المواد التكميلية، الشكل S1). حذف كل من Gabra5 وGabrg3 لا يسبب النمط الظاهري واضح في الفئران (54، 55)، ومع ذلك، Gabrb3 الفئران -deficient الظواهر المعرض مثل المضبوطات، وتشوهات النوم والسلوكيات النمطية تتفق مع خصائص AS، RTT والتوحد (55).
التداخل الوراثي والمظهري في RTT والتوحد وAS تشير إلى أن تداخل المسارات الجزيئية وdysregulated في هذه الاضطرابات النمائية العصبية مماثلة. وإن كان نادرا، MECP2 تم الإبلاغ عن الطفرات في الأفراد المشخصة سريريا مع AS أو التوحد (56، 57)، وMECP2 تم الإبلاغ عن الطفرات جنبا إلى جنب مع إعادة ترتيب في 15q11-13 في الأشخاص الذين يعانون RTT (58). في هذه الدراسة تبين لنا أن GABRB3، جين 15q11-13، وينظم إيجابيا MeCP2 وبشكل ملحوظ انخفاض في كل من RTT وAS. الملاحظات السريرية للشذوذ EEG نموذجية من AS في المرضى الذين يعانون RTT دعم مشاركة GABRB3 في الظواهر الصرع المشتركة في هذه الاضطرابات (59، 60). الازدواجية الأمهات من 15q11-13، بما في ذلك GABRB3 تحدث في نسبة صغيرة من الأفراد المصابين بالتوحد، إلا أنه من غير الواضح كيفية تأثير هذه الازدواجية GABRB3 التعبير في الدماغ. وعلى الرغم من توقع زيادة عدد النسخ لزيادة التعبير، بياناتنا تظهر معقدة عبر تنظيم GABRB3 في الدماغ البشري مما يدل على أن الانحراف عن العادي مساهمة الكروموسومات متحدر من والدين قد يؤثر سلبا GABRB3 التعبير. كما يوفر دراستنا الحالية دليل على التقلبات جينية معقدة من GABA 15q11-13 A كتلة المستقبل في عينات التوحد مجهول السبب مع العيوب البروتين GABRB3، مما يشير إلى أن المسارات الجزيئية المشتركة وdysregulated في الاضطرابات العصبية النمائية ذات الصلة.

المواد والأساليب

عينات الدماغ بعد الوفاة الإنسان

أمامي المجمدة قشرة الدماغ (منطقة برودمان 9) تم الحصول على عينات من الأنسجة برنامج التوحد من جامعة ماريلاند الدماغ والأنسجة بنك الاضطرابات العصبية النمائية، ومركز هارفارد نسيج الدماغ الموارد وجامعة ميامي الدماغ والأنسجة بنك الاضطرابات العصبية النمائية. وقد تم اختيار عينات الدماغ من الجثث البشرية حيث كان PMI <30 ساعة. وتقدم سبب الوفاة، وPMI معلومات إضافية حول كل عينة الأنسجة في المواد التكميلية، الجدول S1. تم تخزين جميع العينات في -80 ° C إلى الحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبي.

