آثار مكملات المغنيسيوم الفسيولوجية على فرط النشاط عند الأطفال الذين يعانون من اضطراب نقص الانتباه وفرط النشاط (adhd). ردا إيجابيا على المغنيسيوم عن طر

[رافت ابراهيم]

 

http://www.jneurosci.org/content/33/45/17587.full

القسم التالي

ملخص

على مدى عقود، وقد سادت العديد من البديهيات بالنسبة للعلاقات بين الجهاز العصبي المركزي وتعميم الخلايا المناعية. على وجه التحديد، فقد اعتبر دخول الخلايا المناعية إلى حد كبير أن تكون مرضية أو في تحديد بداية من أمراض في الدماغ. وعلاوة على ذلك، والتهاب المحلية المرتبطة بمرض الأمراض العصبية مثل الزهايمر أو مرض التصلب الجانبي الضموري، واعتبرت مماثلة في المسببات لأمراض التهابية، مثل المحول-الانتكاس التصلب المتعدد. يعكس الارتباك التي تلت ذلك عدم وجود الوعي بأن مسببات المرض وكذلك أصل الخلايا المناعية يحدد طبيعة الاستجابة الالتهابية، وهذا القرار الالتهاب هو عملية الخلوية نشطة. وقد شهد العقدان الأخيران ثورة في هذه العقائد السائدة، مع مساهمة كبيرة مصنوعة من قبل المؤلفين. ومن المعروف الآن الخلايا الدبقية الصغيرة والتسلل الضامة الوحيدات المستمدة أن تكون متميزة وظيفيا والمنشأ منفصل. ومن المعروف عن الخلايا المناعية الفطرية والتكيفية الآن أن يكون واقية خصائص / الشفاء في الجهاز العصبي المركزي، طالما يتم تنظيم نشاطهم، ويتم التحكم تجنيدهم بشكل جيد؛ هو محل تقدير دورها في الحفاظ على ليونة الدماغ في مجالات الصحة والشيخوخة، والتطور العصبي المزمن والأمراض العصبية. وعلاوة على ذلك، فإنه من المفهوم الآن أن حواجز الدماغ ليست موحدة في تفاعلها مع الخلايا المناعية المنتشرة. الآثار المترتبة على هذه النتائج الجديدة إلى فهم أساسي لعمليات إصلاح الجهاز العصبي المركزي، شيخوخة الدماغ، ومجموعة واسعة من اضطرابات الجهاز العصبي المركزي، بما في ذلك الإصابات الحادة، متلازمة ريت، مرض الزهايمر، والتصلب المتعدد، وسيتم مناقشتها.

القسم السابق القسم التالي

مقدمة

الحدود الظهارية من الدماغ ينسق الاتجار الكريات البيض-حل التهاب في الجهاز العصبي المركزي: الآثار المترتبة على أمراض الاعصاب والشيخوخة

كانت الفكرة السائدة أن الخلايا المناعية بشكل لا لبس فيه تضر الجهاز العصبي المركزي أساسا انعكاس لتشريح الدماغ والأنسجة التي تحيط بها الحواجز، والمحلي العصبية التهاب ينظر في ظل جميع الظروف المرضية تقريبا، بما في ذلك الإصابات العقيمة، والأمراض العصبية المزمنة والأمراض العصبية النمائية، وحتى الاكتئاب. ، وإعادة النظر في أكثر من عقد من الزمان وجهة النظر هذه، واقترح أنه من غير المحتمل أن مثل هذا الأنسجة الأساسية لن تكون قادرة على تسخير نظام الجسم الرئيسي من صيانة وإصلاح، والجهاز المناعي (شوارتز وآخرون، 1999.؛ شوارتز وكوهين، 2000؛ شوارتز وShechter، 2010A). باستخدام نماذج الإصابة محور عصبي حاد، مثل إصابة في العصب البصري أو الحبل الشوكي، أدلى الملاحظات الرئيسية التي تثبت أن الضامة الوحيدات المستمدة وخلايا CD4 + T الاعتراف مستضدات الدماغ (خلايا T المناعة الذاتية) يكون لها دورا داعما أساسيا في التعافي من الظروف الضارة (Rapalino وآخرون، 1998... المعلم وآخرون، 1999؛. Hauben وآخرون، 2001؛. Yoles وآخرون، 2001)، وكذلك الأمراض العصبية المزمنة (فرنكل وآخرون، 2003.؛. Serpe وآخرون، 2003؛. بيرز وآخرون، 2008؛ رينولدز وآخرون، 2010.). ومع ذلك، وبعد هذه الملاحظات الأولية، وظلت بعض الأسئلة المحيرة التي لم تحل بعد: (1) ما هي طبيعة الخلايا الذاتية T (المستجيب والتنظيمية، أو كليهما) اللازمة لCNS إصلاح، وما هي العلاقات بين تأثيرها المفيد وذلك من الخلايا المناعية الفطرية، بما في ذلك الضامة التي تنتقل عن طريق الدم والخلايا الدبقية الصغيرة المقيمين تفعيلها؟ (2) لماذا الضامة التي تنتقل عن طريق الدم اللازمة للإصلاح إذا تم ملؤها من قبل الجهاز العصبي المركزي الخلايا الدبقية الصغيرة المقيمة؟ هل الحساب الضامة للدوران دبقية؟ هي الخلايا الدبقية الصغيرة والضامة الخلايا الزائدة عن الحاجة، أو هل لديهم أنشطة متميزة؟ (3) كيف يمكن التوفيق بين مصلحة CNS محددة خلايا T مع التصور العام لخلايا المناعة الذاتية كما تسبب أمراض المناعة الذاتية؟ (4) كيف الخلايا المناعية تفيد CNS إذا دخولهم يتطلب اختراق الحاجز الدموي الدماغي (BBB)؟ (5) إذا كانت هناك حاجة المتداولة في الواقع الخلايا المناعية للانتعاش، لماذا يتم تجنيدهم محدودة بعد الإصابة؟ (6) إذا كانت هناك حاجة الخلايا المناعية للإصلاح، كما حالة متطرفة من استعادة التوازن، لا يكون لهذه الخلايا أيضا دورا في اللدونة الدماغ العادية كذلك؟ (7) وأخيرا، إذا الخلايا المناعية لها دور في اللدونة الدماغ مدى الحياة، ما هو مشاركتهم في تأخير شيخوخة الدماغ، بداية من مرض الاعصاب المزمن، أو تطور مرض النمو العصبي الخلقية؟

الضامة الوحيدات المستمدة دورا أساسيا كما الخلايا حل التهاب في التعافي من إصابة الجهاز العصبي المركزي الحادة.

عدم التجانس بلعم (Auffray وآخرون، 2009) في الجهاز العصبي المركزي لم تقدر حتى وقت قريب فيما يتعلق وظيفة (Shechter وآخرون، 2009) والأصل (Ginhoux وآخرون، 2010)، وتفعيل الضامة والخلايا الدبقية الصغيرة المقيمين لا يمكن تمييزها من قبل معايير النسيجية. وبالتالي، هؤلاء السكان الخلية اثنين، عند تفعيلها، رئي أن تكون زائدة عن الحاجة ويضر بالمثل (Gensel وآخرون، 2009). وقد تبين مع ذلك، في عام 1998، حقن خارج الحي "تنشيط بدلا من" الضامة الدم لتعزيز التعافي من الإصابة التي يسببها تجريبيا الحبل الشوكي (Rapalino وآخرون، 1998). وكانت هذه الملاحظات رائدة المؤشرات الأولى التي الضامة التي تنتقل عن طريق الدم يمكن أن تكون مفيدة لإصلاح الجهاز العصبي المركزي. باستخدام الفئران خيالية، الذي حيدات، ولكن ليس الخلايا الدبقية الصغيرة، تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر، GFP (CX 3 CR1 GFP> من النوع البري الوهم)، أصبح من الممكن التمييز بين الخلايا الدبقية الصغيرة تنشيط المقيمين والتسلل الضامة الوحيدات المستمدة، في موقع إصابة الحبل الشوكي (رولز وآخرون، 2008.؛. Shechter وآخرون، 2009). الأهم من ذلك، في حالة عدم وجود إصابات، مستبعدة الضامة المشتقة من الدم من المخ المضيف صحي (طالما محمية رؤساء الفئران أثناء عملية التشعيع ما هو مطلوب لاجتثاث نخاع العظام المضيفة لتمكين engraftment) (Shechter وآخرون آل.، 2009). بعد إصابة الحبل الشوكي، تم العثور على GFP المشتقة من الدم + خلايا الدم النخاعي في موقع الآفة. بعد وصلت غالبية هذه الخلايا بتجنيد مع تأخير قريب على خرق المرتبطة إصابة الأولي من BBB. الاجتثاث الشرطي الضامة المشتقة من الدم المعينين، وذلك باستخدام نظام الاجتثاث على أساس التعبير عن مستقبلات ذيفان الخناق تحت سيطرة CD11c و(علامة بلعم محددة) المروج (يونج وآخرون، 2002)، ساءت حرز الوظيفية لل من الحيوانات المصابة، تمديد حجم الآفة، وأدى إلى استجابة شاملة معززة التهابات تجلى في تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة المحلية (Shechter وآخرون، 2009). وهكذا، فقد وجد أن يتم تجنيد الضامة المشتقة من الدم إلى موقع الإصابة بعد إهانة وتسهيل حل الاستجابة المناعية المحلية عن طريق عرض النشاط المضادة للالتهابات اللازمة لتنظيم تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة (Shechter وآخرون، 2009 ). وكشف تحليل نوع ونشاط الضامة الوحيدات المستمدة في موقع الآفة بوصفها وظيفة من الزمن أنه في ظل الظروف الضارة، سواء الضامة الوحيدات المستمدة معربا عن النشاط proinflammatory (M1 الشبيهة) والضامة الوحيدات المستمدة تحملها المضادة للالتهابات الآثار (M2 مثل) موجودة، على الرغم من أن السكان السابق يبدو في وقت سابق وجودها هو عابر (Shechter وآخرون، 2013b). وجد كذلك أن نشاط M2 مثل الضامة المشتقة من الدم يعتمد على التعبير عن IL-10، خلوى المضادة للالتهابات الكلاسيكي المعروف أن تترافق مع تنشيط بدلا من (M2) الضامة (Shechter وآخرون، 2009) . الاجتثاث عن الضامة المشتقة من الدم تليها الاستعاضة عنها مع الضامة التي هي معيبة في IL-10 نتائج التعبير في الانتعاش العام ضعاف (Shechter وآخرون، 2009). على العكس من ذلك، تعزيز النتائج تجنيد الوحيدات الطبيعية في تحسين الانتعاش (Shechter وآخرون، 2009).
ضمن الإطار الزمني للقرار من الاستجابة الالتهابية الفطرية المحلية، والخلايا الدبقية الصغيرة المقيمين تفشل في الحصول على M2 تشبه النمط الظاهري. ووجد أيضا أن اقتناء هذا حل (M2) النمط الظاهري يعتمد على colocalization المكاني مع البروتينات خارج الخلية المصفوفة، كبريتات شوندروتن بروتيوغليكان (رولز وآخرون، 2008، 2009)، من المعروف أن المثبطة للنمو محور عصبي (فضية وميلر 2004؛ فاوست، 2009). يثير الاهتمام والفضول، الضامة الوحيدات المستمدة الذي اكتساب نشاطهم المضادة للالتهابات جزئيا من خلال تفاعلها مع كبريتات شوندروتن بروتيوغليكان، أيضا تعبير عن النشاط الأنزيمي التي تسمح لهم أن تنأى مصفوفة من خلالها حاجة المحاور إعادة نمو تمديد (Shechter وآخرون، 2011 ). بشكل جماعي، وأشارت هذه النتائج إلى أن توظيف حيدات مطلوب من أجل حل الاستجابة الالتهابية وللندبة. كل من الالتهاب والندبة هي المراحل الأساسية للشفاء مع ذلك أن تصبح مدمرة اذا لم تحل في الوقت المناسب (Shechter وشوارتز، 2013a، ب). وقد أظهرت الدراسات المستقلة التي الضامة دعم تجدد المحاور (يين وآخرون، 2006. وأن الحصانة الفطرية التي تسيطر عليها بشكل جيد كما يدعم تجديد الخلايا CNS في ظل الظروف المرضية) (مارتينو وآخرون، 2011.؛ Kokaia وآخرون، 2012.).

خلايا T في حدود الدماغ تنسق الاتصالات للجهاز العصبي المركزي مع المحيط الخارجي.

النتائج التي الضامة الوحيدات المستمدة تجنيدهم للجهاز العصبي المركزي هي الخلايا الحيوية والمفيدة، وعرض الدور الذي هو nonredundant مع أن من الخلايا الدبقية الصغيرة في حل الاستجابة الالتهابية (Shechter وآخرون، 2009)، أثار سؤالا أساسيا حول كيفية يتم تجنيد هذه خلايا الدم النخاعي إلى الجهاز العصبي المركزي. وقبل بضع سنوات، وقد تبين أن التطعيم الصريح أو الضمني مع المستضدات CNS، ولكن ليس مع غير البروتين الذاتي، ويعزز الانتعاش بعد إصابة محور عصبي (المعلم وآخرون، 1999.؛. Hauben وآخرون، 2001). وفي وقت لاحق، وقد تبين أن زيادة مستويات خلايا T تعميم CNS محددة يسهل تراكم M2 مثل الضامة الوحيدات المستمدة في موقع الإصابة (Shechter وآخرون، 2009). ومع ذلك، وانه لم يتضح بعد كيف ترتبط هاتين الظاهرتين. مؤخرا، تبين أن تلك الضامة الوحيدات المستمدة الذي يتم استخدامهم لموقع الآفة ومحليا تميز لتصبح حل الضامة (M2 مثل)، تدخل عن طريق حاجز معين، الضفيرة المشيمية (CP) داخل حاجز الدم-CSF ، وليس من خلال خرق BBB. حاجز الدم-CSF يشكل عائقا فريدة من نوعها في الجهاز العصبي المركزي كما هو يتكون من خلايا الظهارية منعطفات ضيقة والخلايا البطانية منوفذة، بدلا من منعطفات ضيقة البطانية. وهكذا، فقد تبين أن حاجز الدم-CSF ليست "الحقيقي" حاجز ثابت الذي يمنع دخول المناعة الخلوية، ولكن بدلا من ذلك، بوابة انتقائية والتربوية التي تمكن من الوصول الخلية انتقائي، اعتمادا على احتياجات الجهاز العصبي المركزي (Shechter وآخرون .، 2013a؛. كونيس وآخرون، 2013). كشفت دراسة أجريت مؤخرا من تركيب الخلوي للسدى CP الذي جوهري بالسكان من قبل السكان متميزة من خلايا CD4 + T، التي تختلف عن تلك الموجودة في الدورة الدموية. كشفت الإنتاجية العالية تحليل تسلسل ذخيرة مستقبلات الخلايا التائية أن هذه الخلايا CD4 + T تعبر عن مستقبلات T-خلية معينة للمستضدات CNS وأن النمط الظاهري ذاكرتهم هو من نوع المستجيب الذاكرة، وعلى النقيض من CSF، وهو بالسكان قبل خلايا T المركزية الذاكرة (باروخ وآخرون، 2013). تم العثور على 15٪ من هذه CD4 + الخلايا في CP ساذج تقريبا لتكون خلايا الإنترفيرون المنتجة للγ-TH1، وعثر على نشاطها في هذا الحيز أن تكون حاسمة لتفعيل CP كبوابة لتهريب الكريات البيض إلى الجهاز العصبي المركزي ، عن طريق الحث على التعبير عنها من جزيئات الاتجار (كونيس وآخرون، 2013). هذه والنتائج إضافية تشير إلى أن خلايا الجهاز العصبي المركزي محددة T المقيمين في CP تخدم ك "البوابين"، التوسط الوظائف المحلية والبعيدة بهم من داخل الأراضي CNS ولكن خارج لحمة (باروخ وشوارتز، 2013).
تم اكتشاف خلايا T CNS محددة في CP يتفق مع اكتشاف أن تشارك خلايا T CNS محددة في الحفاظ على ليونة وظيفية للدماغ صحي، بما في ذلك القدرات المعرفية التي تعتمد على قرن آمون وتكوين الخلايا العصبية (Kipnis وآخرون، 2004؛ زيف وآخرون، 2006.؛ زيف وشوارتز، 2008؛ وولف وآخرون، 2009). تم العثور على الفئران تعاني من نقص في خلايا T أو خلايا T CNS محددة لعرض خفض قدرات التعلم والذاكرة المكانية (Kipnis وآخرون، 2004.؛ زيف وآخرون، 2006.). وعلاوة على ذلك، فرض المفاجئ من نقص المناعة في الفئران الشابة يسبب ضعف الذاكرة المكانية، على غرار فقدان الذاكرة المرتبط بالعمر، والتي يمكن عكسها من خلال إعادة المناعي (رون-هاريل وآخرون، 2008). الأهم من ذلك، هذه الدراسات، الأمر الذي أوحى بأن هناك حاجة ينظم نشاط الخلايا المناعية للحفاظ على ليونة الدماغ، لا تتعارض النتائج تشير إلى أن التهاب شديد يضعف الخلايا العصبية. بدلا من ذلك، هذه النتائج تشير إلى أن الخلايا المناعية تنظم التوازن من لحمة صحية حتى من بعيد (Derecki وآخرون، 2010.؛ شوارتز وShechter، 2010B، رون-هاريل وآخرون، 2011.)، ولكن نوع من تنشيط جهاز المناعة يحدد بشكل حاسم نتائجه (مونخي وآخرون، 2003.؛ ورمسر وآخرون، 2004.؛. Ekdahl وآخرون، 2009؛. رولز وآخرون، 2009؛. Derecki وآخرون، 2010؛ يندفال وKokaia، 2010).
استنادا إلى موقع تشريحي والوظائف الفسيولوجية للCP، اقترحنا أن هذه الواجهة العصبية المناعية فريدة من نوعها هو الموقع الذي "مناعة وقائية" يمكن أن يؤثر على وظائف المخ من بعيد وأن CD4 CNS محددة-CP المقيمين + خلايا تؤدي بهم وظيفة تنظيمية ردا على الانحراف سواء في محيط أو داخل الجهاز العصبي المركزي. وهكذا، وخلايا المستجيب CNS محددة CD4 + T، عبر IFNγ، وتسهيل تجنيد الخلايا المناعية من خلال CP الدماغ (كونيس وآخرون، 2013)، ودعم مرونة الدماغ من خلال نشاطهم عن بعد، عبر مستويات رقابة مشددة من IL-4 (Derecki وآخرون آخرون، 2010.؛ باروخ وآخرون، 2013.)؛ هذه التفاعلات، مما يعكس عبر الحديث الدائر بين الخلايا المناعية وCP، شكل حيوي الدماغ والتكيف مع احتياجات الجهاز العصبي المركزي للصيانة وحماية، أو إصلاح (باروخ وشوارتز، 2013).
حقيقة أن الانحراف المناعة في تعميم الحصانة يؤثر المحلي الوسط المستجيب خلوى في سدى CP، وهذا بدوره يؤثر على وظيفة CP، أدت إلى اكتشاف أن يتميز في CP الذين تتراوح أعمارهم بين ساحقة مستويات IL-4 (باروخ وآخرون، 2013 )، مما أدى إلى الوسط الشامل التي تذكر التهاب TH2 المحلي (شيرر، 1997، تزلج وآخرون، 1998.). وترتبط الارتفاع المزمن لIL-4 أو العالية والحادة مستويات IL-4 إلى الظهارية التهاب TH2 بوساطة وتمت دراسة أكثر على نطاق واسع في حالات الربو ومرض الانسداد الرئوي المزمن، والتليف الكيسي (كوكروفت وديفيس، 2006). في مثل هذه الحالات، وآثار IL-4 على الأنسجة الظهارية مدمرة، الأمر الذي أدى إلى إعادة تشكيل ظهارة والمساهمة في الانخفاض التدريجي في وظيفة (Maarsingh، 2008). تم العثور على مستويات المرتبطة بالعمر مماثلة الساحقة المحلية من IL-4 لتعطيل CP الظهارية منعطفات ضيقة، ويرتبط مع انخفاض في خصائص الحاجز (باروخ وآخرون، 2013)، وتقترن مع الارتفاع المحلي لأرجيناز-1، وهو تغيير الذي يرتبط بقوة مع الأنسجة الظهارية-ملتهبة TH2 (Maarsingh، 2008). الأهم من ذلك، تم العثور على المحلي TH2-التهاب CP العمر لتحريك الخلايا الظهارية لإنتاج chemokine، CCL11 (باروخ وآخرون، 2013)، الذي الارتفاع في البلازما والسائل النخاعي ارتبط مؤخرا إلى وظيفة الادراك ضعف وانخفاض تكوين الخلايا العصبية الحصين (فيليدا وآخرون، 2011.؛ فيليدا وفيس-Coray، 2013). كما CCL11 هو يجند لمستقبلات CCR3، وهو ما يعبر عنه في خلايا الدم النخاعي (وآخرون، 1997)، فمن الممكن أن أعمال CCL11 على الخلايا الدبقية الصغيرة CNS المقيمة أو الضامة السحائية، وتحويل النمط الظاهري الخاصة بهم إلى proinflammatory الدولة، و مما يؤثر بصورة غير مباشرة وظيفة الدماغ. وبالتالي، فمن الممكن أن CCL11 المستمدة من CP العمر يؤثر على مرونة الدماغ إما عن طريق تثبيط مستويات متوازنة من IL-4 ثبت أن تكون ضرورية ليونة الدماغ (Derecki وآخرون، 2010) أو تثبيط مباشرة تكوين الخلايا العصبية، كما تبين في المختبر (Butovsky وآخرون، 2006.؛. فيليدا وآخرون، 2011). بغض النظر عن آلية عمل CCL11، فمن المرجح أن التهاب TH2 المحلي في CP العمر هو جزء من التقلبات المرتبطة بالعمر العام المناعية في هذا الحيز، الذي ينطوي على إفراز عوامل إضافية إلى CSF التي قد تتداخل مع الدماغ وظيفة.

شبكة المناعة بأنها الحلقة المفقودة في الأمراض العصبية المزمنة.