تحليل البصمة الدماغ البشري

تم عزل الحمض النووي الجيني الدماغ البشري من قشرة الدماغ المجمدة مع Puregene ® DNA كيت تنقية (نظم Gentra). وقد تم تحديد تعدد الأشكال داخل المناطق ترميز كل الجينات باستخدام متصفح UC سانتا كروز الجينوم (http://genome.ucsc.edu) وقاعدة بيانات NCBI SNP (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). الاشعال تستخدم لتضخيم PCR تم العثور على عينات من الحمض النووي الجينومية لالتنميط الجيني في المواد التكميلية، الجدول S2. تسبب rs2912582 تعدد الأشكال وrs140682 تم تحديد الفرق انزيم الهضم قيود الانقسام والمورثات بعد 3 ساعات من الهضم مع وجود فائض من ScrFI (rs2912582) أو ACCI (rs140682). تم استخدام التسلسل المباشر لالوراثي rs20318 تعدد الأشكال وrs140679 (UC قسم ديفيس من مرفق العلوم البيولوجية تسلسل الحمض النووي).
تم تحليل التعبير أليلية كل SNP في الأفراد متخالف من قبل نفس الأساليب المذكورة أعلاه لالتنميط الجيني. تم استخراج الحمض النووي الريبي من الأنسجة القشرة الدماغية الإنسان المجمدة باستخدام TRIzol كاشف (إينفيتروجن). تم قياس تركيزات RNA مع معمل NanoDrop ® استخدمت-D 1000 معمل وذات جودة عالية RNA لتخليق [كدنا]. تم تصنيعه [كدنا من واحد أو اثنين ميكروغرام من الدناز I (إينفيتروجن) RNA المعالجة، مع بنسبة ضئيلة (DT) التمهيدي وSS II الناسخ العكسي (إينفيتروجن). تم إنشاء ضوابط السلبية لكل فرد دون إضافة الإنزيم SS II الناسخ العكسي لضمان التلوث الجيني DNA أو التضخيم غير محددة لم يحدث. حوالي 50-100 نانوغرام من [كدنا الدماغ وPCR تضخيم مع ظروف التفاعل القياسية باستخدام الحدود إنترون-إكسون تمتد الاشعال وجدت في المواد التكميلية، الجدول S2. نفس الاشعال DNA الجينومية تستخدم لتضخيم GABRB3 استخدمت 3'-UTR لكدنا] التضخيم. واستخدمت عينات سلبي السيطرة كدنا] (-RT) لجميع ردود الفعل RT-PCR لضمان التضخيم محددة من المنتجات كدنا].

الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR من [كدنا الدماغ البشري

تم تنفيذ الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR باستخدام نظام روش LightCycler وفقا لتعليمات الشركة الصانعة مع 1 × DNA سيد SYBR الأخضر I العازلة رد فعل (روش)، 3 م م MgCl 2، 0،5 μ م الاشعال و20-25 نانوغرام من كدنا]. لتأكيد التضخيم التحديد، كانت منتجات PCR تخضع لتحليل منحنى ذوبان، والتي لوحظ قمة واحدة فقط. تم قياس القيم المعبر مع تحليل LightCycler برنامج الإصدار 2.0 وأجريت الكمي النهائي باستخدام طريقة CT المقارن (النظم البيولوجية التطبيقية). تم تنفيذ ثلاثة ردود الفعل تكرار لكل فرد في الجينات تحليلها وكانت القيم تطبيع إلى الجينات التدبير المنزلي GAPDH. وقد صممت الاشعال تمتد واحد على الأقل الحدود إنترون-إكسون والمذكورة في المواد التكميلية، الجدول S2.

مناعي لونين

وقد أعد لونين من الخلايا العصبية SH-SY5Y الإنسان وتنقيته بواسطة اليوريا التدرج الطرد المركزي كما هو موضح سابقا (61، 62). أجريت مناعي، عكس يشابك وPCR التضخيم كما هو موضح سابقا (26، 63) مع تعديلات طفيفة. لفترة وجيزة، وهضم لونين مع فريق من الانزيمات التقييد (نيو إنجلاند Biolabs) إلى 100-700 شظايا غليان الحمض النووي. وprecleared لونين يتفاعل مع PrecipHen الخرز agarose (إيفس مختبرات) وحدها، ثم مع استيعابها قبل IGY الدجاج (إيفس مختبرات)، يليه الخرز agarose. وقد حضنت لونين Precleared بين عشية وضحاها مع 5 ميكروغرام من-C محطة مكافحة MeCP2 (26) أو مع المبالغ المعادلة من IGY قبل المناعة كجهاز تحكم عن غير محددة وملزمة. تم تنفيذ PCR التضخيم لمدة 31 دورات مع واحد على عشرين من المنتجات IP في رد فعل تحتوي على 1 متر البيتين، 1 × إينفيتروجن العازلة، 1 U طق (إينفيتروجن)، 4 م م MgCl 2، 2،5 م م dNTPs و 0.4 μ م من الاشعال التالية: GABRB3 5'-F: CCAGAATCTCTTTCCAAACGA. R: CATCGACATGGTTTCCGA)، GABRB3 إنترون 3 (F: CTTGGGGTCCCTGCATTTAA؛ R: AACAGCTTGGCGTGGTCAAA)، GABRG3 (F: GGAGTGTGGGGACTCAGATTA؛ R: TGGAAGGTGTGTGTGTGTGTT)، GABRA5 (F: CATCACGTTTTCAGTGGCTTT؛ R: TCTGGGGGTTTTCTGAAGTT)، SNRPN (26).

التسلسل بيسلفيت

تم عزل الحمض النووي الجيني من الخلايا SH-SY5Y والأنسجة البشرية مع Puregene ® DNA كيت تنقية (نظم Gentra) وفقا لبروتوكول الشركة الصانعة. وقد تم قياس العائد DNA مع معمل NanoDrop ®-D 1000 معمل وكانت تستخدم 1 ميكروغرام من الحمض النووي الجيني لتحويل بيسلفيت مع مجموعة CpGenome ™ DNA تعديل التالية بروتوكول الشركة المصنعة (Chemicon الدولية). وقد صممت الاشعال بيسلفيت PCR باستخدام MethPrimer (www.urogene.org/methprimer/index1.htm) (64) وكما يلي: GABRB3 المنطقة 1 (F: GAGGGATATTTTGGAAGGAGTATTT؛ R: CAAAACTCCAACCTATCTTAATCAAA)، GABRB3 المنطقة 2 (F: GGATTTAATATTTTGATTTGTGGGA؛ R : AAAAAAACCATCCTTCTCCTAATTC)، GABRB3 المنطقة 3 (F: GTTTTGAGGATTGGGGGTTAT؛ R: AAAACATATCCTTTATAAAAAAAAC)، GABRB3 المنطقة 4 (F: GTTTAGGAGGTAGTTTTGGAAAAAT؛ R: TAAACTC CCAACTCCTCCAAC)، GABRG3 المنطقة 1 (F: GTAGGGGTTATTTTTGGTTTTTTAT؛ R: ATTTAACCCTTTAAATCCCACTATC). تم تنفيذ PCR التضخيم لمدة 38 دورات مع ظروف التفاعل القياسية و~25 نانوغرام من الحمض النووي الجيني تحويل بيسلفيت. المنتجات PCR وتنقيته هلام مع عدة تنقية Qiaquick جل (QIAGEN) وligated في ناقلات الاستنساخ pGEM T-سهل (PROMEGA). تم تحويل خلايا المختصة JM109 (PROMEGA) مع منتجات بيسلفيت ligated ومطلي على LB وحات الأمبيسلين أجار مع IPTG وX-غال. وقد تم اختيار المستعمرات بيضاء واحدة، ونمت في LB مع الأمبيسلين بين عشية وضحاها وتمت تنقية البلازميدات استخدام عدة Qiaprep (QIAGEN). هضم البلازميدات مع عدم I التحقق من وجود إدراج الصحيح ثم والتسلسل إدراج البلازميد في قسم ديفيس UC من مرفق العلوم البيولوجية تسلسل الحمض النووي. والتسلسل لا يقل عن 10 مستعمرات لكل عينة الدماغ تحليلها.

المواد التكميلية

المواد التكميلية متوفرة في HMG على الانترنت.