وبناء على هذه النتائج، فإنه من الواضح أن حاجز الدماغ الظهارية، وCP، بمثابة واجهة، الذي من خلاله حمة CNS توفر إشارات تشير الاحتياجات، ويتيح تداول إشارات تجنيد المساعدة. الخلايا المناعية الفطرية في لحمة، في ظل الظروف الفسيولوجية، هم حراس هذا المعنى انحرافات خفيفة من التوازن، واحتوائها. تحت إصابات خطيرة أو حالات الأمراض المزمنة، وهذه الخلايا المقيمة غالبا ما تكون غير فعالة، لا تستجيب، أو المعيبة، ويجب أن تتلقى المساعدة أو استبدالها، كما سيتم مناقشتها أدناه.
وفقا لذلك، فإن الخلايا المناعية في محيط عرض أدوار متميزة ومتكاملة من تلك الخلايا المناعية داخل لحمة الدماغ. لحمة يتطلب تجنيد الخلايا حل التهاب في الأنسجة المريضة أو جرح (Shechter وآخرون، 2009). ومع ذلك، وتشير النتائج إلى أن لهذا أن يحدث، يجب تنشيط CP. وCP، ومع ذلك، قد لا يتم تفعيلها بما فيه الكفاية بسبب إما نقص في خلايا T المستجيب، ومستويات الساحقة من تعميم الخلايا المناعية القامع، مثل FOXP3 + خلايا T التنظيمية، التي هي مرتفعة في الشيخوخة وفي ظروف العصبية المزمنة (للمراجعة، نرى انه والتكور، 2013)، أو عدم وجود "خطر" إشارات من لحمة. ووفقا لهذا الرأي، ينبغي للدولة من الخلايا المناعية في الدورة الدموية توفر مؤشرا على كيفية تعديل الحصانة تعميم كوسيلة لتحوير CP لضمان تفعيل الصحيح، وأفضل أداء كبوابة لتجنيد الخلايا المناعية التي من شأنها المساهمة محليا لقرار المناعة، واستعادة التوازن، أو ترميم الأنسجة. معا، وتشير الفهم الحالي لدينا هدف رواية لعلاج الأمراض العصبية تحوير CP. على الرغم من أن الهدف هو شائع في جميع الظروف العصبية، فإن نهج معين تختلف تبعا لطبيعة الخلل CP، وسواء كان هذا الخلل هو نتيجة من الوسط المناعة المتداولة، أو إشارات CSF.

الخلايا الدبقية الصغيرة والضامة الوحيدات المستمدة أمراض النمو العصبي في

تماما كما ولادة وموت الكائنات الحية تحدث على أساس يوما بعد يوم، تحدث هذه العمليات أيضا على نطاق والمجهرية في كل خلايا جميع الكائنات الحية. يجب أن يكون هذا التوازن بين الولادة والموت على المستوى الخلوي منظم بشكل رائع للحفاظ على وظيفة عادية وتجنب الأمراض. عدم إزالة نحو كاف الخلايا الميتة والتالفة يؤدي إلى تراكم الحطام الخلوي، والتي يمكن أن تضر الخلايا المجاورة وتضر العمليات توليدي، مما يؤدي إلى تطوير كافية في وقت مبكر من الحياة، أو وقت مبكر من بداية الاضطرابات التنكسية وسابق لأوانه "الشيخوخة" (إليوت وRavichandran، 2010؛ غريغوري والجنيه الاسترليني، 2011). هذا مهم بشكل خاص في الدماغ، حيث كانت الأنسجة بشكل مكثف التمثيل الغذائي، مغلفة ضمن حدود الجمجمة، والتي تخدم في الأساس باعتبارها الهيكل الخارجي، وفصلها عن الجهاز الدوري الكائن الحي من قبل BBB (تريمبلاى وآخرون، 2011.؛ شافر وآخرون آخرون، 2012.؛. أغوزي وآخرون، 2013). ونقترح أن البلعمة، وآلية لإزالة كل من الذات والمواد الخلوية الخارجية، أمر بالغ الأهمية في التنمية العادية الدماغ ووظيفته، وهذا الخلل في عملية تطهير وتجديد قد تسهم في عدد من تشوهات النمو: متلازمة ريت، طيف التوحد (اضطرابات. Derecki وآخرون، 2012، 2013)، والعصبية اضطرابات (مرض الزهايمر [م] ومرض باركنسون) (Landreth وريد Geaghan، 2009؛ لي وLandreth، 2010).
منذ فترة طويلة يفهم البلعمة في سياق الوظيفة المناعية الفطرية لها، حيث البالعات المهنية (الخلايا الدبقية الصغيرة في CNS) يعم وتتحلل المواد الأجنبية المرتبطة الغزو الممرض أو نشأت نتيجة الإصابة. ومع ذلك، فإن الصورة الأكبر بدأ في الظهور، وكشف عن أدوار هامة لالخلايا الدبقية الصغيرة التي تتجاوز هذا الرد المسببة للأمراض وتشمل صيانة التماثل الساكن والأدوار دعم الخلايا العصبية (تريمبلاى وآخرون، 2011.؛. شافر وآخرون، 2012؛. أغوزي وآخرون، 2013). في الواقع، الفئران التي الخلايا الدبقية الصغيرة (وجميع الضامة الأخرى) قد أزيلت وراثيا، ونمو الدماغ بعد الولادة تشعر بالانزعاج الشديد، ودعم بقوة دور للالخلايا الدبقية الصغيرة في نمو الدماغ التماثل الساكن وظيفة (Erblich وآخرون، 2011). وبالمثل، فإن فهمنا من البلعمة تتوسع لتشمل الخلايا لا ترتبط تقليديا مع ابتلاع مواد النفايات (البالعات غير مهني)، والخلايا النجمية والخلايا الاصلية، في هذه الأدوار الصيانة والدعم (وو وآخرون، 2009... لو وآخرون، 2011 ).
العمل باستخدام الفئران الأخيرة من نقص في ميثيل الدليل السياسي الشامل بروتين 2 (Mecp2 الفئران -null)، وجد جين أن تحور في اضطراب طيف التوحد، متلازمة ريت (الزغبي، 2002، 2005)، وكشف دورا هاما لالبلعمة من قبل الخلايا الدبقية الصغيرة في هذا النموذج (Derecki وآخرون، 2012). تظهر هذه الفئران الكثير من symptomology ينظر في المرضى الذين يعانون ريت: (تأخر النمو، والتنفس المخالفات وانقطاعات النفس، وتقصير العمر. تشن وآخرون، 2001؛. غي وآخرون، 2001). أدى زرع نخاع العظم مع من النوع البري نخاع المانحة في engraftment كبير من الخلايا مثل الخلايا الدبقية الصغيرة في أدمغة هذه الفئران -null Mecp2 واعتقلت أساسا علم الأمراض (Derecki وآخرون، 2012). نحن مصممون وقت لاحق أن الخلايا الدبقية الصغيرة من الفئران -null Mecp2 يحمل ضعاف عميقا القدرة أكلة مقارنة مع البرية من نوع الخلايا الدبقية الصغيرة، مما يشير إلى أن إزالة كاف من الحطام من أدمغة هذه الحيوانات قد تسهم في علم الأمراض. بالإضافة إلى ذلك، تعبيرا محددا من النوع البري Mecp2 في خلايا الدم النخاعي من هذه الحيوانات فارغة (Lysm لجنة المساواة العرقية Mecp2 السلمون المدخن وقفة / ذ) القبض على symptomology، ولكن تم منع الاسترداد إذا كان ضعف النشاط أكلة دواء عن طريق عرقلة الاعتراف فسفاتيديل باستخدام annexin V. هذه البيانات توفير مناهج جديدة واعدة لعلاج متلازمة ريت وغيرها من الاضطرابات العصبية النمائية والاعصاب حيث تراكم الحطام يمكن أن تسهم في علم الأمراض. ويمكن أن تشمل هذه الأمراض مرض الزهايمر، باركنسون، والأمراض هنتنغتون، والاضطرابات النفسية الأخرى التي يحتمل أن تكون قد سبق تعتبر حصرا العصبية في الطبيعة (المسببات يونغ وريفست، 2009). وعلاوة على ذلك، مرض ناسو-Hakola، وهو اضطراب الاعصاب، كما تم ربط مباشرة إلى خلل في البلعمة دبقية من خلال الطفرات من اثار مستقبلات أعرب عن الدم النخاعي الخلايا 2 (TREM2)، وهو بروتين وهو أمر حاسم بالنسبة البلعمة دبقية صغيرة من الخلايا العصبية أفكارك وما هي إلا وأعرب عن الخلايا الدبقية الصغيرة في الدماغ (تاكاهاشي وآخرون، 2005.؛. التهيج وآخرون، 2009).
أما بالنسبة لدور البالعات غير مهني في وظيفة الدماغ، لقد أظهرنا أن الخلايا العصبية السلف انقر نقرا مزدوجا كورتين إيجابية تلعب دورا هاما في تكوين الخلايا العصبية الكبار من خلال إزالة تراكم المواد أفكارك في محاريب العصبية (لو وآخرون، 2011). لا تزال منطقتين في الدماغ العصبية نشطة في مرحلة البلوغ: منطقة subventricular من البطينات الجانبية والمنطقة جزئي التحبب من التلفيف المسنن الحصين. داخل هذه المنافذ، يتم إنشاء عدة آلاف من الخلايا الاصلية العصبية انقر نقرا مزدوجا كورتين إيجابية كل يوم، وبعض مصيرها ان تصبح خلايا عصبية جديدة، والبعض الآخر ليصبح دعم الخلايا الدبقية (الخلايا النجمية و oligodendrocytes)، ولكن الكثير يموتون ببساطة من خلال عملية التقليم الشبكة والصقل. لأن هذا هو مجال النشطة الخلية (إعادة) ركوب الدراجات، وكنا نتمنى لتحديد نوع الخلية (الخلايا) تشارك في البلعمة في هذه المجالات. وكان لدينا التركيز في البداية على الخلايا النجمية والخلايا الجذعية نجمي الخلايا (خلايا التعبير عن بروتين الحمضية ييفي الدبقية) لأن الدبقية يلعب عالميا الأدوار البلعمية الكبرى. لدهشتنا، ومع ذلك، يبدو أن الجسيمات الشحمية التي تحتوي على فسفاتيديل fluorescently المسمى استخدامها لتعقب البلعمة في الغالب في الخلايا العصبية السلائف مزدوجة كورتين إيجابية في كل من هذه المنافذ العصبية. هذه الملاحظة أدت بنا إلى التكهن بأن تثبيط البلعمة قد تؤثر سلبا على التمايز السلف وتطوير الخلايا العصبية في الجسم الحي. باستخدام annexin V، ونحن تحول دون إزالة الخلايا أفكارك، مما أدى إلى تراكم الحطام الخلية أفكارك، وانخفاض ملحوظ في تمايز الخلايا العصبية والبقاء على قيد الحياة، مما يشير الواقع أن عدم القدرة على مسح البقايا الخلوية في هذه المناطق في الدماغ يضعف الخلايا العصبية (لو وآخرون، 2011).
معا، وهذه الدراسات تدعم بشدة فكرة أن الفشل من جانب البالعات الدماغ، سواء المهنية أو غير مهني، لمسح تراكم واسعة من الحطام المرتبطة تكوين الخلايا العصبية العادية، والنتائج في تمايز الخلايا العصبية المتضررة، والتنمية، والبقاء على قيد الحياة ويمكن أن تسهم في علم الأمراض الأمراض يعتبر سابقا العصبية بحتة في طبيعتها، بما في ذلك متلازمة ريت، مرض الزهايمر، واكس الهش لذلك، فإنه من المغري إلى التكهن بأن استعادة النشاط أكلة في هذه الظروف حيث فقدت (متلازمة ريت)، أو زيادة في تلك التي تنكس قد يكون تسارع (مرض الزهايمر)، قد يؤدي إلى تحسن حقيقي في هذه الظروف. ورغم التعرف على وكلاء الدوائية التي تمنع أو منع البلعمة، تبقى العوامل التي تحفز بشكل انتقائي النشاط أكلة الكشف عن هويته ولكن يمكن أن توفر أساليب علاجية جديدة مفيدة.

الخلايا الدبقية الصغيرة والوحيدات المستمدة الضامة في الأمراض العصبية المزمنة

في حالات الالتهابات، والصدمات، والحالات المرضية، وCNS يأتي في اتصال مع تسلسل البروتين صغيرة تشكيل أنماط التي تنظم الحصانة الفطرية، وجدت في أعداد كبيرة من الكائنات الحية الدقيقة. وتشمل هذه الأنماط (PAMPs اسمه لأنماط الجزيئية المرتبطة الممرض وDAMPS لأنماط الجزيئية المرتبطة الضرر) البروتينات من الأغشية البكتيرية، مثل peptidoglycans والبروتينات داخل الخلايا، مثل البروتينات الحرارة للصدمات، والجزيئات اللابروتيني الصغيرة، مثل ATP واليوريا ، وأنماط الحمض النووي، مثل nonmethylated DNA الدليل السياسي الشامل التي تحتوي على، الرنا المزدوج الجديلة، وssRNA (كومار وآخرون، 2011). يتم التعرف على هذه بواسطة مستقبلات التعرف على الأنماط (PRRs) منها ثلاث عائلات رئيسية موجودة: مستقبلات تول مثل (TLRs)، مستقبلات شبيهة الإيماءة (NLRs)، ومستقبلات مثل RIG1 (RLRs). دور هذه المستقبلات في الجهاز العصبي المركزي وقد درس معظمهم في الخلايا الدبقية الصغيرة، ولكن الخلايا النجمية، قليلة التغصن، والخلايا البطانية، وحتى الخلايا العصبية والخلايا الجذعية العصبية أيضا التعبير عن مستويات وظيفية لبعض من هذه المستقبلات (رولز وآخرون، 2007.؛ اوكون وآخرون .، 2010؛ Hanamsagar وآخرون، 2012.). مشاركة هذه المستقبلات يؤدي إلى تحريض مسارات محددة والإفراج عن السيتوكينات المحددة التي تلعب دورا في حل الاصابة. هناك 11 TLR أفراد الأسرة في البشر و 13 في الفئران. وقد وصفت دور للTLR1-9 في الجهاز العصبي المركزي. وعلى الرغم من أن تنشط غالبا في الخلايا الدبقية الصغيرة، وتوجد TLRs أيضا في الخلايا العصبية، الخلايا النجمية، والخلايا البطانية. TLRs يمكن أن تعمل وحدها أو heterodimerize لخلق استجابات محددة لمؤثرات معينة. جميع TLRs، باستثناء TLR3، إشارة من خلال البروتين على التكيف، Myd88، الأمر الذي يؤدي إلى تحريض NF كيلوبايت والإفراج عن السيتوكينات، مثل IL-1β، TNF-α، وIL-12. على العكس من ذلك، يمكن TLR3 يتم تنشيط Myd88، ولكن الإشارات عبر مسار تعتمد على TRIF، مما يؤدي إلى تحريض IRF3 وإنتاج السيتوكينات الأخرى، مثل IFNβ. TLR4 يمكن أن يشير أيضا من خلال TRIF بمساعدة من البروتين محول والترام. كلا Myd88 ومسارات الإشارات TRIF التي تعتمد يمكن أن تنخرط المرتبطة mitogen بروتين كيناز (MAPK) مسارات، بما في ذلك ERK1 / 2، P38، وJNK، مما يؤدي إلى تحفيز نمو الخلايا وتحريض إنتاج السيتوكينات الالتهابية (براون وآخرون. ، 2011).

الخلايا الدبقية الصغيرة: على قوة الجهاز المناعي الفطري في الجهاز العصبي المركزي.

يعتبر الأنسجة الضامة المقيمين، مثل الكثير من خلايا كوبفر في الكبد أو منسجات في الأنسجة الضامة، الخلايا الدبقية الصغيرة هي الخلايا الوحيدة في الجهاز العصبي المركزي المنشأ الجنينية (Soulet وريفست، 2008b). وقد أثبت التحليل مصير رسم الخرائط التي السلائف المكونة للدم من الكيس المحي ملء CNS قبل اليوم الثامن الجنينية في الفئران (Ginhoux وآخرون، 2010). مرة واحدة الحاضر، الخلايا الدبقية الصغيرة قادرة على تجديد الذات ولا تتطلب التجديد من خلال تعميم السلائف الوحيدات (العجمي وآخرون، 2007). ومن ثم فهي تختلف عن النسب الوحيدات من الخلايا وغيرها من الضامة الأنسجة محددة، مثل الخلايا Kuppfer، في الكبد التي صيانة تعتمد على تجنيد الخلايا المشتقة من نخاع العظام من التداول (كلاين وآخرون، 2007 ). في الجهاز العصبي المركزي، وأشارت التقارير الأولية إلى أن تجنيد الخلايا المشتقة من نخاع العظام كان حدثا نشط في علم وظائف الأعضاء العادي (سمرد وريفست، 2004). بعد نقاش حاد حول هذا الموضوع (Soulet وريفست، 2008A)، يظهر إلى توافق في الآراء تم التوصل إليها التالية الأدلة التجريبية الجديدة التي العظام المستمدة من نخاع تجنيد خلية هو تأثير هامشي في علم وظائف الأعضاء العادي (Lampron وآخرون، 2012)، ولكن المهم في الحالات المرضية التي تؤثر على سلامة الجهاز العصبي المركزي، مثل السكتة الدماغية (شيلينغ وآخرون، 2009)، والتصلب المتعدد (فلوريس وآخرون، 2004)، والتصلب الوحشي الضموري (فاكنين وآخرون، 2011)، وغيرها. هذا التعيين يمكن أن تكون مفيدة أو ضارة، وهذا يتوقف على شرط درس (Shechter وشوارتز، 2013b).
في دولتهم الأم، الخلايا الدبقية الصغيرة هي خلايا متشعبة للغاية مع الجسم الخلوية الصغيرة.عملياتها الموسعة تسمح الخلايا الدبقية الصغيرة إلى الشعور بسرعة وجود أضرار الأنسجة أو علامات العدوى من خلال PRRs. الخلايا الدبقية الصغيرة هي الخلايا البلاستيكية للغاية. أنها تستجيب بسرعة لإشارات الخطر الصادرة عن الخلايا المصابة وتفرز السيتوكينات المناسبة لكلا الحطام واضح وجذب الخلايا الدبقية الأخرى (Soulet وريفست، 2008b). وهي خلايا متخصصة تستجيب للمؤثرات محددة بطريقة أكثر تحديدا بكثير وأمر مما كان يعتقد سابقا. لتبسيط مفهوم استجابة دبقية صغيرة، واقترح الانقسام في دول تفعيل الخلايا الدبقية الصغيرة. استنادا إلى TH1 / TH2 وM1 / M1 دول تنشيط خلايا T والضامة، على التوالي، واقترح دولتين الأساسية للالخلايا الدبقية الصغيرة، تعتمد في الغالب على طبيعة التحفيز. في حالة تفعيل M1، المعروف أيضا باسم الدولة تنشيط كلاسيكي أو proinflammatory وعلى غرار في المختبر عن طريق التحفيز LPS، تظهر الخلايا الدبقية الصغيرة أن المستويات العالية من Ly6C التعبير تفرز السيتوكينات proinflammatory، مثل IL-1β وTNF-α، ولها قدرة عالية لالبلعمة والتحلل البروتيني (مارتينيز وآخرون، 2008). من خلال الافراج عن iNOS وROS، وحيدات M1 هي متخصصة لإزالة الالتهابات البكتيرية. في ولاية M2، وتسمى أيضا تنشيط بدلا من ذلك أو الدولة إصلاح الأنسجة والتي يسببها في المختبر المصفوفة التي IL-4 أو IL-10، وتوجه الخلايا الدبقية الصغيرة التي تبين مستويات أقل من Ly6C التعبير نحو إصلاح الأنسجة من خلال إنتاج VEGF، كيموكينات، وخارج الخلية البروتينات. في حين أن النموذج M1 / M2 يسهل رؤية واسعة لدور هذه الخلايا في حالة معينة، فإن الوضع يبدو أكثر تعقيدا خلال أمراض الدماغ المزمنة، مثل AD.

الخلايا الدبقية الصغيرة وحيدات المولد الدم في AD.

ويتسبب AD أساسا من إنتاج اميلويد β (Aβ) في الجهاز العصبي المركزي. نظام المناعة الفطري يلعب دورا في تطوير علم الأمراض، والتعرض المزمن من الخلايا الدبقية الصغيرة لAβ يؤدي إلى التهاب غير المنضبط، والإفراج عن الجذور الحرة السامة وأنواع الاكسجين التفاعلية، كما هو موضح في الأصل في الدراسات بعد الوفاة (Uchihara وآخرون، 1997؛. Cagnin وآخرون، 2001). وعلاوة على ذلك، فقد أظهرت الدراسات الروابط على نطاق الجينوم على نطاق واسع الآلاف من المواضيع AD أن من بين الأشكال الوراثية ستة الأكثر ارتباطا بإحكام إلى تطوير أواخر AD يصيب أربعة تلعب دورا مهيمنا في عمليات المناعية (مورايس وآخرون، 2012 ). في المصل، CSF، والقشرة من المرضى المصابين، وارتفاع مستويات IL-1β، IL-6، TNFα، IL-8، وTGFβ كلها قد ذكرت (لالاستعراضات المتعمقة، انظر روبيو بيريز وMorillas- رويز، 2012؛ وانظر أيضا. أكياما وآخرون، 2000؛ تاون وآخرون، 2008.). وبالمثل، overexpressed كلا TLR2 وTLR4 في الخلايا وحيدة النواة الدموية المحيطية من المرضى الذين يعانون من ميلادي (تشانغ وآخرون، 2012). ويبدو أيضا أن جاذب كيميائي الوحيدات الرئيسي، ويشارك CCR2، ويجند لها، CCL2، في تطور ميلادي (Conductier وآخرون، 2010.؛ Naert وريفست، 2011؛ ​​ويستن وآخرون، 2012.). وعلاوة على ذلك، على الرغم من عدم وجود علاقة وراثية في موضع TLR4 وجد في الدراسات الروابط على نطاق الجينوم لAD (مورايس وآخرون، 2012)، وقد أظهرت هذه الأشكال في الجين TLR4 إلى زيادة حدوث المتأخر AD في السكان من إيطاليا (Minoretti وآخرون، 2006.؛ Balistreri وآخرون، 2008.) والصين (وانغ وآخرون، 2011.؛. تشن وآخرون، 2012؛. يو وآخرون، 2012). وتشير البيانات الواردة على البشر أن، في جوهره، AD هو أولا وأخيرا مرض مناعي.
لا تزال تناقش به للغاية سواء في تفعيل نظام المناعة الفطري هو سبب أو نتيجة للتطور م. في المختبر أظهرت الدراسات أن ييفي Aβ يعمل مباشرة على الخلايا الدبقية الصغيرة وتفعيل TLR4 وTLR2 والإفراج عن TNFα، مما يؤدي إلى موت الخلايا العصبية، كما هو موضح في دبيقي خطوط الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا العصبية coculture (Udan وآخرون، 2008.؛ ريد Geaghan وآخرون، 2009.؛. ستيوارت وآخرون، 2010). من ناحية أخرى، في الجسم الحي دراسات في نماذج الماوس تظهر صورة أخرى. تدق الرافضة أو تعطيل الجيني للTLR4 (تاهارا وآخرون، 2006... كلمات وآخرون، 2011) (، TLR2 ريتشارد وآخرون، 2008) (، Myd88. ميشود وآخرون، 2012)، أو مستقبلات TNFα (مونتغمري وآخرون آل.، 2011) في نماذج الفئران من AD جميع تفاقم أعراض المرض، مما يؤثر على الوظائف الإدراكية وترسب الأميلويد. وقد أدت هذه الدراسات إلى فهم أفضل للعمليات التهابات في AD. عوامل متعددة (الاستعداد الوراثي، وإزالة غير فعالة، والإصابات السابقة) تحفز تراكم Aβ في الجهاز العصبي المركزي في oligomers السامة واللوحات. تم الكشف عن هذه بواسطة الخلايا الدبقية الصغيرة كما DAMPs، وتفعيل استجابة TLR2 / TLR4. على الرغم من أن الخلايا الدبقية الصغيرة يمكن واضحة على نحو فعال Aβ في المختبر (ريد Geaghan وآخرون، 2009)، وهذه الخلايا ليست كافية لحل إصابة في الجسم الحي، كما يفوق إنتاج Aβ قدرة الخلايا الدبقية الصغيرة لإزالة الألغام.
نظام المناعة الفطرية، ومع ذلك، لا تمتلك القدرة على إزالة Aβ ويمكن أن تلعب دورا مفيدا في AD. وهذا ما يفسر الآثار الضارة لليطرق تماما من الاستجابة المناعية الفطرية، في حين أن تثبيط انتقائي يمكن أن يثبت أن استراتيجية علاجية فعالة. وسلط الضوء على ذلك فشل المسكنات للسيطرة م في التجارب السريرية على نطاق واسع (Imbimbo، 2009). وأشارت التقارير الأولية أن المرضى الذين توصف كان دورات طويلة من مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية انخفاض الإصابة ميلادي (McGeer وآخرون، 1996). ومع ذلك، فإنه يبدو أن الموضوعات على المسكنات في الواقع كان انخفاض الإصابة AD بسبب نظام المناعة الفطري نشطة بشكل مفرط، والتي ساعدت في منع تطور مرض الزهايمر. لم قمع المناعي عن طريق المسكنات لن يسهم في التخفيف م.
على هذا النحو، التحفيز تنظيم محكم من العمليات المناعية الفطرية بدلا من تثبيط التام هو طريقة أخرى لتصميم خيارات جديدة لعلاج AD. ويمكن تحقيق ذلك باستخدام بروابط TLR الرواية التي يمكن أن تحفز إزالة Aβ دون التسبب العمليات الالتهابية العلنية. في الآونة الأخيرة الآثار المفيدة من الدهون monophosphoryl A تجلى في نماذج الماوس من AD (ميشو وآخرون، 2013). Monophosphoryl الدهون A، وTLR4 يجند سميته، الناجم عن النشاط أكلة قوي في الخلايا الدبقية الصغيرة، على غرار LPS، بينما يحفز إنتاج لا يمكن الكشف عنها تقريبا من السيتوكينات الالتهابية أو ROS. في نماذج الماوس AD، العلاج المزمن مع monophosphoryl الدهون وخفض إنتاج Aβ بنسبة تصل إلى 80٪ في بعض الحالات وتطبيع سلوكهم المعرفي. هذا يمهد الطريق لتطوير علاجات المناعية آمنة في AD بأنه وحيد ولكن أيضا كعلاج تكميلي لاستراتيجيات Aβ خفض أخرى، مثل التطعيم.
على الرغم من أن معظم العمل في AD ركزت على التنكس العصبي والعمليات الالتهابية، وتراكم الأدلة تشير إلى أن التقلبات في الأوعية الدموية تماما كما هو مهم في تطوير ميلادي (Zlokovic، 2011). وقد ركزت معظم الدراسات عن الآثار المترتبة على الحصانة الفطرية في AD على دور الخلايا الدبقية الصغيرة. ومع ذلك، أظهرت الأبحاث رواية مثيرة أن ما تبقى من وحدة وعائية عصبية هو المرشح الرئيسي لوضع استراتيجيات علاجية جديدة لميلادي. وقد أظهرت العمل الرائد من فريق Zlokovic أن LRP-1، ونقل محددة على BBB، أمر بالغ الأهمية من أجل إزالة Aβ من الجهاز العصبي المركزي إلى الدورة الدموية (دين وآخرون، 2004). في مزيد من الدراسات، وجد الباحثون أن LRP-1 upregulated على التحفيز LPS، وبالتالي تعزيز يفترض خلية حوطية وقدرة الخلايا البطانية لاستيعاب Aβ (دين وآخرون، 2008). وعلاوة على ذلك، الأدينوسين ثلاثي الفوسفات ملزم ATP كاسيت (ABC) الناقلون عرضت ABCB1 وABCG2 أن تشارك في القضاء على Aβ من الجهاز العصبي المركزي (Cirrito وآخرون، 2005.؛ شيونغ وآخرون، 2009.؛ فان Assema وآخرون، 2012. ). وأشارت هذه النتائج الفرضية القائلة بأن تطهير Aβ في الدورة الدموية يمكن أن تحول توازنها، وبالتالي سحب Aβ من الجهاز العصبي المركزي إلى الدورة الدموية من خلال هذه الناقلين. هذا ما يسمى "فرضية بالوعة" يدعم تستهدف محيط أن يكون لها آثار إيجابية على الجهاز العصبي المركزي. واحدة من هذه المركب الذي يمكن أن يساعد اضح Aβ هو بلعم مستعمرة عامل تحفيز (M-CSF)، وعامل النمو الرئيسي لخلايا نسب الوحيدات (هيوم وماكدونالد، 2012). حقن أسبوعية من M-CSF على الفئران المعدلة وراثيا التي تتطور بشكل عفوي AD قبل ظهور العجز في التعلم والذاكرة منع فقدان المعرفية. أيضا استعادة العلاج سكان حيدات M1 في الدورة الدموية وإلى حد كبير انخفاض مستويات Aβ. وبالإضافة إلى ذلك، أدت المعاملة M-CSF في تحقيق الاستقرار في التدهور الإدراكي لدى الفئران المعدلة وراثيا التي عرضت بالفعل Aβ علم الأمراض (Boissonneault وآخرون، 2009). في المختبر، تعرض الخلايا الدبقية الصغيرة الماوس لM-CSF تمكن تحمض الجسيمات الحالة و ، في وقت لاحق، وتدهور المنضوية Aβ (ماجومدار وآخرون، 2007). وفي هذا الصدد، تم قياس مستويات منخفضة من M-CSF مؤخرا في المرضى الذين يعانون من AD سابق للأعراض أو الضعف الادراكي المعتدل، الذي جنبا إلى جنب مع مستويات منخفضة من السيتوكينات المكونة للدم أخرى توقع تطور السريع للمرض نحو تشخيص الخرف في وقت لاحق من 2-6 سنوات ( راي وآخرون، 2007). هذا هو واحد من الطرق للنظام المكونة للدم يمكن استخدامها لعلاج ميلادي (Lampron وآخرون، 2011).

النموذج العكسي.

الجهاز العصبي المركزي ويمكن أيضا تشكيل استجابة مناعية في المقاطع السابقة، أكدنا على قدرة الجهاز المناعي على تشكيل خصائص الجهاز العصبي المركزي، أثناء الشيخوخة والاضطرابات العصبية محددة. ومع ذلك، فقد أصبح من الواضح الآن أن العكس هو الصحيح: الجزيئات التي ينتجها الجهاز العصبي المركزي، سواء كانت خاصة أم لا بالنسبة للبيئة CNS، لديها القدرة على تعديل خصائص وظيفة الجهاز المناعي، من BBB وللالوعائية العصبية وحدة. نحن نعتزم الآن لتركيز النقاش حول تأثير اثنين morphogens الدماغ الكلاسيكية في تنظيم وظائف المناعة داخل الجهاز العصبي المركزي.

الاستجابات المناعية morphogens الدماغ شكل داخل الجهاز العصبي المركزي

وBBB هو بنية الجهاز العصبي المركزي وظيفي يتكون من الخلايا البطانية المتخصصة (ECS)، والتي هي تحت تأثير حاسم من الخلايا النجمية المحيطة بالأوعية. ومن المعروف أن BBB إلى تنظيم وظيفة الجهاز العصبي المركزي على الرغم من عدد من العمليات الفسيولوجية، ومنها هو السيطرة على دخول جزيئات التي تنتقل عن طريق الدم وتعميم الخلايا المناعية التي تعتبر حاسمة في تنظيم تنشيط جهاز المناعة خلال التوازن والمرض.
تقام ECS المتخصصة تشكيل BBB معا عن طريق المجمعات multiprotein المعروفة باسم البروتينات صلي (Lippoldt وآخرون، 2000.؛ Wolburg وLippoldt، 2002، الفاريز وتيل، 2007). الخلايا النجمية، والتي هي في بدل مقربة من الأوعية الدموية الدماغية، يساعد في الحفاظ BBB النزاهة والهدوء المناعة من خلال الآليات التي تعتمد على الاتصال وذلك من خلال الإفراج عن العوامل القابلة للذوبان (آرثر وآخرون، 1987.؛ Wosik وآخرون، 2007.؛ ألفاريز وآخرون. ، 2011). وقد تم تحديد TGF-β، neurotrophins، عوامل النمو FGFs، وحمض الريتينويك كعوامل الصادرة عن الخلايا النجمية التي تساهم في الأمثل BBB يعمل (فابري وآخرون، 1995.؛ كوياما وآخرون، 2003.؛ رويس وآخرون، 2003.، جدار، 2003 ؛ كوياما وآخرون، 2005.؛. Mizee وآخرون، 2013).
أجريت تجارب البروتين الأخيرة باستخدام الثقافات الأساسية للإنسان BBB-ECS حددت التعبير عن عدد من المستقبلات لجزيئات المشار كلاسيكي باسم morphogens الدماغ، بما في ذلك مستقبلات Netrins وللمسار القنفذ. خدمت هذه الملاحظات كأساس لفرضية أن morphogens الدماغ لديها القدرة على تنظيم وظيفة BBB، وبالتالي CNS التوازن والهدوء المناعي.

دور مسار القنفذ في تنظيم وظيفة BBB.

وتشير تقارير حديثة أن الخلايا النجمية تعبر عن وتفرز القنفذ الصوتي (Shh على) والتي BBB-ECS تحمل مستقبلات سمو وعوامل النسخ المصب. في المختبر والمجراة التجارب أظهرت أنه في حين تفعيل المسار سمو يقيد BBB نفاذية والجينات وتحييد الدوائية لل SHH أو مستقبلات صاحب السمو، SMO، ويؤثر على تشكيل BBB والاستقرار أثناء التطور الجنيني، وفي مرحلة البلوغ. أدى تحييد محدد من SMO في ECS إلى انخفاض كبير في صلي التعبير البروتين وتسرب منتجات الدم (الفيبرينوجين، المناعية، وApoB) في الجهاز العصبي المركزي من هذه الحيوانات. ومن المثير للاهتمام، وقد تبين Shh على أيضا على تعزيز الهدوء المناعي للBBB-ECS من خلال خفض التعبير عن جزيئات التصاق الخلايا، وإنتاج وإفراز كيموكينات proinflammatory، وهجرة الخلايا المناعية. وdysregulated هذه الأحداث المرتبطة بالمناعة حرجة خلال neuroinflammation وتؤدي إلى تشكيل الآفات الالتهابية. وتدل هذه التطورات الأخيرة في مجال البيولوجيا BBB أن مسار سمو يوفر تأثير تعزيز الحاجز وآلية مضادة للالتهابات الداخلية داخل الجهاز العصبي المركزي، وتوفر أدلة على وجود دور غير تقليدي من morphogens الدماغ في تشكيل الاستجابات المناعية داخل الجهاز العصبي المركزي.

دور مسار Netrin في تنظيم الجهاز العصبي المركزي الاستجابات المناعية.

وعلى غرار عائلة محدثة التخلق القنفذ، جزيء مثل laminin، netrins، توسط مجموعة واسعة من الوظائف في جميع أنحاء تطوير وتشتهر دورها في العظة التوجيه جذابة أو مثيرة للاشمئزاز (ايفسي، 1999؛ كانغ وآخرون، 2004.؛ أدلر وآخرون آل.، 2006). ومن المعروف Netrins لقدرتها على تعزيز التوجيه لCNS الخلايا العصبية صواري وهجرة الأسلاف دبقية قليلة التغصن. ويمكن أيضا التعبير عنها أن يسببها morphogens القنفذ. وتشير البيانات الأخيرة أن الإنسان والفأر BBB-ECS في المختبر والمجراة تعبير عن ينظم netrin-1 و -4 وهذا التعبير netrin على تفعيل التهابات. وقد أظهرت Netrins أيضا إلى تشجيع تشكيل BBB بالتحريض على التعبير عن جزيئات معقدة صلي والاستهداف السليم لصلي microdomains الغشاء. تحييد الجيني للnetrins يدفع العديد من الميزات من BBB انهيار، بما في ذلك تعطيل TJ البروتين التعبير. أثناء التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي، وهو مرض neuroinflammatory تميزت BBB انهيار، netrin-1 العلاج خفض تسرب البروتين في الدم في الحبل الشوكي وتحسينها شدة المرض.
وبالتالي، فإن الأدلة تتراكم تشير الآن أن morphogens الدماغ الكلاسيكية لها دور كبير في تعزيز والحفاظ على وظيفة الجهاز العصبي المركزي BBB وهدوء المناعي سواء أثناء التطوير وخلال مرحلة البلوغ.
في الختام، ما الذي يحمله المستقبل في تسخير الحصانة للوقاية أو العلاج الحاد المزمن، وحالات التدهور العصبي التنموية؟ كما وصفت لفترة وجيزة أعلاه، على مدى العقد الماضي، والبحث من قبل أربع مجموعات مستقلة يسلط الضوء على حقبة جديدة من علم المناعة العصبية. لم يعد حقل تركز على الأمراض التي يعتقد أن الجهاز المناعي لمهاجمة الدماغ. وبالمثل، فإنه لم يعد المجال الذي الجهاز المناعي ينبغي استبعادها بشكل عشوائي. وهو المجال الذي النظامين تتفاعل ليس فقط ولكن أيضا أن يكون الاعتماد المتبادل. الدماغ، كما كان معروفا منذ عقود، تسيطر على كل وظائف الجسم، بما في ذلك أجهزة اللمفاوية. فمن الواضح الآن أن، على أساس المعاملة بالمثل، الدماغ يعتمد على الخلايا المناعية للصيانة واللدونة. في ظل ظروف المرض، مثل الأمراض المرتبطة بالعمر النمو العصبي أو مزمنة، والخلايا المناعية المقيمين موجودة بأعداد كافية أو تفعيلها بالقدر الكافي للتعامل مع هذا التهديد، ويجب أن يعين حيدات المتداولة. لم تعد تعتبر الحواجز CNS جدار منيع. يخدم حاجز الدم-CSF كواجهة الوظيفية وكبوابة انتقائية لالترصد المناعي ودخول الخلايا المناعية على الحاجة، السحايا كموقع لتعتمد على جهاز المناعة ليونة الدماغ، وBBB كحاجز صحيح أن يضمن وظيفة الدماغ من دون أي إزعاج . أن ترجمة هذه المعرفة يؤدي إلى تحسين مرونة الدماغ وتطوير أساليب جديدة لعلاج الأمراض العصبية النمائية والاعصاب، وكذلك الاضطرابات النفسية أو شيخوخة الدماغ والخرف.

القسم السابق القسم التالي

الحواشي

• • تلقى 30 يوليو 2013.
  • تلقى مراجعة 26 أغسطس 2013.
  • قبلت 28 أغسطس 2013.
• MS يحمل موريس وإلسي كاتز الاستاذ الجامعي الرئيس في علم المناعة العصبية. وأيد هذا العمل من قبل مجلس البحوث المتقدمة المنح الأوروبية نظرا لMS وأيد هذا العمل في المقام الأول من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية والمعاهد الوطنية للصحة جرانت NS081026 إلى JK ومؤسسة أبحاث متلازمة ريت. وأيد SR من قبل فون للبحوث كيبيك-سانتيه والمعاهد الكندية في مجال البحوث الصحية، ومؤسسة البحوث العلمية التصلب المتعدد من كندا. AP هو باحث بارز من فون للبحوث أون سانتيه كيبيك التي تدعمها المعاهد الكندية في مجال البحوث الصحية، متعددة جمعية التصلب كندا، ومؤسسة البحوث العلمية التصلب المتعدد من كندا البحوث. JK بفضل نيكي واتسون لمساعدة مع المخطوطة وأعضاء مختبر للتعليقات التي لا تقدر بثمن والعمل الجاد.
• الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.
• ينبغي أن تعالج المراسلات للدكتور ميخال شفارتس، قسم علم الأعصاب في معهد وايزمان للعلوم في رحوفوت 76100، إسرائيل. Michal.schwartz@weizmann.ac.il

• حقوق التأليف والنشر © 2013 المؤلفين 0270-6474 / 13 / 3317587-10 $ 15.00 / 0

القسم السابق

المراجع

• ↵
  • أدلر CE،
  • فيتر RD،
  • Bargmann CI

  (2006) UNC-6 / Netrin يدفع التباين العصبية ويحدد موقع تشكيل محور عصبي. نات Neurosci 9: 511 - 518.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • أغوزي A،
  • BARRES BA،
  • بينيت ML

  (2013)؟ الدبقية الصغيرة: كبش الفداء، المخرب، أو أي شيء آخر العلوم 339: 156 - 161.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • عجمي B،
  • بينيت JL،
  • كريجر C،
  • تتزلاف W،
  • روسي FM

  (2007) محلي التجديد الذاتي يمكن الحفاظ CNS الخلايا الدبقية الصغيرة الصيانة وظيفة في جميع أنحاء حياة الكبار. نات Neurosci 10: 1538 - 1543.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • أكياما H،
  • بارجر S،
  • بارنوم S،
  • برات B،
  • باور J،
  • كول GM،
  • كوبر NR،
  • Eikelenboom P،
  • Emmerling M،
  • Fiebich BL،
  • عصفور CE،
  • Frautschy S،
  • غريفين WS،
  • هامبل H،
  • هال M،
  • Landreth G،
  • LUE L،
  • Mrak R،
  • ماكنزي IR،
  • McGeer PL،
  • وآخرون.

  (2000) التهاب ومرض الزهايمر. Neurobiol الشيخوخة 21: 383 - 421.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • الفاريز JI،
  • تيل JM

  (2007) والدليل على التغيرات التفاضلية للبروتينات معقدة صلي في neurocysticercosis الفئران تعتمد على CNS الأوعية الدموية. الدماغ الدقة 1169: 98 - 111.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • الفاريز JI،
  • Dodelet-Devillers A،
  • الكبير H،
  • Ifergan I،
  • فابر PJ،
  • Terouz S،
  • صباغ M،
  • Wosik K،
  • Bourbonnière L،
  • برنار M،
  • فان Horssen J،
  • دي فريس سعادة،
  • Charron F،
  • برات A

  (2011) ومسار القنفذ يعزز حاجز الدم في الدماغ والجهاز العصبي المركزي السلامة السكون المناعي. العلوم 334: 1727 - 1731.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • آرثر FE،
  • الرعشات RR،
  • بومان PD

  (1987) بوساطة نجمية تحريض منعطفات ضيقة في الدماغ الشعرية البطانة: فعال في المختبر نموذج. أبحاث الدماغ 433: 155 - 159.
  ميدلاين جوجل الباحث العلمي
• ↵
  • Auffray C،
  • Sieweke MH،
  • Geissmann F

  (2009) وحيدات الدم: التنمية، عدم التجانس، والعلاقة مع الخلايا الجذعية. أنو القس IMMUNOL 27: 669 - 692.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • Balistreri CR،
  • غريمالدي MP،
  • Chiappelli M،
  • Licastro F،
  • Castiglia L،
  • Listì F،
  • فاستو S،
  • ليو D،
  • كاروسو C،
  • Candore G

  (2008) رابطة بين الأشكال المتعددة من TLR4 والجينات CD14 ومرض الزهايمر. عملة التداول فارم ديس 14: 2672 - 2677.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • باروخ K،
  • شوارتز M

  (2013) خلايا T CNS محددة الشكل وظيفة الدماغ عن طريق الضفيرة المشيمية. الدماغ Behav إمان، مقدما نشر على شبكة الإنترنت. استرجاع 15 أبريل 2013.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • باروخ K،
  • رون-هاريل N،
  • غال H،
  • Deczkowska A،
  • Shifrut E،
  • Ndifon W،
  • Mirlas-Neisberg N،
  • كاردون M،
  • فاكنين I،
  • Cahalon L،
  • Berkutzki T،
  • ماتسون MP،
  • غوميز بينيلا-F،
  • فريدمان N،
  • شوارتز M

  (2013) الحصانة CNS محددة في التحولات الضفيرة المشيمية نحو مدمر TH2 التهاب في شيخوخة الدماغ. بروك Natl أكاد العلوم الولايات المتحدة الأمريكية 110: 2264 - 2269.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • البيرة DR،
  • هنكل JS،
  • تشاو W،
  • وانغ J،
  • ابيل SH

  (2008) خلايا CD4 + T تدعم العصبية الدبقية، وبطء تطور المرض، وتعديل التشكل الدبقية في نموذج حيواني من الموروث ALS. بروك Natl أكاد العلوم الولايات المتحدة الأمريكية 105: 15558 - 15٬563.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • Boissonneault V،
  • الفيلالي M،
  • ليسار M،
  • Relton J،
  • وونغ G،
  • ريفست S

  (2009) آثار مفيدة قوية من بلعم عامل تحفيز مستعمرة على ترسب بيتا اميلويد وضعف الادراك في مرض الزهايمر. الدماغ 132: 1078 - 1092.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • براون J،
  • وانغ H،
  • Hajishengallis GN،
  • مارتن M

  (2011) شبكات يشير TLR: تكامل جزيئات محول، تحركات، وعبر الحديث. J دنت الدقة 90: 417 - 427.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • Butovsky O،
  • زيف Y،
  • شوارتز A،
  • اندا G،
  • Talpalar AE،
  • Pluchino S،
  • مارتينو G،
  • شوارتز M

  (2006) الخلايا الدبقية الصغيرة تفعيلها من خلال IL-4 أو الإنترفيرون جاما تحفز الخلايا العصبية بشكل مختلف وoligodendrogenesis من الخلايا الجذعية / السلف الكبار. مول خلية Neurosci 31: 149 - 160.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • Cagnin A،
  • بروكس DJ،
  • كينيدي AM،
  • غن RN،
  • مايرز R،
  • Turkheimer FE،
  • جونز T،
  • Banati RB

  (2001) في الجسم الحي قياس تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة في الخرف. انسيت 358: 461 - 467.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • تشن RZ،
  • Akbarian S،
  • تيودور M،
  • Jaenisch R

  (2001) نقص ميثيل الدليل السياسي الشامل البروتين 2 ملزمة في الجهاز العصبي المركزي الخلايا العصبية النتائج في النمط الظاهري مثل ريت في الفئران. نات جينيه 27: 327 - 331.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • تشن YC،
  • ييب PK،
  • هوانغ YL،
  • الشمس Y،
  • ون ليرة لبنانية،
  • تشو YM،
  • تشن TF

  (2012) تسلسل المتغيرات من حصيلة مثل مستقبلات 4 وتأخر ظهور مرض الزهايمر. بلوس واحد 7: e50771.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • Cirrito JR،
  • دين R،
  • فاجان AM،
  • الدوار ML،
  • Parsadanian M،
  • فين MB،
  • جيانغ H،
  • قبل JL،
  • Sagare A،
  • بالة KR،
  • بول SM،
  • Zlokovic BV،
  • Piwnica-الديدان D،
  • هولتزمان DM

  (2005)، بروتين سكري P نقص في حاجز الدم في الدماغ يزيد من ترسب الأميلويد بيتا في نموذج الفأر مرض الزهايمر. J كلين استثمر 115: 3285 - 3290.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • كوكروفت DW،
  • ديفيس BE

  (2006) آليات فرط الاستجابة مجرى الهواء. J الحساسية كلين IMMUNOL 118: 551 - 559، مسابقة 560-561.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • Conductier G،
  • بلوندو N،
  • جويون A،
  • ناهون JL،
  • ROVERE C