المراجع

  • ↵
    • نيكولز RD،
    • نيبر JL
    منظمة الجينوم، وظيفة، ويطبع في برادر ويلي والمتلازمات Angelman. أنو. القس الجينوم هوم. جينيه. 2001؛ 2: 153 - 175.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • Kishino T.،
    • لند M.،
    • اغستاف J.
    الطفرات UBE3A / E6-AP تسبب متلازمة أنجلمان. نات. جينيه. 1997؛ 15: 70 - 73.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • ماتسورا T.،
    • ساتكليف JS،
    • فانغ P.،
    • Galjaard RJ،
    • جيانغ YH،
    • بينتون CS،
    • Rommens JM،
    • Beaudet AL
    دي نوفو اقتطاع الطفرات في E6-AP بتحول البروتين يغاز الجين (UBE3A) في متلازمة أنجلمان. نات. جينيه. 1997؛ 15: 74 - 77.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • فولكمار FR،
    • بولس D.
    مرض التوحد. انسيت 2003؛ 362: 1133 - 1141.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • MUHLE R.،
    • Trentacoste SV،
    • رابين I.
    جينات التوحد. لطب الأطفال 2004؛ 113: 472 - 486.
    CROSSREF الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • كوك EH،
    • الابن،
    • يندغرين V.،
    • يفينثال BL،
    • Courchesne R.،
    • لينكولن A.،
    • شولمان C.،
    • اللورد جيم،
    • Courchesne E.
    التوحد أو مرض التوحد شاذة في أمهات لكن ليس مشتقا أبويا القريبة 15q الازدواجية. آم. J. هوم. جينيه. 1997؛ 60: 928 - 934.
    ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • ماكولي JL،
    • أولسون LM،
    • Delahanty R.،
    • أمين T.،
    • نورمي EL،
    • جهاز EL،
    • يعقوب MM،
    • Folstein SE،
    • هينز JL،
    • ساتكليف JS
    خريطة الربط اختلال التوازن من 1 ميغابايت 15q12 GABA (A) كتلة مستقبلات الوحيدات وجمعية لمرض التوحد. آم. J. ميد. جينيه 2004؛ 131: +51 - +59.
    منحة جوجل
  • ↵
    • نورمي EL،
    • أمين T.،
    • أولسون LM،
    • يعقوب MM،
    • ماكولي JL،
    • لام AY،
    • جهاز EL،
    • Folstein SE،
    • هينز JL،
    • ساتكليف JS
    كثيفة خرائط الربط اختلال التوازن في 15q11-Q13 الأمهات مجال التعبير ينتج الدليل على الجمعيات في التوحد. مول. الطب النفسي 2003؛ 8: 624 - 634.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • شاو Y.،
    • Cuccaro ML،
    • هاوزر ER،
    • رايفورد KL،
    • Menold MM،
    • ولبرت CM،
    • رافان SA،
    • إيلستون L.،
    • Decena K.،
    • دونلي SL،
    • وآخرون
    . رسم الخرائط الجميلة من اضطراب التوحد لكروموسوم 15q11-Q13 عن طريق استخدام أنواع فرعية المظهرية. آم. J. هوم. جينيه. 2003؛ 72: 539 - 548.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • Menold MM،
    • شاو Y.،
    • ولبرت CM،
    • دونلي SL،
    • رايفورد KL،
    • مارتن ER،
    • رافان SA،
    • أبرامسون RK،
    • رايت HH،
    • ديلونغ GR،
    • وآخرون
    . تحليل رابطة كروموسوم 15 جبعة جينات مستقبلات الوحيدات في اضطراب التوحد. J. Neurogenet. 2001؛ 15: 245 - 259.
    ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • أمير RE،
    • فان دن Veyver IB،
    • وان M.،
    • تران CQ،
    • فرانك U.،
    • الزغبي HY
    هو سبب متلازمة ريت بواسطة الطفرات في X-ربط MECP2، الترميز ميثيل الدليل السياسي الشامل ملزم البروتين 2. نات. جينيه. 1999؛ 23: 185 - 188.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • الزغبي HY
    لقاء في المشبك: اضطرابات النمو العصبي ما بعد الولادة؟ العلوم 2003؛ 302: 826 - 830.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • ساماكو RC،
    • Hogart A.،
    • اسال JM
    تداخل جينية في التوحد اضطرابات النمو العصبي: أسباب نقص MECP2 تخفيض تعبير عن UBE3A وGABRB3. همهمة. مول. جينيه. 2005؛ 14: 483 - 492.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • بوتنر VL،
    • Longmate JA،
    • باريش ME،
    • مان JR،
    • المغني وسام J.
    تحليل البصمة في الفئران مع الازدواجية أحد الأبوين من الكروموسومات الداني 7 و 15 عن طريق استخدام ميكروأري قليل النوكليوتيد العرف. Mamm. الجينوم 2004؛ 15: 199 - 209.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • نيكولز RD،
    • غوتليب W.،
    • راسيل LB،
    • Davda M.،
    • Horsthemke B.،
    • Rinchik EM
    تقييم النماذج المحتملة لمكونات مطبوع وnonimprinted من كروموسوم المتلازمات 15q11-Q13 الإنسان من خلال رسم الخرائط تناظر غرامة هيكل في الماوس. بروك. Natl أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية 1993؛ 90: عام 2050 - 2054.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • ياماساكي K.،
    • جون ماير عادوا K.،
    • أوتا T.،
    • Masuzaki H.،
    • Ishimaru T.،
    • موكاي T.،
    • Niikawa N.،
    • اوجاوا M.،
    • اغستاف J.،
    • Kishino T.
    الخلايا العصبية ولكن ليس الخلايا الدبقية تظهر يطبع متبادلة من الحس والعقاقير محاضر Ube3a. همهمة. مول. جينيه. 2003؛ 12: 837 - 847.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • ميغورو M.،
    • Mitsuya K.،
    • سوي H.،
    • Shigenami K.،
    • Kugoh H.،
    • ناكاو M.،
    • Oshimura M.
    دليل لأحد الأبوين، والتعبير الأب من GABAA مستقبلات الجينات الوحيدات الإنسان، وذلك باستخدام بوساطة microcell نقل كروموسوم. همهمة. مول. جينيه. 1997؛ 6: 2127 - 2133.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • Bittel DC،
    • Kibiryeva N.،
    • Talebizadeh Z.،
    • بتلر MG
    تحليل ميكروأري التعبير الجيني / نسخة في متلازمة برادر ويلي: حذف مقابل UPD. J. ميد. جينيه. 2003؛ 40: 568 - 574.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • Bittel DC،
    • Kibiryeva N.،
    • Talebizadeh Z.،
    • دريسكول DJ،
    • بتلر MG
    تحليل ميكروأري التعبير الجيني / نسخة في متلازمة أنجلمان: الحذف مقابل UPD. جينوم 2005؛ 85: 85 - 91.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • كوبوتا T.،
    • Niikawa N.،
    • Jinno Y.،
    • Ishimaru T.
    وربما مطبوع GABAA مستقبلات بيتا 3 الوحيدات الجينات أبويا في البشر. آم. J. ميد. جينيه. 1994؛ 49: 452 - 453.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • غابرييل JM،
    • هيغنز MJ،
    • Gebuhr TC،
    • يظهر مرض السل،
    • Saitoh S.،
    • نيكولز RD
    نظام نموذجي لدراسة البصمة الجينومية من الجينات البشرية. بروك. Natl أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية 1998؛ 95: 14857 - 14862.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • الربوة JHM،
    • تشنغ S.-D.،
    • لند M.
    أليل speificity من توقيت تكرار الحمض النووي في Angelman /-برادر ويلي متلازمة مطبوع المنطقة الكروموسومات. نات. جينيه. 1994؛ 6: +41 - +46.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • Kitsberg D.،
    • سيليج S.،
    • برانديز M.،
    • سيمون أولا،
    • كيشت أولا،
    • دريسكول DJ،
    • نيكولز RD،
    • الأرز H.
    أليل معين توقيت تكرار المناطق الجينات مطبوع. الطبيعة 1994؛ 364: 459 - 463.
    منحة جوجل
  • ↵
    • اسال JM،
    • لند M.
    تنظيم المجال من تكرار أليل معين داخل الكتلة GABRB3 الجين تتطلب متحدر من والدين 15q11-13 مساهمة. نات. جينيه. 1995؛ 9: 386 - 394.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • اسال J.،
    • لند M.
    جمعية مثلي من المجالات الكروموسومات مطبوع معاكس. العلوم 1996؛ 272: 725 - 728.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • تاتشر KN،
    • Peddada S.،
    • ياسوي DH،
    • اسال JM
    وينظم الاقتران مثلي من 15q11-13 المجالات مطبوع في الدماغ تنمويا كنه يعاني من نقص في ريت وعينات من مرض التوحد. همهمة. مول. جينيه. 2005؛ 14: 785 - 797.
    الملخص / الحرة النص الكامل
  • ↵
    • Rougeulle C.،
    • جلات H.،
    • لند M.
    هو مطبوع على Angelman متلازمة الجينات مرشح، UBE3A / E6-AP، في الدماغ. نات. جينيه. 1997؛ 17: +14 - 15.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • فو T.،
    • هوفمان A.
    يقتصر يطبع من هذا الجين متلازمة أنجلمان، UBE3A، إلى الدماغ. نات. جينيه. 1997؛ 17: 12 - 13.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • ألبرخت U.،
    • ساتكليف JS،
    • Cattanach BM،
    • بيتشي CV،
    • ارمسترونغ D.،
    • ايشيل G.،
    • Beaudet AL
    التعبير مطبوع من الفئران الجينات متلازمة أنجلمان، Ube3a، في قرن آمون والخلايا العصبية العصبية. نات. جينيه. 1997؛ 17: 75 - 78.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • Nagarajan RP،
    • Hogart A.،
    • Gwye Y.،
    • مارتن MR،
    • اسال JM
    انخفاض التعبير MeCP2 متكرر في التوحد القشرة الأمامية ويرتبط الشاذة MECP2 المروج مثيلة. علم التخلق 2006؛ 1: 172 - 182.
    ميدلاين الباحث العلمي من Google
  • ↵
    • ماكيدونسكي K.،
    • Abuhatzira L.،
    • كوفمان Y.،
    • رازين A.،
    • شيمر R.
    نقص MeCP2 في متلازمة ريت يسبب انحرافات جينية في / AS مركز PWS يطبع أن يؤثر UBE3A التعبير. همهمة. مو