  (2010) دور البروتين الوحيدات جاذب كيميائي MCP1 / CCL2 في الأمراض neuroinflammatory. J Neuroimmunol 224: +93 - 100.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • دين R،
  • وو Z،
  • Sagare A،
  • ديفيز J،
  • دو يان S،
  • هام K،
  • شو F،
  • باريزي M،
  • ارو B،
  • هو الأب،
  • Spijkers P،
  • قوه H،
  • أغنية X،
  • Lenting PJ،
  • فان نوستراند WE،
  • Zlokovic BV

  (2004) التفاعل LRP / بيتا اميلويد الببتيد يتوسط هروب رأس المال الدماغ التفاضلية من إيسفورمس Abeta. نيورون 43: 333 - 344.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • دين R،
  • Sagare A،
  • Zlokovic BV

  (2008) دور LRP سطح الخلية وقابل للذوبان LRP في حاجز الدم في الدماغ إزالة Abeta في مرض الزهايمر. عملة التداول فارم ديس 14: 1601 - 1605.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • Derecki NC،
  • كارداني AN،
  • يانغ CH،
  • Quinnies KM،
  • Crihfield A،
  • لينش KR،
  • Kipnis J

  (2010) تنظيم التعلم والذاكرة بالحصانة السحائية: دور رئيسي لIL-4. J إكسب ميد 207: 1067 - 1080.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • Derecki NC،
  • Cronk JC،
  • لو Z،
  • شو E،
  • ابوت SB،
  • Guyenet PG،
  • Kipnis J

  (2012) من النوع البري أمراض اعتقال الخلايا الدبقية الصغيرة في نموذج الفأر من متلازمة ريت. الطبيعة 484: 105 - 109.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • Derecki NC،
  • Cronk JC،
  • Kipnis J

  (2013) دور الخلايا الدبقية الصغيرة في الدماغ الصيانة: الآثار المترتبة على متلازمة ريت. اتجاهات IMMUNOL 34: 144 - 150.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • Ekdahl CT،
  • Kokaia Z،
  • يندفال O

  (2009) التهاب الدماغ والخلايا العصبية الكبار: الدور المزدوج من الخلايا الدبقية الصغيرة. علم الأعصاب 158: 1021 - 1029.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • إليوت MR،
  • Ravichandran KS

  (2010) تخليص الخلايا أفكارك: الآثار المترتبة في الصحة والمرض. J خلية بيول 189: 1059 - 1070.
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • Erblich B،
  • وقال تشو L،
  • Etgen AM،
  • Dobrenis K،
  • بولارد JW

  (2011) غياب التحفيز مستعمرة النتائج عامل 1 مستقبلات في فقدان الخلايا الدبقية الصغيرة، وتطوير الدماغ تعطل وعجز حاسة الشم. بلوس واحد 6: e26317.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • فابري Z،
  • توبهام DJ،
  • رسوم D،
  • Herlein J،
  • كارلينو JA،
  • هارت MN،
  • سريرام S

  (1995) TGF بيتا 2 انخفاض الهجرة من الخلايا الليمفاوية في المختبر، وصاروخ موجه من الخلايا في الجهاز العصبي المركزي في الجسم الحي. J IMMUNOL 155: 325 - 332.
  ملخص
• ↵
  • فاوست J

  (2009) السيطرة الجزيئية ليونة الدماغ وإصلاح. بروغ الدماغ الدقة 175: 501 - 509.
  CROSSREF ميدلاين الباحث العلمي من Google
• ↵
  • فلوريس S،
  • Blezer EL،
  • Schreibelt G،
  • DOPP E،
  • فان دير بول SM،
  • Schadee-Eestermans IL،
  • نيكولاي K،
  • ديكسترا CD،
  • دي فريس HE

  (2004) نفاذية حاجز الدم في الدماغ والوحيدات تسلل في حساسية التهاب الدماغ التجريبية: دراسة MRI الكمية. الدماغ 127: 616 - 627.
  الملخص / الحرة النص الكامل

 

[رافت ابراهيم]

 

http://www.nature.com/cddis/journal/...s2014227a.html



-زيدان Chuliá 1، B-HN دي أوليفيرا 1، AB Salmina 2، MF كازانوفا 3،

DP Gelain 1، M نودا 4، A Verkhratsky 5، 6، 7 وJ CF موريرا 1

• 1 سنترو دي Estudos م Estresse Oxidativo، التابعة لقسم Bioquímica، معهد للعلوم Básicas دا Saúde، الجامعة الاتحادية دو ريو غراندي دو سول، بورتو أليغري، البرازيل
• 2 قسم الكيمياء الحيوية، الطب، الصيدلة والسمية الكيمياء، جامعة كراسنويارسك الطبية الحكومية، كراسنويارسك، روسيا
• 3 قسم الطب النفسي والعلوم السلوكية في جامعة لويزفيل، لويزفيل، KY، الولايات المتحدة الأمريكية
• 4 مختبر الفيزيولوجيا المرضية، كلية الدراسات العليا في العلوم الصيدلية، جامعة كيوشو، فوكوكا، اليابان
• 5 كلية علوم الحياة، جامعة مانشستر، مانشستر، المملكة المتحدة
• 6 IKERBASQUE، مؤسسة الباسك للعلوم وبيلباو، إسبانيا
• 7 قسم العلوم العصبية في جامعة بلاد الباسك UPV / EHU، ليوا، أسبانيا

المراسلات: F-زيدان Chuliá، سنترو دي Estudos م Estresse Oxidativo، التابعة لقسم Bioquímica، معهد للعلوم Básicas دا Saúde، الجامعة الاتحادية دو ريو غراندي دو سول، روا راميرو بارسيلوس 2600 ANEXO، بورتو أليغري 90٬035-003، ريو غراندي دو سول ، البرازيل. هاتف: +55 51 3308 5577؛ فاكس: +55 51 3308 5535؛ البريد الإلكتروني: fzchulia.biomed@gmail.com
تلقى 20 فبراير 2014. المنقحة 13 أبريل 2014؛ قبلت 16 أبريل 2014
التعديل الأخير تم بواسطة D بانو

أعلى الصفحة ملخص

مرض التوحد ومرض الزهايمر (AD) هي على التوالي، والأمراض العصبية النمائية والتنكسية مع عبء الوبائي زيادة. وamyloid- المرتبطة AD β السلائف بروتين α وقد تبين أن تكون مرتفعة في التوحد الشديد، مما أدى إلى "فرضية الابتنائية" من ​​المسببات لها. نحن هنا إجراء تحليل ميكروأري تركيزا من الجينات التي تنتمي إلى تحقيقها وWNT يشير شلالات، فضلا عن الجينات المتعلقة AD وموت الخلايا المبرمج مسارات في عينات من دماغ الأفراد المصابين بالتوحد، لتقديم مزيد من الأدلة لأهميتها المرضية لهذه الشلالات لمرض التوحد. باستخدام حزمة limma من R ومعدل اكتشاف كاذبة، أثبتنا أن 31٪ (116 من 374) من جينات المنتمين إلى هذه الممرات عرض تغييرات كبيرة في التعبير (تصحيح P -values ​​<0.05)، مع الجينات ذات الصلة الميتوكوندريا يجري الأكثر downregulated. كما وجدنا upregulation من GRIN1، الوحيدات تشكيل قناة مستقبلات الغلوتامات NMDA، وMAP3K1، المنشط المعروف من JNK وERK مسارات مع تأثير مضاد للأفكارك. كانت تعبيرا عن PSEN2 (presinilin 2) وAPBB1 (أو F65) أقل بكثير عند مقارنتها مع عينات السيطرة. وبناء على هذه النتائج، فإننا نقترح نموذجا للNMDA الغلوتامات بوساطة مستقبلات تفعيل ERK النشاط -secretase ألفا والتكيف الميتوكوندريا في الخلايا التي يمكن أن تفسر فرط الدماغ المبكر واضطراب اللدونة متشابك وconnectome في التوحد. وأخيرا، وتحليل النظم الصيدلة من النموذج الذي يدمج كل هذه الجينات معا (NOWADA) أبرز المغنيسيوم (مغ 2 +) وrapamycin مثل الأدوية الأكثر فعالية لاستهداف هذا نموذج الشبكة في سيليكون. تطبيقها العلاجية المحتملة، في سياق التوحد، وبالتالي مناقشتها.
الكلمات الدالة:

انتشار؛ الميتوكوندريا. APP. المغنيسيوم؛ rapamycin

الاختصارات:

A β، β amyloid-. م، ومرض الزهايمر. APP، amyloid- β السلائف البروتين. ASD، التوحد اضطراب طيف. ER، الشبكة الإندوبلازمية. فرانكلين روزفلت، ومعدل اكتشاف كاذبة. GFAP، ييفي الدبقية البروتين الحمضية. هبس، مركزا-الاختناقات. IGF-1، عامل نمو الأنسولين 1؛ IGF-2، عامل نمو الأنسولين 2؛ NH-الإفطار، غير محور-الاختناقات. α ساب، يفرز amyloid- β السلائف البروتين α؛ β ساب، يفرز amyloid- β السلائف β البروتين

التوحد هو اضطراب النمو العصبي تتميز أنماط النشاط معينة والتفاعل الاجتماعي الشاذ والاتصالات. 1 لقد تم اقتراح العوامل الوراثية والبيئية لحساب ما يبدو تزايد معدلات تشخيص التوحد. 2، 3 هو، ومع ذلك، فهم أساس لها العصبي البيولوجي سيئة وعرض الظواهر السلوكية على درجة عالية من التجانس، مما أدى إلى تعريف "اضطرابات طيف التوحد" (أي إس دي إس). وقد أفيد أن الإصابة السريرية من ASD يبدو أن يسبقه مرحلة من فرط الدماغ في السنوات الأولى من الحياة تليها معدلات النمو انخفضت بين 5 و 12 سنة من العمر، وذلك بالمقارنة مع الضوابط. 4 ويقابل هذه التشوهات التي كتبها مستويات أعلى من المستمدة من الدماغ عامل التغذية العصبية، عوامل النمو الانسولين 1 و 2 (IGF-1 و IGF-2)، ملزم IGF البروتين 3، والنمو ملزم هرمون البروتين، neurotrophin-4، وneuroinflammatory استجابة في أدمغة ASD. 5، 6، 7، 8 التغييرات في دعم غذائي قد تكون مسؤولة عن نمو غير طبيعي في المخ وconnectome المتغيرة، وبالتالي تحديد أعراض ASD متعددة. قطعة الأخيرة من الأدلة تشير أيضا إلى دور لمعالجة المحررة من القيود التنظيمية من مرض الزهايمر (AD) -associated amyloid- β (A β) السلائف البروتين (APP) في علم الأمراض المرتبطة ASD. ويعتبر β أن تكون محورية في الفيزيولوجيا المرضية لم، والتي في أشكال الوراثية ومتفرقة لها ويبدو أن السبب الأكثر شيوعا من الخرف المرتبط بالعمر. يتميز AD بواسطة بصمات المرضية المحددة التي يمثلها الودائع خارج الخلية من A β ييفي، وتراكم داخل العصبون من التشابك الليفي العصبي بسبب hyperphosphorylation من خيوط هيكل الخلية تاو، فضلا عن انخفاض قيمة تكوين الخلايا العصبية. والنتيجة النهائية هي ضخمة موت الخلايا العصبية وما يتبع ذلك انخفاض في الوظائف المعرفية. 9، 10، 11 وفي ASD، وAPP المرتبطة AD، ولا سيما منتجاتها معالجة الأعصاب أو يفرز APP α (ساب α) وجد، لتكون مرتفعة. 12 تشير الأبحاث الحالية إلى أن تشوهات من المخيخ، ويعتقد الآن أن يكون لها دور في الوظائف المعرفية، وترتبط مع مرض التوحد. كونها واحدة من مناطق الدماغ التي هي الأكثر وضوحا التغيرات الخلوية والنمو في اضطراب. 13، 14، 15
نحن هنا تناول مسألة ما إذا كانت التغييرات التعبير في نفس مجموعة من الجينات التي لوحظت في AD أمراض الأعصاب ويمكن أيضا أن تكون موجودة في التوحد. وإذا كان هذا هو الحال، سواء كانت أدوية اختبار ليس فقط في سياق التوحد ولكن أيضا في AD يمكن النظر في العلاجات في هؤلاء المرضى. وتظهر دراستنا التعبير تغير الجينات تنتمي إلى تحقيقها، WNT، AD، ومسارات موت الخلايا المبرمج في عينات من دماغ الأفراد المصابين بالتوحد. بالإضافة إلى ذلك، تحليل النظم الصيدلة من هذا المسار الذي يدمج NOTCH، WNT، AD، والجينات ذات الصلة موت الخلايا المبرمج تشير المغنيسيوم (مغ 2 +) وrapamycin لمزيد من الاكتشافات العلاجية في سياق التوحد. مجمعين / الأدوية التي الاستخدام العلاجي وقد سبق لنماذج AD مختلفة. 16، 17
أعلى الصفحة النتائج

تحليلات الشبكة الفرعية من مسارات ذات الصلة AD تكشف التغييرات النسخي في المخيخ من الأفراد الذين يعانون من التوحد

لتحليل التغيرات النسخي المحتملة في الجينات تنتمي إلى مسارات ترتبط عادة إلى AD علم الأمراض في التوحد، ونحن شيدت أربعة نماذج شبكات فرعية من NOTCH (التكميلي الشكل S1A)، WNT (التكميلي S2A الشكل)، AD ( الشكل 1A)، وموت الخلايا المبرمج (التكميلي الرقم S3A) مسارات. تتضمن هذه الشبكات الفرعية 41، 136، 171، و 70 منها الجينات / البروتينات (الجداول التكميلية S1-S4). بعد ذلك، أجرينا تحليل ميكروأري تركيزا من الجينات التي تنتمي إلى كل شبكة فرعية باستخدام عينات من المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد مقابل الضوابط. في 31٪ (116 من 374) من جينات المنتمين إلى هذه النماذج في سيليكون وأعرب تفاضلي في عينات ASD (تصحيح P -value <0.05) ( الجدول 1). وبشكل أكثر تحديدا، ~ 30٪ للNOTCH (12 الجينات)، ~ 23٪ للWNT (31 الجينات)،> 40٪ لAD (69 الجينات)، و~ 26٪ للموت الخلايا المبرمج (18 الجينات). UQCRC1، NDUFS3، NDUFA9، يونيو، CIDEB، CDC42، NDUFA6، NDUFB7، NDUFA1، وCOX4I1 ( الجدول 1 كان) أفضل 10 الجينات التي عرض أهم التغيرات في التعبير عنها. كانت الجينات downregulated السيتوكروم ج اختزال وNADH نازعة ذات الصلة. بين الجينات ذات الصلة AD، upregulation من GRIN1، الوحيدات تشكيل قناة مستقبلات الغلوتامات NMDA، وMAP3K1، المنشط المعروف من JNK وERK مسارات مع تأثير مضاد للأفكارك، تم العثور أيضا جنبا إلى جنب مع التعبير أقل بكثير من presinilin 2 (PSEN2 ) وAPBB1 ( الجدول 1).
الشكل 1.

تحليل AD الشبكة الفرعية. (أ) المشهد العام من التفاعلات بين الجينات / البروتينات التي تنتمي إلى مسار ميلادي (map05010؛ KEGG المسار؛ http://www.genome.jp/kegg/pathway.html). لفي سيليكون نموذج الشبكة تم تطويره باستخدام قاعدة بيانات STRING 9.05 أداة بحث الموارد، تحت درجة ثقة 0.600 واستخدام "قواعد البيانات" و "التجارب" كما خيارات الإدخال. (ب) تحليل ميكروأري المركزة من الجينات ذات الصلة AD في المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد مقابل الاصحاء على في نموذج سيليكون. شيد المحور z لتمثيل التعبير الجيني النسبي باستخدام برنامج ViaComplex

الرقم الكامل وأسطورة (308 K)

الجدول 1 - أعرب تفاضلي الجينات من NOTCH، WNT، مرض الزهايمر، وموت الخلايا المبرمج الشبكات الفرعية في المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد.

الجدول الكامل

لفي نماذج سيليكون وتعرضوا لاحقا لمزيد من التحليل مع برنامج ViaComplex أن يرسم التعبير يعني القيم المستمدة من كل عينة المريضة (التوحد) على التعبير عن عينات صحية التحكم (المحور z) في نموذج الشبكة (NOTCH، WNT، AD، وموت الخلايا المبرمج)، عرضها كما ثنائية الأبعاد المناظر الطبيعية (2D) ViaComplex ولدت (أرقام التكميلية S1B-S3B، و الشكل 1B). المؤامرة ولدت يتصور المشهد العام في التعبير الجيني لعينات المريضة (التوحد) مقابل الاصحاء لكل شبكة فرعية. مستويات التعبير لونا مميزا مع الألوان الدافئة (الأصفر إلى الأحمر) كونه مؤشرا على زيادة التعبير، في حين الباردة (الأخضر والأزرق) الألوان تشير إلى انخفاض التعبير الجيني عند مقارنتها مع عينات السيطرة. كشفت المؤامرات 2D ViaComplex على upregulation العام للمسار NOTCH (التكميلي الشكل S1B) وانخفاض معين في التعبير عن الجينات ذات الصلة الميتوكوندريا (مجموعة الشبكة على الجانب الأيسر العلوي. الشكل 1B).

NOWADA هو نموذج الشبكة التكاملية لتحقيقها، WNT، شبكات فرعية م، وموت الخلايا المبرمج

كنتائج قدم سبق وأظهرت تغييرات كبيرة في التعبير عن الجينات التي تنتمي إلى تحقيقها، WNT، AD، ومسارات موت الخلايا المبرمج في الخزعات المخ المخيخ من المرضى ASD، كان هدفنا المقبل لاختبار جدوى لفي نموذج سيليكون والتي هي قادرة على دمج هذه الأربعة شبكات فرعية في شبكة واحدة واحدة، وبالتالي لتوصيف الطريق الجزيئية ذات الصلة. الرسم البياني فين، الذي يتصور مستوى تكامل المعلومات الشبكة الفرعية ( الشكل 2)، يدل على أن شبكات فرعية تحتوي على أربعة العقد المشتركة (الجينات / البروتينات) مما يتيح التواصل مع بعضهم البعض. ثم، باستخدام STRING 9.05 ('تجارب "و" قواعد البيانات "؛ نتيجة ثقة 0.600) والتآمر مع برنامج Cytoscape، وضعنا D isease-موت الخلايا المبرمج (NOWADA) الجين / بروتين نموذج الشبكة التفاعل وNO TCH- W NT- A lzheimer ل قادرة على تميز في سيليكون وهذه التفاعلات الجزيئية ( الشكل 3). ويتكون هذا النموذج من 374 الجينات / البروتينات ربط من خلال 3665 التفاعلات، مع خمسة فقط العقد (PPP3CA، PPP3CB، PPP3CC، PPP3R1، وPSEN1) المساهمة في المجموعات الثلاث القصوى (NOTCH، WNT، AD، أو شبكات فرعية موت الخلايا المبرمج) في نفس الوقت .
الرقم 2.

فين تخطيطي يبين تكامل المعلومات من الشبكات الفرعية التي شملتها الدراسة. NOTCH، WNT، AD، ونماذج الخلايا تحتوي على العقد المشتركة (الجينات / البروتينات) مع، على الأقل، الشبكة الفرعية واحد

الرقم الكامل وأسطورة (91 K)

الرقم 3.

نموذج شبكة من التفاعلات بين الجينات / البروتين ينتمون إلى تحقيقها، WNT، AD، والشبكات الفرعية موت الخلايا المبرمج (شبكة NOWADA). وقد تم تطوير النموذج الحالي باستخدام قاعدة بيانات STRING 9.05 أداة بحث الموارد، تحت درجة ثقة 0.600، وباستخدام "قواعد البيانات" و "التجارب" كخيارات المدخلات وتصور بالتآمر مع برنامج Cytoscape. ويمثل عدد المساهمات الشبكة الفرعية من كل جين / البروتين داخل الشبكة في الشكل كما هو مبين في أقحم

الرقم الكامل وأسطورة (420 K)

تحديد مهلا مركز الجينات / البروتينات داخل شبكة NOWADA في سياق التوحد

من أجل وصف الخصائص العالمية للشبكة، قمنا بقياس centralities 18 أو الطوبوغرافية خصائص الشبكة على النحو التالي: (أ) 'التوتر'، وهو ما يمثل مقدار اجتاز عقدة (الجين / بروتين) من خلال عدد كبير من الطرق المثالية أو مسارات قصيرة في الشبكة. وأكد أكثر من سوف الجين / بروتين الذي اجتازه عدد أكبر من مسارات قصيرة أن يكون، من حيث التعريف. (ب) "اتصال أو درجة" يحدد مقدار طوبولوجيا المحلي لكل عقدة من خلال تلخيص عدد العقد المجاورة لها. يقدم (ج) 'Betweenness "، الذي يشبه إلى الإجهاد كخاصية شبكة الطوبوغرافية، وهو مؤشر مركزية أكثر إفادة وضعت كما أنه يقيس مدى تكرار أقصر الطرق، وربط كل زوج من العقد، يمر نقطة معينة الثالثة. وبعبارة أخرى، على حد سواء "التوتر" و "betweenness 'إعطاء معلومات حول تأثير عقدة من انتشار المعلومات في جميع أنحاء الشبكة. (د) وأخيرا "التقارب"، التي حددها معكوس من متوسط ​​طول أقصر الطرق للوصول إلى جميع البروتينات الأخرى في الشبكة، ويعطي فكرة عن مستوى القرب من عقدة العقد الأخرى أو كم من الوقت سيستغرق ل المعلومات لينتقل من نقطة معينة إلى العقد الأخرى في الشبكة. منطقيا، أكبر قيمة، وأسرع ينتشر المعلومات. تركيزنا في هذا الجزء من الدراسة هو استهداف الضعيفة (المركزية) المكونات في شبكة NOWADA مع 31٪ من جيناته التي تظهر تغييرات كبيرة في التعبير في المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد (تصحيح P -values ​​<0.05). على حساب كل قيمة مركزية لكل الجين / بروتين (الجدول التكميلي S5)، حددنا للاختناقات محور (هبس) من شبكة الذي عرض أيضا قيم أعلى من "التوتر" وcentralities قربه. وكانت هذه العقد شبكة (بالترتيب الأبجدي) APP، CALM1، CASP3، CTNNB1، DVL2، DVL3، EP300، FZD5، GSK3B، MYC، NOTCH1، PLCB2، PRKCA، وTP53 (الجدول التكميلي S6 و الشكل 4). كأعضاء المركزي، هذه الجينات / البروتينات والسيطرة على تدفق المعلومات البيولوجية داخل الشبكة وتعطيل لل(على سبيل المثال، من خلال التفاعل المخدرات) يمكن أن تدمر الشبكة بالكامل إلى مكونات صغيرة. بشكل ملحوظ، CTNNB1، ترميز الجينات لβ -catenin البروتين (التكميلي S2 الجدول)، وكان عقدة مع القيم العليا لجميع centralities قياس (الجدول التكميلي S6 و الشكل 4).
الرقم 4.