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
إضافة رد

« الموضوع السابق | الموضوع التالي »

تعليمات المشاركة
لا تستطيع إضافة مواضيع جديدة
لا تستطيع الرد على المواضيع
لا تستطيع إرفاق ملفات
لا تستطيع تعديل مشاركاتك
BB code is متاحة
كود [IMG] متاحة
كود HTML معطلة
الانتقال السريع

 المكتبة العلمية | المنتدى | دليل المواقع |  المقالات | ندوات ومؤتمرات | المجلات | دليل الخدمات | الصلب المشقوق وعيوب العمود الفقري | التوحد وطيف التوحد  | متلازمة داون | العوق الفكري | الشلل الدماغي | الصرع والتشنج | السمع والتخاطب | الاستشارات | صحة الوليد | صحة الطفل | أمراض الأطفال | سلوكيات الطفل | مشاكل النوم | الـربـو | الحساسية | أمراض الدم | التدخل المبكر | الشفة الارنبية وشق الحنك | السكري لدى الأطفال | فرط الحركة وقلة النشاط | التبول الليلي اللاإرادي | صعوبات التعلم | العوق الحركي | العوق البصري | الدمج التربوي | المتلازمات | الإرشاد الأسري | امراض الروماتيزم | الصلب المشقوق | القدم السكرية


الساعة الآن 01:43 AM.

الاتصال بنا - موقع أطفال الخليج ذوي الاحتياجات الخاصة - الأرشيف - الأعلى

Powered by vBulletin® Version 3.8.2
Copyright ©2000 - 2025, Jelsoft Enterprises Ltd

a.d - i.s.s.w