تحليل الخصائص الطوبوغرافية (أ - ج) من الجينات / البروتينات التي تنتمي إلى شبكة (NOWADA). الخطوط المتقطعة وتشير قيمة العتبة لكل عقار. يتم وضع علامة الجينات Upregulated وdownregulated في الشبكة الفرعية مع مثلثات حمراء وزرقاء، على التوالي، كما هو مبين في أقحم. لاحظ أن NH-إفطار وهبس التمييز غير HBS-من هبس على التوالي

الرقم الكامل وأسطورة (184 K)

تحليل النظم الصيدلة شبكة NOWADA تشير المغنيسيوم 2 + وrapamycin مثل الأدوية الأكثر فعالية لاستهداف نموذج في سيليكون

يسمح التحليل السابق لنا التعرف العقد المركزية (الاختناقات) مع القيم العالية شبكة الطوبوغرافية. في هذه المرحلة، وشبكة NOWADA يمكن اعتباره نموذجا مسار مشترك لميلادي والتوحد، وهذه العقد 14 (الجينات / البروتينات) يمكن أن تمثل أهدافا محتملة لكل من أمراض في سيليكون. بهدف توضيح المخدرات أكثر ملائمة وفعالة تستهدف الشبكة في سياق التوحد، اتخذت القيم اختلف التعبير الجيني في الاعتبار. وكانت معايير الاختيار لدينا بعد ذلك على النحو التالي: (أ) لتحديد الأدوية التي تستهدف أكبر عدد من الجينات / البروتينات داخل الشبكة؛ (ثانيا) من هذه، لاختيار الأدوية المؤثرة / يرتبط إلى أرقام أعلى من الاختناقات (ويفضل، هبس مع قيم عالية من "التوتر" و "التقارب" centralities)؛ و (ج) لتحديد الأدوية التي الأهداف، ضمن شبكة (NOWADA)، وتشمل عدد أكبر من الجينات مع تغييرات كبيرة في التعبير. على مراجعة منهجية للأدب (انظر المواد وطرق الباب)، تم تقسيم 47 المستخدمة / الأدوية المقترحة لعلاج مرض التوحد في 15 مجموعة واختبارها للتفاعل محتمل / ثانية مع الجينات / البروتينات من نموذج الشبكة. وهذه المجموعات هي مثبطات أستيل، جهري تفارغي مستقبلات الغلوتامات metabotropic، مضادات الاكتئاب (SSRI وثلاثية الحلقات)، مضادات الصرع / مضادات الاختلاج، antiopioids، مضادات الذهان والأدوية التكميلية والبديلة، مثبطات mTOR س، هرمونات عصبية، NMDAR (منبهات والخصوم)، ومثبتات المزاج، psycoestimulants ، والأدوية داحض الودي. بالمناسبة، وقد تم بالفعل درس 36 من العقاقير ذات الصلة التوحد 47 في نماذج مختلفة من ميلادي (في البشر أو في الجسم الحي) للاستخدام العلاجي المحتمل 19، 20، 21، 22 (الجدول التكميلي S7). على استخدام غرزة 3.1، أكدنا أن 16 من أصل 47 المخدرات اختبار حقق نجاحات إيجابية مع جين واحد على الأقل / البروتين من شبكة NOWADA (مع "تجارب" و "قواعد البيانات" كخيارات المدخلات؛ درجة ثقة 0.600). كانت هذه العوامل العلاجية (بالترتيب الأبجدي) على النحو التالي: الكلوربرومازين، كلوزابين، D-سيكلوسيرين، فلوكستين، galantamine، هالوبيريدول، إيميبرامين، والليثيوم، لوتيولين، والمغنيسيوم 2 +، الميلاتونين، memantine، الأولانزابين، rapamycin، حمض فالبرويك، وziprasidone. وكانت العقد الأكثر استهدافا GSK3B (الجليكوجين سينسيز كيناز 3 β، 6 مشاهدات)، AKT1 (5 إصابات)، CALM1 (3 مشاهدات)، GRIN1 (3 مشاهدات)، GRIN2B (3 مشاهدات)، CHRNA7 (2 مشاهدات)، GRIN2A (2 مشاهدات )، ويونيو (2 مشاهدات) (الجدول التكميلي S9). باستثناء CHRNA7، يمكن مراجعة منهجية لدينا من الأدب تأكيد تعبير عن منتجات الجين المشار إليها في الخلايا العصبية و / أو الخلايا الدبقية (دبق نجمي الخلايا، الخلايا الدبقية الصغيرة، ودبق قليل التغصن؛ التكميلية الجدول S9)، وبالتالي تمثل أهداف كل من الخلايا العصبية والدبقية. عندما تبحث في خصائص مركبات اخضعت للاختبار / عقاقير الجينات / تفاعلات البروتين، والمغنيسيوم ويسلط الضوء 2 + وrapamycin مثل العقاقير الأكثر فعالية في سيليكون لاستهداف هذا الطريق تعطلت، الذي الممثلة هنا في سيليكون بواسطة شبكة NOWADA (الجدول التكميلي S10 ). وبشكل أكثر تحديدا، والمغنيسيوم 2 + يتفاعل مع 32 الجينات / البروتينات. من بين هؤلاء، ثمانية جينات وأعرب تفاضلي في المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد: وupregulated EIF2AK2 (تصحيح P -value = 0.002850857) وCAMK2D (تصحيح P -value = 0.034576294)، وكذلكdownregulated CDC42 (corrected P -value = 0.002000135), COX5A (corrected P -value = 0.003530677), NDUFV1 (corrected P -value = 0.011017543), NDUFS8 (corrected P -value = 0.014197263), RAC3 (corrected P -value = 0.014704894), وCALM2 (تصحيح P -value = 0.032263251) ( الشكل 5). من أجل إلقاء الضوء على العمليات البيولوجية التي المغنيسيوم 2 + يمكن التأثير في هذا السياق، تم إجراء تحليل والإثراء الوظيفي من الجينات التي تنتمي إلى + الشبكة الفرعية المغنيسيوم 2. أفضل 10 عمليات المتضررة هي كما يلي: الفسفرة والفوسفور عملية الأيض أو عملية التمثيل الغذائي المجمع التي تحتوي على الفوسفات وعملية العصبية والعضلية، وتنظيم عملية نظام العصبية، والبروتين والحامض الأميني autophosphorylation، صغيرة بوساطة GTPase نقل الإشارة والنقل الإلكترون الميتوكوندريا (NADH ل يوبيكوينون)، والتنظيم الإيجابي للمنظمة الإسقاط المحمولة، وداخل الخلايا مما يشير إلى سلسلة (تصحيح قيمة P-<0.05؛ التكميلية الجدول S11).
الرقم 5.

ملغ تحليل 2 + الشبكة الفرعية. (أ) في سيليكون نموذج شبكة من التفاعلات بين المغنيسيوم 2 + والجينات / البروتينات التي تنتمي إلى شبكة (NOWADA)، وضعت باستخدام غرزة 3.1 مع "تجارب" و "قواعد البيانات" كما خيارات الإدخال ودرجة ثقة 0.600. (ب) تطبيقات عرض التمثيل بين عقد الشبكة من قبل "الحفز" (الصفراء). (ج) تطبيقات عرض التمثيل بين عقد الشبكة التي كتبها 'ملزمة' (اللون الأبيض). (د) تطبيقات عرض التمثيل بين عقد الشبكة من قبل "تثبيط" (اللون الأحمر). يتم وضع علامة الجينات Upregulated وdownregulated في الشبكة الفرعية مع مثلثات حمراء وزرقاء، على التوالي، كما هو مبين في أقحم

الرقم الكامل وأسطورة (177 K)

أعلى الصفحة نقاش

نحن هنا درس الآلية العصبية الحيوية المحتملة التي ينطوي عليها معدلات مفرطة من فرط الدماغ في وقت مبكر لوحظ في التوحد 4 استنادا إلى الأدلة مؤخرا، مما يشير إلى دور محتمل لتجهيز APP المسار المرتبط AD في ASD. 23 انتشار في نتائج الدماغ من تحقيق التوازن بين معدلات التكاثر وموت الخلايا المبرمج التنموية (أي أكثر انتشار وأقل الموت سوف يؤدي إلى الدماغ أكبر). 24 يتم معالجتها APP proteolytically من قبل اثنين من الممرات المتنافسة مثل amyloidogenic (β -secretase بوساطة) وعدم amyloidogenic (α -secretase بوساطة) مسارات. 25 يتم إنشاء ساب β (يفرز APP β) وA أعصاب β الببتيد من APP وأفرج عنه لموقع خارج الخلية من قبل انشقاق بروتين كل من β - و-secretases γ. 26 وقد اقترح A β أن يكون لها دور حاسم في عصبية وأفكارك الأحداث ينظر في AD. 27 وفي المقابل، تتشكل المنتج غير amyloidogenic ساب α والببتيد P3 من قبل انشقاق بروتين لكل من α - و-secretases γ 26 ساب α يمارس تأثيرات التكاثري في الخلايا الاصلية العصبية معزولة من العقول الجنينية وقادرة على تعزيز synaptogenesis، ثمرة neurite، بقاء الخلية، والتصاق الخلية؛ 28، 29، 30، 31 وAPP يبدو أن تكون قادرة على تعديل السلائف هجرة الخلايا العصبية. 32 يشق -secretase وجاما عدة البروتينات التي تشمل APP والشق، 33 يعتبر أيضا الدور المحتمل للمسار NOTCH الإشارات في نشأة م. 34 أظهر تحليل ميكروأري المركزة المستخدمة في هذه الدراسة أن التعبير عن 40٪ من الجينات ذات الصلة م تم تغيير في المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد (تصحيح P -value <0.05)، وهذه التغييرات تمثل أساسا downregulation من dehydrogenases NADH والسيتوكروم ج oxidases ( الجدول 1). هذه النتائج تعكس السلسلة التنفسية الميتوكوندريا ناقصة التي تنسجم مع التقارير الأخيرة واصفا ضعف الميتوكوندريا في ASD. 35 أو تأكيد غير مباشر الترابط-الشق الميتوكوندريا ضيقة. 36 إن upregulation من GRIN1 (تصحيح P -value = 0.03916101)، الوحيدات تشكيل قناة NR1 من NMDA مستقبلات الغلوتامات وMAP3K1 (تصحيح P -value = 0.038406592)، المعروف أيضا باسم MEKK1 أو MAPK / ERK كيناز كيناز 1، الذي ينشط JNK ومسارات إرك مع تأثير مضاد للأفكارك، 37 كما عثر بين الجينات ذات الصلة AD في عينات ASD ( الجدول 1). في الجسم الحي وقد أظهرت الدراسات أن الأحداث المجهدة أثناء الحمل يمكن أن تزيد من التعبير عن مستقبلات NMDA في الدماغ. 38 قد تكون ذات صلة التعبير تغيير مستقبلات NMDA لتنظيم جينية (على سبيل المثال، hypomethylation DNA) لتشارك مثيلة هيستون يسين في المروجين الجين في تنظيم وصيانة أنماط التعبير منطقة محددة من ionotropic والغلوتامات metabotropic المستقبلات في الدماغ التنموي. 39 وعلاوة على ذلك، الغلوتامات مستقبلات التعبير و / أو نشاطهم يمكن أن تعدل آليات معالجة APP. 40 عالية الغلوتامات مستقبلات تفعيل ويترتب على ذلك زيادة في الكالسيوم داخل الخلايا تفعيل ERK يشير التعاقبي، وتعزيز الانقسام -secretase ألفا من APP، وبالتالي تقليل معالجة APP إلى A β. زيادة في النشاط -secretase ألفا قد يؤدي إلى زيادة الإنتاج من ساب α. 26 في هذه الدراسة، ونحن نفترض أن حررت glutamatergic متشابك نقل / اللدونة، والناجمة عن زيادة التعبير عن GRIN1 وبالتالي زيادة كثافة مستقبلات NMDA، ربما يؤثر على نمو الخلايا العصبية في مرض التوحد عن طريق تحويل تجهيز APP لإنتاج ساب α من خلال α بوساطة ERK النشاط -secretase. α SAPP، في المقابل، قد تسهل انتشار من خلال تفعيل PI3K / AKT / mTOR س المسار. 41، 42 واستنادا إلى البيانات الحالية والكتابات الموجودة، اقترحنا هذا النموذج ( الشكل 6) كآلية يمكن ان تفسر تعديل بؤري من الخلايا العصبية، والهجرة، والتعديلات من التهندس الخلوي من قشرة الدماغ، وهياكل تحت القشرية والمخيخ لوحظ في الأشخاص الذين يعانون من مرض التوحد. 43 وبناء على ذلك، فإن الانخفاض في التعبير من الإنزيمات الميتوكوندريا التي لوحظت في مجموعة لدينا ( الجدول 1) قد تمثل آلية تعويضية لاحتواء كا 2 + التي يسببها الزائد موت الخلايا المبرمج في هذه الخلايا. وقد سبق أن ذكرت أن الميتوكوندريا للخطر تتراكم (لاحظ زيادة في كتلة الميتوكوندريا) في الخلايا العصبية الهرمية في قشرة الزمنية الخاصة بالأشخاص الأصغر سنا ASD. 44 وعلاوة على ذلك، يعتقد PSEN1 وPSEN2 أن الوظائف الخلوية متداخلة تقريبا، والمساهمة في العمليات الفسيولوجية المختلفة، مثل تنظيم كا 2 + التوازن، نقل البروتين ودوران، الالتهام الذاتي، التصاق الخلية، وإطلاق سراح العصبي، والتوجيه محور عصبي. 45 PSEN2، ومع ذلك، يبدو أن المسؤولين عن الشبكة الإندوبلازمية (ER) والتفاعلات الميتوكوندريا. 46 توثيق تجاور ER-الميتوكوندريا (التي تنظمها PSEN2) قد يعرض الميتوكوندريا إلى الإفراط كا 2 + التحفيز مما ادى الى سلسلة أفكارك التي كتبها الميتوكوندريا كا 2 + الزائد. في تحليل مجموعة لدينا، وجدنا وdownregulated أن PSEN2 (تصحيح P -value = 0.005968353) في المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد ( الجدول 1)، والتي يمكن أن تمثل آلية تعويضية أخرى للحد من كا 2 + التي يسببها الزائد موت الخلايا المبرمج. ويدعم فرضيتنا مزيدا من الملاحظات التالية: (أ) فئرانا معدلة وراثيا التي يتم overstimulated مستقبلات الغلوتامات عن طريق ضرب (KO) نقل الغلوتامات GLAST وGLT1، وبالتالي يؤدي إلى الإفراط في إشارة glutamatergic في مرحلة ما قبل الولادة، مما يؤثر سلبا على نمو الدماغ في وقت مبكر عن طريق فرط NMDARs. NR1 الحذف في الفئران KO مزدوجة انقاذ تماما تقريبا عيوب الدماغ متعددة بما في ذلك القشرية، الحصين، وحاسة الشم لمبة الفوضى والمعيبة التوقعات محور عصبي القشرية المهادية ومهادية قشرية. 47 (ب) عكس ما ينظر إليها في المرضى ميلادي، وارتفاع مستويات α ساب تم وصفها في البلازما من الأطفال المصابين بالتوحد مقارنة مع الضوابط، لصالح زيادة مسار -secretase ألفا. 12، 48 (ج) وقد تم الإبلاغ عن أدلة على المناعة الذاتية وتنشيط جهاز المناعة النظامية المستمر في ASD، 49 والفئران overexpressing ساب الإنسان α الواقع يحمل أعلى إفراز السيتوكينات T-خلية جنبا إلى جنب مع انخفاض CD4 + CD8 + وأعلى السكان T-خلية في splenocytes بالمقارنة مع من النوع البري الحيوانات. أيضا عرض هذه الحيوانات نقص نشاطها، والتفاعل الاجتماعي وضعف، ومستويات مرتفعة من الدماغ ييفي الدبقية البروتين الحمضية (GFAP) التعبير، وغيرت Notch1 ومستويات انترلوكين 6. 50 في دماغ الأفراد المصابين بالتوحد، وزيادة التعبير عن GFAP في المناطق التي تم الكشف عن بنية الخلايا العصبية المضطربة مع انترلوكين 6، انترلوكين 8، نخر الورم α factor-، γ interferon-، وعامل تحفيز مستعمرة الكريات البيضاء بلعم ، مما يشير إلى استجابة astrogliotic والتعديلات المحتملة في تكوين الخلايا العصبية وهجرة الخلايا العصبية. 51، 52، 53، 54 (د) وأخيرا، لاحظنا انخفاضا كبيرا (تصحيح P -value = 0.024237411) في التعبير عن APBB1 (A β A4 السلائف بروتين ملزمة، والأسرة B، عضو 1؛ أو F65) ( الجدول 1). يستحث في المختبر F65 overexpression زيادة ملحوظة في إفراز β، في حين انخفضت A إفراز β في خلايا ضربة قاضية Fe65 وأيضا في الخلايا العصبية قرن آمون من الفئران Fe65 / Fe65L1 KO. 55، 56، 57
الرقم 6.

النموذج الافتراضي لآلية متشابك تنظيم وإنتاج β وصلة لنمو الدماغ الشاذة والربط في التوحد. تطوير الكائنات الحية يوازي ما يسمى الفسيولوجية "الإجهاد التنموية الذاتية"، الذي يرتبط إلى تغييرات داخلية واسعة النطاق خلال التشكل، وبالتالي تساهم في نافذة الوقت من التعرض للبيئة. التنمية وشدة ASD من المرجح أن تنشأ من التفاعلات المعقدة بين الضعف الوراثي موجود مسبقا / المنشأ في هؤلاء الأطفال، والتعرض للعوامل البيئية الضارة، وتوقيت الحدث المجهدة (ق)؛ بالنظر إلى أن حياة ما قبل الولادة والرضاعة والطفولة، والمراهقة هي الفترات الحرجة التي تتسم زيادة التعرض للضغوطات. 2، 3 تفعيل الدبقية وneuroinflammation يبدو أن تستمر خلال مرحلة البلوغ في التوحد، وفرط الدماغ في وقت مبكر من مرض التوحد قد يكون لذلك من خلال التنشيط من انتشار العصبية في محاكمة لتعويض فقدان الخلايا الناجم عن البيئة الإجهاد / الأملاح، مما اثار متهور / غير المنضبط الهجرة وسوء توزيع الخلايا العصبية بين مناطق الدماغ المختلفة. اقترح نموذجنا أن التنظيم جينية شاذة قد يؤدي إلى زيادة كثافة مستقبلات NMDA، وبالتالي إلى زيادة الكالسيوم + 2 الدخول وتحفيز تعتمد على ERK α النشاط -secretase. انخفاض في النشاط الإنزيمي الميتوكوندريا جنبا إلى جنب مع downregulation من PSEN2 في ER قد تمثل آلية تعويضية للحد من كا 2 + التي يسببها الزائد موت الخلايا المبرمج. PSEN2 downregulation قد يقلل من التفاعل بين ER والميتوكوندريا، والحد من الكالسيوم + 2 امتصاص. في المقابل، فإن كتلة الميتوكوندريا تزيد على الأرجح للحفاظ على مستويات ATP الخلوية. أن مستويات أعلى من α ساب تفعيل مسار PI3K / AKT / mTOR س مما أدى إلى انتشار والنمو الدماغ الشاذة، وتعطيل اللدونة متشابك وconnectome

الرقم الكامل وأسطورة (326 K)

كشفت أنظمة تحليلات الصيدلة شبكة NOWADA أن المغنيسيوم 2 + وrapamycin يمكن أن تستهدف كفاءة هذا المسار في سيليكون، بالمقارنة مع أدوية أخرى (الجدول التكميلي S10). RhoGAPs، وقد أظهرت جزيئات التنظيمية للRHO GTPases (على سبيل المثال، CDC42، RHOA، وRAC1)، والتي غيرت التعبير في التوحد، 3 استخدام المغنيسيوم 2 + بمثابة العامل المساعد للوصول إلى الكفاءة الحفزية وخصوصية في GTP المائي (الجدول التكميلي S11). 58 وعلاوة على ذلك، GSK3B، وهو HB في نموذج شبكتنا (الجدول التكميلي S6)، هو في كل مكان سيرين / ثريونين كيناز أن يحفز نقل γ -phosphate من ATP إلى الأكسجين الهيدروكسيل من سر والثريونين بقايا من بروتين كيناز محددة الركيزة هي المغنيسيوم 2 + كيناز معتمد على. 59 وقد تم ربط وظيفتها الشاذة لاضطرابات عصبية متنوعة مثل AD. 60 وصفت تركيزات أقل من المغنيسيوم 2 + في الأطفال الذين يعانون من التوحد. 61 وبالمثل، في المرضى ميلادي، والمغنيسيوم 2 + التركيزات في الدماغ ويبدو أن أقل بكثير بالمقارنة مع نفس العمر الأشخاص الطبيعيين. 62 في الآونة الأخيرة، واقترح أن ارتفاع الدماغ المغنيسيوم 2 + التركيز في الدماغ يمارس تأثيرات synaptoprotective كبيرة في لفي الجسم الحي نموذج AD، وبالتالي المغنيسيوم 2 +. قد يكون الإمكانات العلاجية لعلاج AD في البشر 17 في التوحد، والآثار الإيجابية السلوكية مجتمعة المغنيسيوم 2 + وقد وصفت والبيريدوكسين العلاج؛ 63 الجمع الذي كان اقترح أيضا أن يكون مفيدا في المرضى ASD التي تواجه المضبوطات. 64 وتناقش الاستخدام العلاجي للrapamycin (mTOR س المانع) في ASD في الوقت الحاضر. TSC1 وTSC2 هي المنظمين المنبع المثبطة لنشاط mTOR س، والدراسات التي أجريت في TSC2 + / - أظهرت الفئران أن العلاج مع rapamycin يمكن انقاذ اللدونة متشابك وانحسار مرحلة غير طبيعية في وقت متأخر من التقوية على المدى الطويل 20 هذه النتائج تشجع التجارب السريرية في المستقبل مع TOR مثبطات كما العلاج الدوائي من ASD.
ونحن نعتقد أن التحليلات الحسابية التي أجريت في هذه الدراسة وقدم ادلة قيمة إلى (ط) تطوير النموذج الذي قد يفسر فرط الدماغ الشاذة والربط العصبية ضعف لوحظت في هؤلاء الأطفال. و (ب) تشير إلى الحاجة إلى مزيد من الاستكشاف العلاجي من المغنيسيوم 2 + - والعلاجات القائمة على rapamycin في النماذج الحيوانية والتجارب السريرية مع المرضى الذين يعانون من التوحد.

أعلى الصفحة المواد والأساليب

تطوير الجين / نماذج شبكة البروتين

NOTCH، WNT، وقد وضعت م، ونماذج موت الخلايا المبرمج من خلال الشبكة الفرعية (ط) استخراج المعلومات التي تقدمها قاعدة بيانات PATHWAY KEGG (http://www.genome.jp/kegg/pathway.html؛ مسار NOTCH: map04330، WNT المسار: خريطة 04310؛ مسار AD: map05010، وموت الخلايا المبرمج المسار: map04210)؛ و (ثانيا) من خلال إنشاء التفاعلات بين الجينات / البروتينات مع أداة البحث الموارد قاعدة بيانات لاسترجاع التفاعل الجينات / البروتينات STRING النسخة 9.05 (http://string-db.org/)؛ مع "تجارب" و "قواعد البيانات" كما خيارات الإدخال ودرجة ثقة 0.600. STRING هو قاعدة بيانات عامة معروفة بمعلومات عن التفاعلات الوظيفية المباشرة وغير المباشرة البروتين البروتين. الجينات / البروتينات التي تنتمي إلى تحقيقها، WNT، تم تحديد AD، ونماذج الخلايا الشبكة الفرعية التي HUGO جين رمز 65 وفرقة ID البروتين (الجداول التكميلية S1-S4). مرة واحدة تم اختيارهم، والروابط بين عقدتين مختلفة (الجينات / البروتينات)، التي تقدمها قاعدة بيانات STRING، يتم حفظها في ملفات البيانات التي سيتم تجهيزها في واجهة ميدوسا 66 وتصور باعتبارها الشبكة الفرعية (NOTCH، WNT، AD، أو موت الخلايا المبرمج ). شيد الرسم البياني فين باستخدام متاحة بحرية نظام البرمجيات R (http://www.r-project.org) 67 من أجل رؤية الصف العلاقة الجزيئية (الجينات المشتركة / البروتينات) بين الشبكات الفرعية التي تم إنشاؤها. لفي سيليكون وضعت نموذج الشبكة دمج NOTCH، WNT، AD، والشبكات الفرعية موت الخلايا المبرمج (NOWADA) باستخدام مرة أخرى سلسلة إصدار 9.05 مع "تجارب" و "قواعد البيانات" كما خيارات الإدخال ودرجة ثقة 0.600 (0.400 يعتبر 'ثقة متوسطة ') وتآمر باستخدام Cytoscape، وهي منصة مفتوحة المصدر لتحليل معقد شبكة والتصور (http://www.cytoscape.org/). 68

جمع البيانات ومعالجتها، وتحديد الجينات التي أعرب عنها بنسب مختلفة، والإحصاءات، والجينات الشبكة التعبير التصور

تم الحصول عليها من وحدات DataSet قاعدة البيانات الجغرافية (؛ والبيانات ميكروأري (ملفات .cel البيانات الخام) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/). مجموعة البيانات (GSE38322)، ساهم في الأصل من قبل غينسبرغ وآخرون، 69 غير متاحة للجمهور. أنه يحتوي على البيانات من أنسجة المخ المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد والضابطة. وصفت المقايسات التجريبية بالكامل في المنشور الأصلي وتفاصيل تتضمن معايير اختيار المرضى (سواء إدراج ومعايير الاستبعاد) و ملفه الشخصي التشخيص. 69 لتوضيح التعبير التفاضلية من أعضاء ينتمون إلى تحقيقها، WNT، شبكات فرعية م، وموت الخلايا المبرمج، والتعبير تم تصفيته البيانات من تحقيقات مع <0.05 إشارة كشف P- القيم وتطبيع باستخدام حزمة ومي من R وقوية تطبيع الشريحة. لالتفاضلي تحليل التعبير الجيني والبيانات تطبيع عينات من دماغ المرضى مقابل حللت التحكم باستخدام حزمة limma من R 67 ومعدل اكتشاف كاذبة (FDR) التحكم عن تقييم الإحصائي للبيانات ميكروأري (تصحيح P -values ​​<اعتبرت 0.05 كبيرة ). تحديدا تصحيح P ترد -values ​​لكل الجينات وأعرب تفاضلي (الجدول 1). من أجل رؤية المشهد العام في التعبير الجيني في سيليكون، ورسم التعبير الجيني في عينات من التوحد مقابل التعبير وجدت في الاصحاء أن تصور مع البرنامج ViaComplex، أداة التي تم تطويرها والتحقق من صحتها في مختبرنا سابقا. 70 هذا برنامج يرسم التعبير الجيني عبر الشبكة ميدوسا (في نطاق اللون) بواسطة تداخل إدخال البيانات الوظيفية (البيانات ميكروأري التعبير) مع المعلومات التفاعل (NOTCH، WNT، شبكات فرعية م، وموت الخلايا المبرمج) وتوزيع إشارة ميكروأري وفقا لإحداثيات العقد وتفاعلاته في شبكة من المصالح.

توضيح من centralities شبكة للتنبؤ أهمية الجينات في هندسة الشبكات العامة

خصائص الشبكة الطوبوغرافية للجينات / حسبت البروتينات دمج شبكة (NOWADA) باستخدام Cytoscape. 68 قيم رقمية المقابلة لخصائص كل عقدة وتقدم بالإضافة إلى (الجدول التكميلي S5). وفقا لقيمها مركزية أنشئت عتبات معايير الاختيار من العقد الأكثر صلة النظر في التنمية المستدامة واحدة من المتوسط ​​لكل خصائص الشبكة الطوبوغرافية: 'الإجهاد': 48 919.44 (يعني = 15251.9)؛ "اتصال أو درجة ': 35.84815 (يعني = 19.59893)؛ 'betweenness': 0.022270086 (يعني = 0.005765439)؛ و "التقارب": 0.372488254 (يعني = 0.325097663). تم رسم القيم المركزية في الرسوم البيانية باستخدام OriginLab (http://www.originlab.com/index.aspx؟...ucts/OriginPro). العقد (الجينات / تعتبر البروتينات) مع اتصال عالية (فوق عتبة) وانخفاض مركزية betweenness (تحت عتبة) غير الاختناقات محور ويشار أولئك بقيمة فوق عتبات لكل من الربط وbetweenness مركزية باسم هبس . وبالمثل، غير هبس (NH-BS) والعقد مع اتصال منخفضة وعالية betweenness مركزية، وغير محور وعدم الاختناقات-هي العقد مع كل اتصال وbetweenness القيم مركزية تحت العتبات.   18

في سيليكون وتطوير مجمع (المخدرات) -gene / البروتين نموذج الشبكة

لبناء مجمع (المخدرات) -gene / نماذج شبكة البروتين، أجرينا أول مراجعة منهجية من المؤلفات ذات الصلة المرتبطة بالتوحد أو العلاج AD في قاعدة البيانات مجلات (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/ ). وقد تم الحصول على هذه المواد من خلال استخدام المصطلحين "التوحد" و "ASD" ودمجها مع الشروط التالية: "مرض الزهايمر '،' العلاج '،' علاجات '،' العلاج '، و/ أو" المخدرات "، على التوالي. وعلاوة على ذلك، معرف مركب، والصيغة، والوصف، وautism- المختارة والتقارير المتعلقة ميلادي (مع PMID) لهذه العقاقير (الجدول التكميلي S6 يتم توفيرها) بالإضافة إلى ذلك مع KEGG المخدرات (http://www.genome.jp/kegg/drug /)، وأداة البحث عن تفاعلات الكيميائية غرزة نسخة 3.1 (http://stitch.embl.de/)، وقاعدة معلومات PubMed كمصادر للمعلومات. ثانيا، قدمت هذه الأدوية لفي سيليكون والتحليل من خلال البحث في عدد من الجينات / البروتينات داخل شبكة NOWADA التي يستهدفها الأدوية المختارة. لتحقيق هذا الهدف، غرزة الإصدار 3.1 (http://stitch.embl.de/ تم استخدام) مع "تجارب" و "قواعد البيانات" كما خيارات الإدخال ودرجة ثقة 0.600 (0.400 يعتبر "ثقة متوسطة). قائمة مع معظم عقد الشبكة المستهدفة المخدرات (الجينات / يتم توفير البروتينات) أيضا (الجدول التكميلي S8). مرة أخرى، فإن الروابط بين عقدتين مختلفة (المخدرات الجينات / البروتينات)، التي تقدمها قاعدة بيانات غرزة، وحفظها في ملفات البيانات ليتم التعامل معها في واجهة ميدوسا وتصور باعتبارها الشبكة الفرعية. لفحص أهداف الخلوية المحتملة لمعظم العقد الشبكة المستهدفة المخدرات (NOWADA)، تم إجراء مراجعة منهجية أخرى في كل من المقالات والبحوث الأصلية والاستعراضات في قاعدة معلومات PubMed. وقد تم الحصول على هذه المواد باستخدام الجينات / البروتينات اسم أو رمز ودمجها مع الشروط التالية: 'العصبية'، 'العصبية'، 'دبق نجمي الخلايا'، 'نجمية'، 'الدبقية الصغيرة'، 'دبق قليل التغصن، و/ أو "دبقية قليلة التغصن '(الجدول التكميلي S9). والمراجع المختارة تأكيد تعبير عن منتجات الجين المشار إليها في خلايا المخ. لاحظ أن المراجع المختارة لا تغطي طرائق علاجية أو السن أو منطقة في الدماغ خصوصية.

تحليل والإثراء الوظيفي (العمليات الحيوية)

تم تحديد العمليات البيولوجية من المنتجات الجينات تنتمي إلى نموذج الشبكة الفرعية من التفاعلات باستخدام قاعدة بيانات لشرح، والتصور، واكتشاف متكامل DAVID v6.7 (http://david.abcc.ncifcrf.gov/)، وإعطاء رقم من أدوات الشرح وظيفية للباحثين عن فهم أفضل لمعنى البيولوجي وراء أي قائمة كبيرة من الجينات. فقط تلك العمليات البيولوجية مع تصحيح P- تم اختيار قيمة <0.05 (FDR). تحديدا تصحيح P يتم توفير -values ​​لكل عملية بيولوجية (الجدول التكميلي S9).
والمستخلص رسومية، تلخص المحتويات والأساليب المنهجية المستخدمة في الدراسة الحالية، كما تقدم (الشكل 7).
الرقم 7.

العمل المجرد تلخيص المناهج المختلفة المستخدمة في الدراسة الحالية. المعلومات من مسارات مختلفة (NOTCH، WNT، AD، وموت الخلايا المبرمج) وجمعت من مسار KEGG (http://www.genome.jp/kegg/pathway.html) لتطوير شبكات فرعية. تم تحليل التعبير التفاضلية من الجينات التي تنتمي إلى كل شبكة فرعية في المخيخ من المرضى الذين يعانون من التوحد باستخدام R. A فين أظهرت الجينات المشتركة / البروتينات بين مسارات NOTCH، WNT، AD، وموت الخلايا المبرمج. بعد ذلك، تم تطوير نموذج الشبكة لدمج هذه الشبكات الفرعية في واحدة جين واحد / البروتين نموذج الشبكة التفاعل (شبكة NOWADA) باستخدام STRING 9.05 والأدوات Cytoscape. وكشف المزيد من التوضيح من خصائص شبكة الطوبوغرافية عددا من الأهداف المحتملة الجزيئية أو نقاط "الضعيفة" للفي سيليكون نموذج والعوامل العلاجية المستخدمة في درست التوحد استهداف العقد المركزية للشبكة (غرزة 3.1). وأخيرا، الشبكة الفرعية التي تمثل التفاعل بين المغنيسيوم 2 + والجينات / شيد البروتينات من شبكة NOWADA تم إجراء تحليل والإثراء الوظيفي (DAVID v6.7) لإلقاء الضوء على العمليات البيولوجية التي يحتمل أن تتأثر بهذا المركب

الرقم الكامل وأسطورة (234 K)

أعلى الصفحة تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

أعلى الصفحة المراجع

• كازانوفا MF. وأمراض الأعصاب من مرض التوحد. الدماغ Pathol 2007؛ 17: 422-423. | المادة | مجلات |
• زيدان-Chuliá F، جورسوى UK، Könönen E، غوتفريد C. نظرة طب الأسنان في مريض مصاب بالتوحد من خلال الألم فموي وجهي. اكتا Odontol Scand 2011؛ ​​69: 193-200. | المادة | مجلات |
• زيدان-Chuliá F، Rybarczyk-فيلهو JL، Salmina AB، دي أوليفيرا BH، نودا M، موريرا JC. استكشاف طبيعة سياقاتها التوحد من خلال نظم الحاسوبية البيولوجيا: الكالسيوم ورو GTPase RAC1 تحت الأضواء. Neuromolecular ميد 2013؛ 15: 364-383. | المادة | مجلات |
• Courchesne E، كاربر R، Akshoomoff N. دليل على فرط الدماغ في السنة الأولى من العمر في التوحد. JAMA 2003؛ 290: 337-344. | المادة | مجلات | ISI |
• ميازاكي K، ناريتا N، R Sakuta، مياهارا T، ناروسي H، N Okado وآخرون. تركيزات مصل neurotrophin في التوحد والتخلف العقلي: دراسة تجريبية الدماغ ديف 2004؛ 26: 292-295. | المادة | مجلات | ISI |
• مطاحن JL، Hediger ML، مولوي CA، Chrousos GP، مانينغ-كورتني P، يو KF آخرون. مستويات مرتفعة من الهرمونات ذات الصلة بالنمو في التوحد واضطراب طيف التوحد. كلين Endocrinol (OXF) 2007؛ 67: 230-237. | المادة | مجلات |
• ريتشي S، Businaro R، F Ippoliti، لو فاسكو VR، Massoni F، E اونوفري وآخرون. تغيير مستويات خلوى وBDNF في اضطراب طيف التوحد. Neurotox الدقة 2013؛ 24: 491-501. | المادة | مجلات |
• زيدان-Chuliá F، Salmina AB، Malinovskaya NA، نودا M، Verkhratsky A، موريرا JC. وجهة نظر الدبقية من اضطرابات طيف التوحد. Neurosci Biobehav القس 2014؛ 38: 160-172. | المادة | مجلات |
• براك H، دي فوس RA، يانسن EN، Bratzke H، بصمات براك E. عصبية مرضية لمرض الزهايمر وأمراض باركنسون. بروغ الدماغ الدقة 1998؛ 117: 267-285. | مجلات |
• Selkoe DJ. . مرض الزهايمر: الجينات والبروتينات، والعلاج الفيزيولوجيا القس 2001؛ 81: 741-766. | مجلات | ISI | CAS |
• رودريغيز JJ، Verkhratsky A. تكوين الخلايا العصبية في مرض الزهايمر. J عنات 2011؛ ​​219: 78-89. | المادة | مجلات |
• الأشعة B، طويل JM، سوكول DK، اهيري DK. زيادة يفرز اميلويد السلائف بروتين α (ساب α) في التوحد الشديد: اقتراح ل، الطريق الابتنائية محددة والعلامات البيولوجية المفترضة. بلوس واحد 2011؛ ​​6: e20405. | المادة | مجلات |
• Courchesne E، E Redcay، مورغان JT، كينيدي DP. التوحد في البداية: تشوهات المجهرية والنمو الكامنة النمط الظاهري المعرفي والسلوكي لمرض التوحد. ديف Psychopathol 2005؛ 17: 577-597. | المادة | مجلات |
• Reeber SL، أوتيس TS، Sillitoe RV. . أدوار جديدة للالمخيخ في الصحة والمرض الجبهة SYST Neurosci 2013؛ 7: 83. | المادة | مجلات |
• روجرز TD، McKimm E، ديكسون PE، Goldowitz D، بلاها CD، ميتلمان G. هل التوحد مرض المخيخ؟ تكامل البحوث السريرية وما قبل السريرية. الجبهة SYST Neurosci 2013؛ 7: 15. | المادة | مجلات |
• تساى Z، تشاو B، K لى تشانغ L لى C، Quazi SH آخرون. الهدف من الثدييات rapamycin: هدف علاجي صحيحة من خلال مسار الالتهام الذاتي لمرض الزهايمر؟ J Neurosci الدقة 2012؛ 90: 1105-1118. | المادة | مجلات |
• لي W، يو J، ليو Y، X هوانغ، Abumaria N، وقال تشو Y آخرون. ارتفاع المغنيسيوم في المخ يمنع ويعكس العجز المعرفي وفقدان متشابك في نموذج الفأر مرض الزهايمر. J Neurosci 2013؛ 33: 8423-8441. | المادة | مجلات |
• . روسادو JO، أنريكي JP، Bonatto D. A تحليل النظم الصيدلة من العلاج الكيميائي الرئيسي الأنظمة المستخدمة في علاج السرطان في المعدة: توقع أهداف البروتين الجديدة المحتملة والمخدرات يستهدف داء السرطان المخدرات 2011؛ ​​11: 849-869. | المادة | مجلات |
• Kerbeshian J، برد L، كربونات الليثيوم فيشر دبليو في علاج اثنين من المرضى الذين يعانون من التوحد الطفولي وأعراض غير نمطية ثنائي القطب. J كلين Psychopharmacol 1987؛ 7: 401-405. | مجلات | CAS |
• Ehninger D، هان S، Shilyansky C، Y تشو لى W، Kwiatkowski DJ وآخرون. عكس عجز التعلم في TSC2 + / - نموذج الفأر من التصلب درني. نات ميد 2008؛ 14: 843-848. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• Spilman P، Podlutskaya N، هارت MJ، Debnath J، Gorostiza O، Bredesen D وآخرون. تثبيط mTOR س كتبها rapamycin يلغي العجز المعرفي ويقلل من مستويات اميلويد بيتا في نموذج الفأر من مرض الزهايمر. بلوس واحد 2010؛ 5: e9979. | المادة | مجلات | CAS |
• نونيز MA، VIEL TA، باك HS. جرعة دقيقة علاج الليثيوم استقرت الادراكي لدى المرضى الذين يعانون من مرض الزهايمر. داء الزهايمر الدقة 2013؛ 10: 104-107. | مجلات |
• اهيري DK، سوكول DK، إريكسون C، B راي، هو CY، مالوني B. التوحد في وقت مبكر اضطراب النمو العصبي: أدلة على وجود ساب α بوساطة مسار المنشطة. الخليوي الأمامي Neurosci 2013؛ 7: 94. | المادة | مجلات |
• راف MC، بارس BA، برن JF، كولز HS، Ishizaki Y، جاكوبسون MD. برمجة موت الخلايا والسيطرة على بقاء الخلية: الدروس المستفادة من الجهاز العصبي. العلوم 1993؛ 262: 695-700. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• تشانغ H، ما Q، تشانغ YW، وتجهيز شو H. متعلق ب التحلل البروتيني من الزهايمر بيتا -amyloid البروتين السلائف. J نوروتشيم 2012؛ 120 (ملحق 1): 9-21. | المادة | مجلات | CAS |
• Kojro E، Postina R. التحلل البروتيني للرقابة من RAGE وAbetaPP كما صلة محتملة بين نوع 2 داء السكري ومرض الزهايمر. J الزهايمر ديس 2009؛ 16: 865-878. | مجلات |
• يو W، Mechawar N، S Krantic، Quirion R. الأدلة على تورط الذي يحفز الخلايا بوساطة عامل كاسباس مستقلة موت الخلايا العصبية في مرض الزهايمر. آم J Pathol 2010؛ 176: 2209-2218. | المادة | مجلات |
• ماتسون MP. الإجراءات الخلوية من البروتين بيتا اميلويد السلائف ومشتقاته القابلة للذوبان وfibrillogenic. الفيزيولوجيا القس 1997؛ 77: 1081-1132. | مجلات | ISI | CAS |
• Ohsawa I، تاكامورا C، T موريموتو، إيشيغورو M، Kohsaka S. المنطقة أمينية النهائية لشكل يفرز بروتين اميلويد السلائف من يحفز تكاثر الخلايا الجذعية العصبية. اليورو J Neurosci 1999؛ 11: 1907-1913. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• Caillé I، Allinquant B، E دوبون، Bouillot C، انجر A، U مولر وآخرون. شكل قابل للذوبان من البروتين اميلويد السلائف ينظم انتشار الأسلاف في منطقة subventricular الكبار. التنمية 2004؛ 131: 2173-2181. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• Gakhar-Koppole N، P Hundeshagen، ماندل C، Weyer SW، Allinquant B، U مولر وآخرون. آخر يتطلب ذوبان البروتين اميلويد السلائف ألفا لتعزيز ثمرة neurite في الخلايا العصبية الجذعية العصبية المشتقة من الخلايا عن طريق تفعيل المسار MAPK. اليورو J Neurosci 2008؛ 28: 871-882. | المادة | مجلات | ISI |
• الشباب-بيرس TL، باي J، تشانغ R، تشنغ JB، LoTurco JJ، Selkoe DJ. وظيفة هامة للبروتين بيتا اميلويد السلائف في هجرة الخلايا العصبية التي كشفت عنها في الرحم تدخل الحمض النووي الريبي. J Neurosci 2007؛ 27: 14459-1469. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• بو JH، سون JH كيم JH، كلمات H، موك جونغ I. RAC1 يغير خصوصية الركيزة جاما-secretase بين بروتين اميلويد السلائف وNotch1. الكيميائية الحيوية BIOPHYS الدقة COMMUN 2008؛ 372: 913-917. | المادة | مجلات |
• وو HN، وبارك JS، جوون AR، أروموغام TV، جو DG. . مرض الزهايمر والشق الإشارات الكيميائية الحيوية BIOPHYS الدقة COMMUN 2009؛ 390: 1093-1097. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• جيفارا-كامبوس J، غونزاليس غيفارا L، بويغ-الكاراز C، اضطرابات طيف التوحد Cauli O. المرتبطة نقص في الانزيمات من السلسلة التنفسية الميتوكوندريا. متعب الدماغ ديس 2013؛ 28: 605-612. | المادة | مجلات |
• لي SF، سرينيفاسان B، Sephton CF، يجفف DR، وانغ B، ديوي CM آخرون. التنظيم غاما secretase التحلل البروتيني من مستقبلات الشق من قبل ببتيداز المتوسط ​​الميتوكوندريا. J بيول كيم 2011؛ ​​286: 27447-27453. | المادة | مجلات |
• Yujiri T، S Sather، Fanger GR، جونسون GL. دور MEKK1 في بقاء الخلية وتفعيل JNK وERK مسارات التي تحددها الجينات المستهدفة انقطاع. العلوم 1998؛ 282: 1911-1914. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• توسلي E، E Saboory، Teshfam M، Y رسمي، روشان-ميلاني S، Ilkhanizadeh B وآخرون. تأثير الإجهاد قبل الولادة على كثافة مستقبلات NMDA في دماغ الفئران. الباحث J ديف Neurosci 2013؛ 31: 790-795. | المادة | مجلات |
• ستادلر F، G كولب، Rubusch L، بيكر SP، جونز EG، Akbarian S. هيستون مثيلة في المروجين الجين يرتبط التنظيم التكويني ومنطقة محددة التعبير عن ionotropic ومستقبلات الغلوتامات metabotropic في الدماغ البشري. J نوروتشيم 2005؛ 94: 324 -336. | المادة | مجلات | CAS |
• شفا DK، Restivo JL، غوبيل WD، هولتزمان DM، Cirrito JR. معارضة تنظيم متشابك من amyloid- β التمثيل الغذائي عن طريق مستقبلات NMDA في الجسم الحي. J Neurosci 2011؛ ​​31: 11328-11337. | المادة | مجلات | CAS |
• تشنغ G، Z يو، وتشو D، ماتسون MP. فوسفتيدلينوستول-3-كيناز-AKT كيناز وP42 / P44 تحركات البروتينات mitogen تنشيط توسط الإجراءات عصبية وexcitoprotective من شكل يفرز بروتين اميلويد السلائف من. ااستعمال Exp Neurol 2002؛ 175: 407-414. | المادة | مجلات | CAS |
• . Demars MP، بارثولوميو A، Strakova Z، لازاروف O. القابلة للذوبان البروتين اميلويد السلائف: عامل انتشار رواية من الخلايا الاصلية البالغة من الأدمة والأصل أرومية متوسطة الخلايا الجذعية الدقة ذر 2011؛ ​​2: 36. | المادة | مجلات |
• Wegiel J، I Kuchna، نويكي K، Imaki H، J Wegiel، مارشي E آخرون. وأمراض الأعصاب التوحد: عيوب تكوين الخلايا العصبية وهجرة الخلايا العصبية، والتغيرات خلل التنسج. اكتا Neuropathol 2010؛ 119: 755-770. | المادة | مجلات | ISI |
• تانغ G، جوتيريز ريوس P، كو SH، اكمان HO، Rosoklija G، K طنجي وآخرون. شذوذ الميتوكوندريا في الفص الصدغي من الدماغ التوحد. Neurobiol ديس 2013؛ 54: 349-361. | المادة | مجلات |
• Zampese E، C Fasolato، Pozzan T، بيتسو P. Presinilin-2 تحوير-ER الميتوكوندريا التفاعلات: الطفرات FAD والآليات والنتائج المرضية. COMMUN Integr بيول 2011؛ ​​4: 357-360. | المادة | مجلات |
• Zampese E، C Fasolato، Kipanyula MJ، Bortolozzi M، Pozzan T، بيتسو P. Presenilin 2 ينظم الشبكة الإندوبلازمية (ER) التفاعلات -mitochondria وCA2 + عبر الحديث. بروك Natl أكاد العلوم الولايات المتحدة الأمريكية عام 2011؛ ​​108: 2777-2782. | المادة | مجلات |
• عايدة T، Y إيتو، تاكاهاشي YK، تاناكا K. فرط مستقبلات NMDA يعوق نمو المخ في وقت مبكر في الجسم الحي. بلوس واحد 2012؛ 7: e36853. | المادة | مجلات |
• سوكول DK، تشن D، فارلو MR، دان DW، مالوني B، زيمر JA وآخرون. مستويات عالية من مرض الزهايمر بروتين اميلويد بيتا السلائف (APP) في الأطفال الذين يعانون من التوحد السلوك بشدة والعدوان. J Neurol الطفل 2006؛ 21: 444-449. | مجلات |
• أشووود P، فان دي المياه J. هو مرض التوحد وأمراض المناعة الذاتية؟ Autoimmun القس 2004؛ 3: 557-562. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• بيلي AR، هوى H، كلمات M، أوبريغون DF، بورتيس S، بارجر S وآخرون. GFAP التعبير والعجز الاجتماعي في الفئران المعدلة وراثيا overexpressing الإنسان ساب α. الدبقية 2013؛ 61: 1556-1569. | المادة | مجلات |
• لورانس JA، فاطمي SH. وارتقى الدبقية ييفي البروتين الحمضية في الجبهي متفوقة، الجداري والقشور المخيخ من الموضوعات التوحد. المخيخ 2005؛ 4: 206-210. | المادة | مجلات | ISI |
• فارغاس DL، Nascimbene C، C كريشنان، زيمرمان AW، باردو كاليفورنيا. تفعيل دبقية وneuroinflammation في الدماغ من المرضى الذين يعانون من مرض التوحد. آن Neurol 2005؛ 57: 67-81. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• لي X، تشوهان A، الشيخ AM، باتيل S، تشوهان V لى XM آخرون. استجابة مرتفعة المناعة في الدماغ من المرضى الذين يعانون من التوحد. J Neuroimmunol 2009؛ 207: 111-116. | المادة | مجلات | ISI |
• وي H، H زو، الشيخ AM مالك M، Dobkin C، بنى WT آخرون. IL-6 هو زيادة في المخيخ من المخ التوحد ويغير التصاق الخلايا العصبية والهجرة وتشكيل متشابك. J Neuroinflammation 2011؛ ​​8: 52. | المادة | مجلات |
• سابو SL، لانير LM، Ikin AF، Khorkova O، Sahasrabudhe S، P غرينغارد وآخرون. تنظيم إفراز بروتين بيتا أميلويد التي كتبها FE65، وهو بروتين ملزمة السلائف بروتين اميلويد. J بيول كيم 1999؛ 274: 7952-7957. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• شيه Z، Y دونغ، مايدا U، W شيا، تانزي RE. RNA التدخل إسكات محول جزيئات ShcC وFe65 تؤثر بشكل مختلف اميلويد معالجة البروتين السلائف وتوليد Abeta. J بيول كيم 2007؛ 282: 4318-4325. | المادة | مجلات |
• سوه J، Lyckman A، وانغ L، إيكمان EA، Guénette SY. البروتينات FE65 تنظم NMDA مستقبلات التي يسببها تفعيل معالجة اميلويد البروتينات السلائف. J نوروتشيم 2011؛ ​​119: 377-388. | المادة | مجلات |
• تشانغ B، تشانغ Y، Z وانغ تشنغ Y. دور MG2 + العامل المساعد في تبادل جوانين النوكليوتيدات وردود الفعل التحلل GTP من البروتينات ملزم GTP الأسرة رو. J بيول كيم 2000؛ 275: 25299-25307. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• لو SY، وهوانغ ZM، وهوانغ WK، ليو XY، تشن YY، شي T وآخرون. كيف يمنع الكالسيوم والمغنيسيوم التي تعتمد على كيناز gsk3 β: دراسة المحاكاة الجزيئية. البروتينات 2013؛ 81: 740-753. | المادة | مجلات |
• انه P، شن Y. انقطاع بيتا catenin يشير يقلل من تكوين الخلايا العصبية في مرض الزهايمر. J Neurosci 2009؛ 29: 6545-6557. | المادة | مجلات | CAS |
• Strambi M، Longini M، J حايك، بيرني S، Macucci F، E Scalacci وآخرون. الملف الشخصي المغنيسيوم في التوحد. بيول تتبع إيليم الدقة 2006؛ 109: 97-104. | المادة | مجلات |
• Andrási E، البالية N، مولنار Z، Kösel S. الدماغ الألومنيوم والمغنيسيوم والفوسفور محتويات السيطرة ومرضى الزهايمر-المريضة. J الزهايمر ديس 2005؛ 7: 273-284. | مجلات |
• ولورد G، الموح JP، بارتيليمي C، J مارتينو، Garreau B، كلوي E. آثار البيريدوكسين والمغنيسيوم على الأعراض الأولية التوحد الملاحظات. J التوحد ديف Disord 1981؛ 11: 219-230. | المادة | مجلات |
• فري RE، روسينول D، كازانوفا MF، بنى GL، مارتن V، Edelson S وآخرون. مراجعة من العلاجات التقليدية والجديدة لالمضبوطات في التوحد اضطراب طيف: نتائج مراجعة وخبير لوحة منهجية. جبهة الصحة العامة 2013؛ 1: 31. | المادة | مجلات |
• وين HM، لوش MJ، Ducluzeau F، Khodiyar VK، Povey S. Genew: قاعدة بيانات التسميات الجينات البشرية والتحديثات 2004. الأحماض النووية بحوث 2004؛ 32: D255-D257. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• هوبر SD، بورك P. ميدوسا: أداة بسيطة لرسم التفاعل التحليل. المعلوماتية الحيوية 2005؛ 21: 4432-4433. | المادة | مجلات |
• شهم RC، كاري VJ، بيتس DM، Bolstad B، Dettling M، S Dudoit وآخرون. Bioconductor: تطوير البرمجيات مفتوحة لعلم الأحياء الحسابي والمعلوماتية الحيوية. الجينوم بيول 2004؛ 5: R80. | المادة | مجلات |
• سموت ME، أونو K، J Ruscheinski وانغ PL، Ideker T. Cytoscape 2.8: ميزات جديدة لتكامل البيانات والتصور الشبكة. المعلوماتية الحيوية 2011؛ ​​27: 431-432. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• غينسبرغ MR، روبين RA، فالكوني T، تينغ ه، Natowicz MR. النسخي الدماغ والجمعيات جينية المصابين بالتوحد. بلوس واحد 2012؛ 7: e44736. | المادة | مجلات |

ال

المادة الملاحة - النص الكامل

• الأوراق التي كتبها زيدان-Chuliá

طبيعة وظائف

• الباحثين من ذوي الخبرة في صناعة مستحضرات التجميل
  
  
  • STUDIUM LE
• المرحلة الكبرى لاعبين كبار: المحققين الرئيسيين CCID تجنيد
  
  
  • مركز الابتكار التعاوني للتشخيص والعلاج من الأمراض المعدية (CCID)

المزيد من فرص العمل العلوم
الرد على وظيفة

طبيعة أحداث

• ندوة مبادرة RAS
  
  
  • 15 ديسمبر 2015 - 16 ديسمبر 2015
  • 8560 محرك التقدم، فريدريك، MD 21701، الولايات المتحدة الأمريكية
• المؤتمر السنوي 6TH إصابات الدماغ الرضية
  
  
  • 11 مايو 2016 - 12 مايو 2016
  • واشنطن، DC، الولايات المتحدة الأمريكية

ا

• و

 

[رافت ابراهيم]

 

http://www.nature.com/tp/journal/v5/...p2014138a.html


شرت على الانترنت 3 فبراير 2015 البروتين اعصاب (ADNP) المعارض التي تعتمد على النشاط الجنسي ضرب الانقسام التي تؤثر على أمراض التوحد والزهايمر
فتح

A Malishkevich 1، 2، N عمرام 1، 2، G-هكوهين كليمان 1، I ماجن 1، E جلعادي 1 وأنا Gozes 1

1 إن ليلى وابراهام Gildor كرسي التحقيق من عوامل النمو. مختبر التون لNeuroendocrinology الجزيئية، قسم علم الوراثة الجزيئية البشرية والكيمياء الحيوية، ساكلر كلية الطب، كلية Sagol العلوم العصبية ومركز آدمز سوبر لدراسات الدماغ، جامعة تل أبيب، تل أبيب، إسرائيل
المراسلات: د I Gozes، قسم علم الوراثة البشرية الجزيئية والكيمياء الحيوية، ساكلر كلية الطب، جامعة تل أبيب، تل أبيب 69978، إسرائيل. البريد الإلكتروني: igozes@post.tau.ac.il
2 هؤلاء المؤلفين اثنين ساهمت بالتساوي على هذا العمل.
تلقى 6 أغسطس 2014. المنقحة 4 أكتوبر 2014؛ قبلت 17 نوفمبر 2014

أعلى الصفحة ملخص

البروتين اعصاب (ADNP) التي تعتمد على النشاط هو الأكثر شيوعا اضطراب طيف التوحد (ASD) الجين -associated والبروتين الوحيد انخفاض ملحوظ في المصل من مرض الزهايمر (AD) من المرضى. وADNP المرتبطة ASD يكون أكثر انتشارا عند الذكور وإعلان أكثر انتشارا في النساء؟ وكشفت النتائج خلافاتنا التعلم / الذاكرة المرتبط بالجنس في الفئران، مما يعكس التغييرات التعبير قرن آمون في ADNP وتسيطر ADNP-الجينات خطر AD / ASD. وقد تضاعف الحصين ADNP محتوى النص في الذكور مقابل إناث الفئران، مع الإناث تظهر التعبير يساوي ADNP haploinsufficient (ADNP + / -) ذكور و أي تخفيض المرتبط الوراثي كبير. تم تكرارها زيادة الذكور ADNP التعبير في عينات الحصين بعد الوفاة الإنسان. وقد تضاعف نسخة الحصين لئي E (الجين خطر رئيسي لAD) في الفئران الإناث مقارنة مع الذكور، وكذلك تضاعف في ADNP + / - إناث، المتناقضة انخفاض في ADNP + / - الذكور. سابقا، أدى overexpression من بدء ترجمة حقيقية النواة عامل 4E (eIF4E) إلى ASD تشبه النمط الظاهري في الفئران. هنا، حددنا مواقع ملزمة على ADNP لeIF4E وشارك في مناعي. وعلاوة على ذلك، تم زيادة الحصين التعبير eIF4E تحديدا في ADNP الشباب + / - ذكور الفئران. سلوكيا، ADNP + / - ذكور الفئران أظهرت أوجه القصور في التعرف على الأشياء والذاكرة الاجتماعية مقارنة مع ADNP + / + الفئران، في حين ADNP + / - ولم يدخر جزئيا الإناث. وأظهرت المتناقضة الذكور، والتي يفضل الرواية على الفئران مألوفة، ADNP + / + إناث أي تفضيل على الفئران جديدة وADNP + / - الإناث لا تفضل الفئران على الكائن. ADNP التعبير المتمركزة كمنظم رئيسي من ASD ومخاطر AD الجينات الرئيسية، يقدم مفهوم جديد للقرن آمون إزدواج الشكل الجنسي التنظيم الجيني وADNP + / - نموذج حيواني للطب النفسي متعدية.

أعلى الصفحة مقدمة

اضطراب طيف التوحد (ASD) يؤثر ~ 1.5٪ الأطفال مع انتشار لثلاثة أولاد / فتاة واحدة وبنسبة 50٪ وظيفة الفكرية ناقصة أو الحد الفاصل ~، في الولايات المتحدة. 1 والاعتلال المشترك عال من ASD مع الإعاقة الذهنية تشير الجينات والممرات المشتركة. 2، 3، 4 التركيز على إزدواج الشكل الجنسي والوظائف المعرفية والمتناقضة مع ASD، هناك انتشار أكبر لمرض الزهايمر (AD) عند النساء مقارنة مع الرجال، في حين قد يكون الرجال أكثر عرضة للالضعف الادراكي المعتدل، مرحلة وسيطة بين الشيخوخة العادية والخرف . 5
التي تعتمد على النشاط اعصاب البروتين (ADNP)، قدر مؤخرا أن دي نوفو تحور في 0،17٪ على الأقل من حالات ASD، 6، 7، 8 تم اكتشافه في مختبرنا ويدعى الحيوي لتكوين الدماغ. 9، 10، 11، 12، 13 أدى نقص جزئي في ADNP في hyperphosphorylation من البروتين تاو MT المصاحب (مما يؤدي إلى AD / الخرف الجبهي الصدغي مثل تاو علم الأمراض) توازيها العجز المعرفي. NAP (NAPVSIPQ)، مقتطف من ADNP، 12 تعزيز التفاعل تاو-MT 14، 15 وتثبيط، في جزء منه، تاو التجميع، 16، 17، 18 عكس القصور ADNP في الجسم الحي، 12 مع زيادة ADNP-MT نهاية التفاعل بروتين ملزمة من خلال المجال SIP المشتركة. 19 ارتبط تاو ترسب أيضا يعانون من مرض التوحد. 20 الفئران التي تعاني من نقص GSK3beta (كيناز تاو مفرط النشاط في ADNP + / - الفئران 12)، وأظهرت تحسين السلوك الاجتماعي مقابل السيطرة على الفئران، 21 مما يشير إلى أن overactivation من GSK3beta والناتجة تاو hyperphosphorylation يضعف السلوك الاجتماعي، كما رأينا في التوحد. في موازاة ذلك، تم استنفاد (MAP2) التعبير MT المرتبطة بالبروتين 2 في المرضى الذين يعانون من التوحد. 22 وفي هذا الصدد، أدى ADNP إسكات في استنزاف MAP2 23 والعلاج NAP زاد MAP2 التعبير. 24
أظهرنا مؤخرا أن ADNP + / - الفئران معارضها تخفيض beclin1 قرن آمون (عاملا رئيسيا في تنظيم الالتهام الذاتي، الذي تم تخفيض أيضا في الفصام الحصين بعد الوفاة مقارنة مع الضوابط). على مستوى البروتين، ADNP شارك immuoprecipitated-مع MT المرتبطة بالبروتين 1 ضوء سلسلة 3، منظم رئيسي آخر لعملية الالتهام الذاتي، الذي تم تعزيزه من خلال برنامج العمل الوطني، 25 حماية تدفق ذاتية البلعمة. 26 ارتبط الالتهام الذاتي المصابين بالتوحد، 27 على سبيل المثال، في الفئران haploinsufficient لambra1 (منظم الإيجابي للbeclin1)، والتي تبين السلوك مثل التوحد يقتصر على الجنس الأنثوي. 28 وبالإضافة إلى ذلك، وقد ثبت آليات التقارب أخرى مشتركة بين انفصام الشخصية ومرض التوحد، بما في ذلك الطفرات التي تؤثر على قوة متشابك والنشاط الهيكل الخلوي. 29
الأهم من ذلك، ورفع القيود ADNP التعبير، وترتبط البروتينات ذات الصلة في الفصام العقول بعد الوفاة. 30
تحديد الجين الكامل تحليل التعبير ميكروأري محتوى النص تغيير في ADNP + / - الفئران 12 مقارنة مع ADNP + / +، بما فيها نسخة الناقل المذاب، والمشاركة في داخل الخلايا مما يشير إلى شلال، وتحويل عامل النمو، والمشاركة في الأوعية الدموية وPax6، 11 المشاركة في هجرة الخلايا العصبية وaxogenesis، التي هي إما تحور أو تغيير في التعبير عنها في الأشخاص الذين يعانون من مرض التوحد. 11، 12، 20، 31، 32 وبالإضافة إلى ذلك، كان مرتبطا ADNP haploinsufficiency أيضا مع العجز في الذاكرة الاجتماعية. 12، 33
من وجهة نظر التشخيص نظر، وتقييم ADNP الخلايا الليمفاوية التعبير أظهرت زيادة التعبير في المرضى الذين يعانون من الفصام مقارنة مع الضوابط الملائمة، التي تم تخفيض مع تطور المرض فقط في المرضى الإناث. 25 ويتناقض هذا التعبير زيادة في الفصام التي انخفضت التعبير في الخلايا وحيدة النواة الدم المحيطي 34 من التصلب المتعدد المرضى، وعلى مستوى البروتين، والبروتينات في الدم الكاملة حددت ADNP كما البروتين الوحيد تناقص في مصل الدم من المرضى ميلادي مقارنة مع الضوابط. 35
نظرا للذكور / الاختلافات الإناث في ASD وAD، فمن المثير للاهتمام أن نلاحظ أن التعبير ADNP في النواة المقوسة من منطقة ما تحت المهاد القوارض، وهي منطقة الدماغ المرتبطة الشهية والسلوك الجنسي، وتقلبات عرضت خلال دورة وداقية، أقسام proestrous كونها معظم أقسام ADNP-مناعيا وداقية على الأقل، في حين أن الذكور المقوسة نواة ADNP مثل مناعية كان أقل بكثير من ذلك من ودقي الإناث. 36
هنا، سألنا إذا كان يتم التعبير عن ADNP تفاضلي في حصين من الذكور والإناث، وإذا كانت التغييرات في ADNP التعبير تنظيم ASD ومخاطر AD الجينات الرئيسية، مما أدى إلى الاختلافات الإدراكية والاجتماعية مصنفة حسب الجنس. فهم أفضل للADNP، الذي ينظم> 400 الجينات خلال تطوير 13 سيمهد الطريق لعلاجات مستهدفة بشكل أفضل.

أعلى الصفحة المواد والأساليب

الحيوانات

وقد تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان في جامعة تل أبيب ووزارة الصحة الإسرائيلية. ADNP الفئران متخالف على C57BL مختلطة و 129 / سيفرت الخلفية، نموذجا للإدراكيا، 12 تم إيواؤهم في 12 ساعة ضوء / 12 ساعة مرفق دورة الظلام مع حرية الوصول إلى طعام القوارض والمياه.
الإجراء لتوليد ADNP + / - وصفت الحيوانات سابقا. 11، 12 نظرا للمشاكل التزاوج الفطرية الشديدة، التزاوج مع مجلس النواب، وهو خط الماوس الأباعد، تم تنفيذ السماح لتربية مستمرة وآله ممتازة. تم إجراء التنميط الجيني عن طريق Transnetyx (ممفيس، TN، الولايات المتحدة الأمريكية). ADNP + / - وتتزاحم ADNP + قورنت / + الفئران. تعرض شاب يبلغ ستة أشهر أو إناث الفئران مرتين يوميا (5   ميكرولتر في الأنف) لإدارة الأنف، من حل مركبة، 37 التي شملت كل مل 7.5   ملغ من كلوريد الصوديوم، 1.7   ملغ من مونوهيدرات حامض الستريك، 3   ملغ من الصوديوم ثنائي الهيدرات فوسفات، و 0.2   ملغ من محلول كلوريد البنزالكونيوم (50٪).
تعرض الفئران لامتحانات السلوكية (ن = 16-18 لكل مجموعة من المجموعات الذكور، ن = 11 لكل مجموعة من المجموعات النسائية) على النحو المبين أدناه. مجموعة فرعية من هذه الفئران (ذكور فقط، ن = 5 لكل مجموعة) لقوا مصرعهم وتعرض RNA الحصين من الكمية في الوقت الحقيقي RT-PCR. وشملت مجموعة مستقلة من المجموعات مع RNA الحصين تحليلها من قبل الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR الفئران من العمر 6 أشهر السذاجة 5- ل(ن = 6-8 في المجموعة).

التعرف على وجوه

وكانت وADNP + / + الفئران 7 أشهر من العمر في ذلك الوقت من الاختبار - موضوع ADNP + /. ويشمل الاختبار يومين متتاليين من التعود (5   دقيقة يوميا) واليوم التجريبي الذي يتكون من ثلاث مراحل. في المرحلة 1 (التعود)، وجهاز حقل مفتوح (50 × 50   سم) الواردة كائنين متطابقة (البلاستيك أو المعدن، 4 × 5   سم 2) وتم وضع الماوس في جهاز ووجهه إلى الحائط وسمح لاستكشاف الكائنات بحرية (5   دقيقة). بعد 3   ساعة في قفص المنزل، وضعت الماوس مرة أخرى إلى الجهاز لمدة 3   دقيقة للمرحلة 2 (خيار الاحتفاظ قصيرة)، تم خلالها استبدال واحدة من الأشياء المألوفة مع كائن الرواية. ما يقرب من 24   ساعة بعد الانتهاء من المرحلة 2، وضعت الماوس في جهاز ل3   دقيقة للمرحلة 3 (خيار الاحتفاظ الطويل)، تم خلالها استبدال واحدة من الأشياء المألوفة مع كائن الرواية. ابقى الماوس في قفص وطنه بين المرحلتين 2 و 3. في الوقت الذي يقضيه استنشاق / لمس تم قياس كل كائن. وقد تم تحليل البيانات باستخدام صيغة قدرة التمييز: D2 = (ب-أ) / (أ + ب)، حيث "أ" المعين وقت الاستكشاف من وجوه مألوفة و'ب' المعين وقت الاستكشاف من وجوه الرواية. 38

مهمة النهج الاجتماعية

وكانت وADNP + / + الفئران 7-8 أشهر من العمر في ذلك الوقت من الاختبار - موضوع ADNP + /. الفئران تستخدم رواية (الهدف الفئران) إلى أن تستكشف من قبل الفئران الخاضعة كانوا من 129 / SVJ سلالة (في مستعمرة لدينا)، والمعروف عن طبيعتها سهلة الانقياد (7- 8 شهرا من العمر). وقد ذكرت سابقا المهمة نهج الاجتماعية. 39 تم تقسيم مربع من الزجاج إلى ثلاث غرف متجاورة، كل 20   سم (طول) × 40.5   سم (عرض) × 22   سم (ارتفاع)، مفصولة اثنين من الأبواب القابلة للإزالة. أكواب قلم رصاص أسلاك الفولاذ (10.16   سم (قطر)، 10.8   سم (ارتفاع))، www.kitchen-plus.com استخدمت، على حد سواء الاحتواء للفئران الهدف والجماد كما (أوزان الفئران منعت من قلب الكؤوس). وأجريت التجارب في منطقة مضاءة بشكل خافت خلال المرحلة الخفيفة من الفأرة. وقد تم قياس سطوع اليمين واليسار غرف مع ضوء متر (MRC المختبر، حولون، إسرائيل) والاحتفاظ بها في ~ 6 + 0.5 لوكس قبل أن بدأت التجارب، لتجنب التحيز. كانت مغطاة ثلاثة جوانب من مربع لمنع الفئران من استخدام الاشارات المكانية. تركت الجانب الطويل التي تواجه المجرب مفتوحة لمشاهدة المجرب.
وضعت الفئران المستهدفة (الذكور للذكور والإناث للإناث) داخل الكأس الأسلاك في إحدى الغرف الجانبية لثلاث جلسات 10-مين في اليوم قبل الاختبار لالتعود. في اليوم التالي، تم اختبار كل فأر يخضع في تجربة مع ثلاث مراحل، كل فترة طويلة 10 دقيقة (قياس مع جهاز توقيت بسيط): الأول والثاني، ومراحل التعود (ضمان عدم التحيز)، والثالثة، وهي مرحلة تجريبية، سجلت مع كاميرا الفيديو. لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية بين فترات الوقت الذي يقضيه في غرف مختلفة في مرحلة التعود.
في المرحلة الثالثة، وضعت سلك كوب فارغ (كائن رواية) في وسط اليمين أو اليسار غرفة ووضعت الكأس الذي يحتوي على الماوس الهدف في وسط الغرفة الأخرى. ويوازن موقع السلك كوب فارغ (وجوه الرواية) والفئران جديدة لتجنب تفضيل الجانب التباس. والأبواب ثم إزالتها وبدأ الموقت لمدة 10 مين. خلال هذه المرحلة، توقيت المجرب متى الماوس موضوع استكشاف السلك كوب فارغ والكأس سلك مع الماوس الرواية مع اثنين من الوقف الصامتة (أولا التعرض الماوس رواية). تم تنظيف الجهاز ثلاثة غرفة بين الفئران.
وقد استخدم المهمة نهج الاجتماعية كما التعود للقيام بهذه المهمة الذاكرة الاجتماعية، 3   ساعة بعد المرحلة الأولى (التعرض 3 دقيقة)، وضعت الماوس مرة أخرى إلى الجهاز لمدة 3 آخر   دقيقة (المرحلة الثانية)، وخلالها كوب واحد يحتوي على الماوس على دراية والآخر يحتوي على الماوس الرواية. ويوازن مواقف الماوس على دراية ورواية خلال المراحل 1 و 2 داخل وبين المجموعات لاستبعاد احتمال الآثار الموضعية، فيما أبقي على نفسه لحيوان معين. تم تحليل قدرة التمييز (ذاكرة الاجتماعية) باستخدام الصيغة: D2 = (ب-أ) / (ب + أ)، أما بالنسبة لاختبار التعرف على الأشياء.

رائحة التعود-إزالة التعود

تم إجراء هذا الاختبار كما هو موضح. 40

إجراءات البيوكيميائية ومناعى

ذكر ADNP + / - وADNP + / + تتزاحم (النوع البري) الفئران (5- 6 أشهر من العمر) ومقطوعة الرأس، تم تشريح الحصين، المجمدة في النيتروجين السائل والحفاظ مجمدة (-80   درجة مئوية) حتى مزيد من المعالجة. تم استخراج الحمض النووي الريبي والبروتينات باستخدام Macherey-ناجل NucleoSpin RNA / مجموعة البروتين (بيت لحم، PA، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحديد نقاء RNA والتركيز مع معمل (معمل NanoDrop تكنولوجيز، ويلمنجتون، DE، الولايات المتحدة الأمريكية). وقدرت كمية البروتين البروتين عدة BCA-200 (بيرس، روكفورد، IL، الولايات المتحدة الأمريكية). وقد أجريت تجربة RNA الكمي إضافية على كمية محدودة من النصوص في الفئران الأكبر سنا (ذكور الفئران عمره 9 أشهر). قبل استخراج الحمض النووي الريبي الحصين، عولجت الفئران عمره 9 أشهر (ن = 5 لكل مجموعة) مع سيارة (المحددة أعلاه)، وتعرضوا للاختبارات سلوكية على النحو المبين في أرقام 1 و 2.
الشكل 1.

ADNP + / - تختلف عن ADNP + / + الفئران الذكور: التعرف على الأشياء، والتفاعلات الاجتماعية والانقسام الجنسي. وأظهرت أداء الحيوان في اختبار التعرف على وجوه (ن = 16-18 لكل مجموعة من المجموعات الذكور، ن = 11 لكل مجموعة من المجموعات النسائية). (أ، ب) ADNP + / - ذكور الفئران تعاني من نقص في التعرف على الأشياء. وقد قدمت أول كائنين متطابقة، وحل محله أحد الكائنات مماثلة من قبل كائن الرواية 3   ساعة بعد استنشاق شيء مألوف (خيار الاحتفاظ قصيرة) (أ) أو في اليوم التالي (24 ~   ح في وقت لاحق، واختيار الاحتفاظ الطويل) (ب). يتم التعبير عن البيانات كما يعني (± SEM) من قبل مؤشر التمييز النسبي (D2 = (ب-أ) / (ب + أ)، (ب) = المرات استنشاق جسم الرواية، و= المرات استنشاق جسم مألوف ). وكشف تحليل اتجاهين التباين (ANOVA) عدم وجود فروق كبيرة في اختيار الاحتفاظ قصيرة (أ). في اختيار الاحتفاظ طويلة (ب)، وأظهرت في اتجاهين ANOVA تأثير كبير في التركيب الوراثي فقط في مجموعة الذكور (F (1،49) = 5.022، P = 0.030). ذكور الفئران التي تعاني من نقص ADNP قضى وقتا أقل بكثير (> 2-أضعاف) في استكشاف وجوه جديدة بالمقارنة مع السيطرة على الفئران (ADNP + / +). كشفت آخر LSD اختبار خاص فيشر فرق كبير بين ADNP + / - الفئران الذكور مقارنة مع ADNP + / + الفئران (* P <0.05). (ج) وقت الشم من كوب فارغ ورواية اختبار الاعتراف الماوس الاجتماعي. يتم التعبير عن البيانات كما يعني (± SEM) الوقت الإجمالي (ق) قضى استكشاف الفئران أو الكائنات. واستخدم قفص ثلاثة غرفة. اتجاهين التدبير المتكررة ANOVA مع مجموعة كعامل الثابتة ومشموم البند (أي الفأرة مقابل كوب) كما كشفت عامل تكرار أي تأثير الرئيسي لمجموعة (F (3،48) = 1.051، P = 0.379) على الوقت شم فترات ماوس رواية والكأس. ومع ذلك، تم العثور على التأثير الرئيسي لهذا البند مشموم (F (1،48) = 75.761، P <0.001)، مما يدل على تفضيل قوي للماوس رواية على الكأس. بالإضافة إلى ذلك، مشموم تأثير التفاعل بين مجموعة × تم العثور على بند (F (3،48) = 3.296، P = 0.028). وكشف اختبار آخر LSD خاصة فيشر فروق ذات دلالة إحصائية بين استنشاق الفترة الزمنية من الكأس والماوس في جميع الفئات (* P <0.05، * * * P <0.001 مقابل كوب في نفس المجموعة، ذكرا كان أو أنثى). كشفت Bonferroni آخر اختبار خاص فروق ذات دلالة إحصائية بين استنشاق الفترة الزمنية من الكأس والماوس في جميع الفئات (* * P <0.01) باستثناء ADNP + / - الإناث (P = 0.18). كانت المرة استنشاق الماوس في المجموعة الأخيرة أقل بكثير مما كانت عليه في ADNP + / - الذكور (# P <0.05)، مع عدم وجود تغيير في الوقت استنشاق الكأس (P> 0.99 بعد التعديل للمقارنات متعددة). (د) ADNP + / - الفئران عرض انخفاضا كبيرا في الذاكرة الاجتماعية. وأظهرت أداء الحيوان في اختبار الذاكرة الاجتماعية (3   ساعة بعد التعرض الأصلي 3 دقيقة). يتم التعبير عن البيانات كما يعني (± SEM) الوقت الإجمالي (ق) قضى استكشاف الماوس أخرى وفقا لما تقرره مؤشر نسبي التمييز (ب = الوقت استنشاق ماوس رواية، و= الوقت استنشاق ماوس مألوفة. إجمالي الوقت المسموح به للاستنشاق في كان التعرض الثاني 3   دقيقة). في اختبار الذاكرة الاجتماعية، أنفقت من الذكور والإناث الفئران التي تعاني من نقص كبير ADNP وقت أقل استكشاف الماوس رواية بالمقارنة مع السيطرة على الفئران (ADNP + / +). أظهر ANOVA اتجاهين تأثير كبير الوراثي (F (1،47) = 31.357، P <0.001) في اختبار الذاكرة الاجتماعية (ADNP + / + مقابل ADNP + / - الفئران)، لكن ليس له تأثير الجنس العامة (الذكور مقابل الإناث )، (F (1،47) = 1.563، P = 0.217). وكشف اختبار آخر LSD خاصة فيشر فرق كبير بين النمط الجيني ADNP + / + وADNP + / - في المجموعة الذكور (* * * P <0.001)، وكذلك في مجموعة الإناث (* P <0.05)؛ كان هناك أيضا تأثير الجنس كبير في ADNP + / + مجموعة (* P = 0.05 الذكور مقابل الإناث). ADNP، التي تعتمد على النشاط اعصاب البروتين. LSD، الفارق الأقل أهمية.

الرقم الكامل وأسطورة (117 K)

الرقم 2.

رائحة التعود / إزالة التعود سليمة في ADNP + / - ICR نموذج اظهار الانقسام الجنسي. تم اختبار كل فأر خلال ثلاث فترات 2-مين متتالية لكل رائحة مع فترات 2-دقيقة بين العروض التقديمية. وسجلت الوقت الذي الماوس رائحة مسحة (البداية عندما الحيوان موجهة الخياشيم تجاه مسحة القطن المعطرة رائحة، في غضون 2   سم أو أقل). ذكر ADNP + / + الفئران أداء أفضل في اختبار رائحة التعود / إزالة التعود مقارنة مع الإناث ADNP + / + الفئران. * * * P <0.001، * P <0.05 مقابل الإناث في نفس المحاكمة، تي -test # # P < 0.01 مقابل استنشاق السابق (رواية مقابل رائحة مألوفة). ADNP، التي تعتمد على النشاط اعصاب البروتين.

الرقم الكامل وأسطورة (127 K)

مناعي

البروتينات (400-500   ميكروغرام) والمستخرج من الحصين ومخففة في تحلل العازلة لمزيد من مناعي باستخدام بروتوكول COIP مجموعة (بيرس). تم تحميل عشرين ميكرولتر من الخرز A / G PLUS-الاغاروز إلى عمود غسلها مع العازلة اقتران في 90   ز ل1   دقيقة. أضيفت عشرة ميكروغرام من أرنب الماوس ADNP الأجسام المضادة (مختبرات Bethyl، مونتغمري، TX، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى الخرز وحضنت ل1   ساعة عند 24   ° C. عبر ربط باستخدام 2.5   وقد أجريت م M disuccinimidyl suberate عن طريق زيادة 1   ح الحضانة. ثم طهرت 500   أضيفت ميكروغرام من المحللة المخ إلى العمود وحضنت (16   ح، 4   درجة مئوية). للكشف عن مستضد مزال، تم فصل البروتينات عن طريق الكهربائي على 15٪ هلام الأكريلاميد تحتوي على 0.1٪ SDS، 10 تحويلها إلى مرشح النيتروسليلوز (ميليبور، بيدفورد، MA، الولايات المتحدة الأمريكية) وimmunostained مع الأرنب بولكلونل الأجسام المضادة ضد الماوس eIF4E (1: 500)، (هدية عينية من أستاذ أورنا إلروي-شتاين، جامعة تل أبيب). 41 تم تصور البروتينات باستخدام الكواشف تعزيز التوهج والتعرض لhyperfilm (كوداك، بتاح تكفا، إسرائيل). وتم قياس كمية البروتين العصابات على hyperfilm باستخدام تحليل photochromatography.

الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR

كميات متساوية من الحمض النووي الريبي مجموع (1   تعرض ميكروغرام RNA / عينة، تم الحصول عليها من الفئران عمره 6 أشهر) لعكس النسخ (RT) باستخدام أدوات qScript كدنا] التجميعي (كوانتا العلوم البيولوجية، غايثرسبيرغ، MD، الولايات المتحدة الأمريكية). في الوقت الحقيقي أجريت PCR باستخدام بالطاقة SYBR الخضراء PCR مزيج الرئيسي (كابا تكنولوجيز، برن، MA، الولايات المتحدة الأمريكية) وABI PRISM 7900 تسلسل نظام الكشف عن الصك والبرمجيات (النظم البيولوجية التطبيقية، فوستر سيتي، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحديد مستويات التعبير RNA باستخدام بادئات الماوس محددة: الشعور eIF4E 5'-TCTGGCTAGAGACACTGCTG-3 '، ومكافحة الشعور 5'-AGTCCATATTGCTATCTTATCACC-3، الاشعال APOE بمعنى 5'-ACCGCTTCTGGGATTACCT-3'، ومكافحة الشعور 5'-ATCAGTGCCGTCAGTTCTT- 3 "، ADNP الشعور 5'-ACGAAAAATCAGGACTATCGG-3 '، ومكافحة الشعور 5'-GGACATTCCGGAAATGACTTT-3"، ADNP2 الشعور 5'-GGAAAGAAGCGAGATACCG-3'، ومكافحة الشعور 5'-TCCTGGTCAGCCTCATCTTC-3 ". Neuroligin تم تصميم (1-4) الاشعال واستخدامها كما هو موضح من قبل. 42 وقد تم اختيار فسفوريبوزيل هيبوزانتين-جوانين باسم الجينات المرجعية مع الاشعال المناسبة للماوس الشعور 5'-GGATTTGAATCACGTTTGTGTC-3 '، ومكافحة الشعور 5'-AACTTGCGCTCATCTTAGGC-3 ". يتم عرض النتائج على هيئة2 - ΔCT ( http://de-de.invitrogen.com/etc/medialib/en/filelibrary/Nucleic-Acid-Amplification-Expression-Profiling/PDFs.Par.83765.File.dat/relative-quant-ct.pdf ). 43

المعلوماتية الحيوية

وقد استخدم ADNP تحليل تسلسل للتعرف على إجماع KclYcnyLp وcekYkpgVLL -elF4E المواقع كما في الكتابات المنشورة ملزمة. 44

التحليل الاحصائي

(وهذا هو، كوب مقابل ماوس رواية) كعامل المتكررة، وكان يستخدم في اتجاهين تحليل التدابير المتكررة التباين، تليها اختبار الفرق الأقل أهمية فيشر، مع مجموعة كعامل ثابت (المجموعة) ومشموم البند لتحليل البيانات في مهمة التعرف الاجتماعية. في جميع القياسات أخرى، تم استخدام تحليل التباين الثنائي تليها أقل فرق كبير فيشر. تحليل التباين الأحادي أو تي الطالب -test كانت تستخدم عند الحاجة. أجريت جميع التحاليل مع برنامج SigmaPlot (شيكاغو، IL، الولايات المتحدة الأمريكية) لنظام التشغيل Windows.

أعلى الصفحة النتائج

ADNP التعبير التضمين السلوك بطريقة جنسية التي تعتمد على: ADNP + / - الذكور، ولكن لا تعرض الفئران الإناث العجز في التعرف على الأشياء

لم ADNP الفئران haploinsufficient لا تختلف في سلوكها حقل مفتوح 38 (لا تظهر البيانات). في المقابل، في حين لم يكن هناك اختلاف في اختيار الاحتفاظ قصيرة الأجل (3   ح، الشكل 1A)، في اختيار الاحتفاظ على المدى الطويل، قضى ADNP + / + الفئران الذكور أكبر من الضعف الوقت مع موضوع الرواية، مقارنة مع ADNP + / - تتزاحم الذكور. وهكذا، لوحظ وجود عجز محتمل في الذاكرة أو تكرار السلوك نوعا ما، وتفضيل حالة مألوفة مع نقص ADNP ( الشكل 1B). وعلى النقيض من الذكور، لم يكن هناك اختلاف التركيب الوراثي في ​​الإناث يمثلون فرق كبير الجنس ( الشكل 1B).

ADNP + / - الفئران تبدي الفروق بين الجنسين في الاعتراف الاجتماعي

عند المقارنة بين تفضيل كائن جماد إلى ماوس (ذكور، في حالة الذكور، والإناث، في حالة من الإناث)، وكلها ذكور الحيوانات على كوب فارغ (فضل الشكل 1C)، واظهار يعد استنشاق فترات مع الحيوان. تم اكتشاف اختلاف كبير الجنس، مع ADNP + / - الإناث، والتي تبين سوى الاتجاه من كونها أكثر اهتماما في الحيوان على كوب فارغ (المتناقضة ADNP + / + إناث) وكونها أقل اهتماما اجتماعيا (2 أضعاف أقل وقت التفاعل مع الماوس امرأة أخرى مقارنة مع الذكور). مقارنة الذكور مع الإناث، يمكن أن يكون أن ADNP + / - ذكور تعاني من نقص في التعلم على التعرف على الحيوانات الأخرى، وبالتالي لا تزال مستمرة زيادة الوقت تفاعلها، في حين أن الإناث قد يتعرف بسرعة، وبالتالي يحمل سلوك أقل اهتماما.

ADNP + / - عرض ذكور الفئران تفضيل كبير للماوس على دراية وليس رواية واحدة (انخفاض الذاكرة الاجتماعية)

في اختبار الذاكرة الاجتماعي، كان هناك اختلاف الجنس كبير في السيطرة على الفئران، مع الذكور يفضلون الماوس الرواية والإناث تظهر أي تفضيل ( 1D الشكل). لم يكن لوحظ هذا في ADNP + / - الفئران، وهذا هو، ADNP + / - ذكور الفئران تتصرف مثل ADNP + / - الإناث ولكن على عكس ADNP + / + الذكور. وهكذا، كما رأينا في اختبار التعرف على الأشياء، ADNP + / - أظهرت الفئران الذكور أفضلية هامة للغاية إلى ما هو مألوف خلال الماوس الرواية، والعكس إلى ADNP + / + الفئران. وبالمثل، ADNP + / - يفضل إناث الفئران أيضا الأنثى مألوفة. في التجارب السابقة، ADNP الفطرية + / - الفئران الذكور (وليس تزاوج مع الفئران ICR 12، 33) أظهرت أيضا العجز في الذاكرة الاجتماعية. ومع ذلك، لا يمكن تكرار هذه التجارب في نفس الطريق (ساحة مفتوحة)، كخلفية ICR المستخدمة هنا أسفرت الفئران عدوانية جدا، والإمكانية الوحيدة لأداء الاختبارات كانت الماوس التفاعل مع الفئران موضوعة في حجرة معزولة.

ADNP + / - أظهرت الفئران رائحة سليمة التعود-إزالة التعود

رائحة التعود-إزالة التعود قياس معلمتين بما في ذلك (1) وظيفة حاسة الشم سليمة و(2) الذاكرة الشمية. هنا، مقارنات الجنس يكشف فروق ذات دلالة إحصائية بين الذكور والإناث في المجموعات ADNP سليمة وناقصة، مع الذكور فقط تظهر سليمة رائحة التعود-إزالة التعود والهوية كاملة بين ADNP الذكور + / - وADNP - / - الجماعات، وهذا هو، لا الوراثي الاختلافات ( الشكل 2). وبالتالي، يمكن أن يعزى الفروق الملحوظة أعلاه للاضطراب العاطفي المعرفي / فصل من الذاكرة الشمية.

آلية المرتبطة بالتوحد: ترجمة حقيقية النواة عامل بدء 4E (eIF4E)

وتناول نشر مؤخرا آليات مركزية من أي إس دي إس وأظهرت أن overexpression من بدء ترجمة حقيقية النواة عامل 4E (eIF4E) أدى إلى ASD تشبه النمط الظاهري. 42
حددت المعلوماتية الحيوية اثنين eIF4E المفترضة تسلسل عزر ملزمة للADNP تسلسل البروتين KclYcnyLp وcekYkpgVLL -elF4E مواقع الربط 44 ( الشكل 3A). هذه المتتاليات توريط ADNP كمنظم المحتمل للترجمة البروتين في السيتوبلازم العصبية والدبقية 23، 44 من خلال التفاعل elF4E. تحليل elF4E التعبير النشاف الغربي ( الشكل 3B) كشفت زيادة البروتين التعبير في حصين ADNP + / - الفئران الذكور مقارنة مع ADNP + / + الفئران الذكور ( الشكل 3B، الممرات 1 مقارنة مع 2 و 5 مقارنة مع 7، تجربتين مستقلة). أظهر المشارك مناعي مع الأجسام المضادة ADNP تليها تحليل الغربية مع eIF4E الأجسام المضادة هطول elF4E معين إلا في وجود أجسام مضادة ADNP (الممرات 3،4،6 و 8)، مع زيادة هطول الأمطار في ADNP + / - الفئران كما هو متوقع من العموم استخراج النتائج. وقد تأكدت هذه النتائج على مستوى الحمض النووي الريبي الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR. وزادت كميات الحصين elF4E مرنا (أعربت نسبة إلى كمية من هيبوزانتين جوانين فسفوريبوزيل) بشكل ملحوظ بنسبة 25٪ في ADNP + / - الفئران مقارنة مع ADNP + / + الفئران ( الشكل 4A).
الرقم 3.

تحديد والتحقق من مواقع التفاعل ADNP وeIF4E. (أ) رسم تخطيطي لبروتين eIF4e توقع زخارف ملزمة للADNP البشري. 10، 44 (ب) ADNP والتفاعل eIF4E. واستخدمت المقايسات المشترك مناعي لتحليل ADNP وeIF4E ملزمة. الممرات 1،5: 20   ميكروغرام من المحللة الدماغ من ADNP + / + ذكور الفئران والممرات 2،7: 20   ميكروغرام من المحللة الدماغ من ADNP + / - ذكور الفئران immunoblotted مع الأجسام المضادة لمكافحة eIF4E. حارة 3: 500   ميكروغرام من المحللة دماغ ADNP + / + ذكور الفئران وحارة 4: 500   ميكروغرام من المحللة دماغ ADNP + / - تم immunoprecipitated ذكور الفئران مع مكافحة ADNP الأجسام المضادة وimmunoblotted مع الأجسام المضادة لمكافحة eIF4E. حارة 6: 500   ميكروغرام من المحللة دماغ ADNP + / + وحارة 8: 500   ميكروغرام من المحللة دماغ ADNP + / - تم immunoprecipitated الفئران دون الأجسام المضادة وimmunoblotted مع الأجسام المضادة لمكافحة eIF4E. ADNP، التي تعتمد على النشاط اعصاب البروتين.

الرقم الكامل وأسطورة (173 K)

الرقم 4.

التوحد محددة تعديل الجينات في حصين ADNP + / - الفئران: الانقسام الجنسي. تم تحليل الحمض النووي الريبي الحصين من الفئران البالغ من العمر 6 اشهر 5- عليها الكمي في الوقت الحقيقي PCR (ن = 6-8 الفئران في كل مجموعة). (أ) eIF4E: أظهر تحليل اتجاهين التباين (ANOVA) ليس له تأثير كبير الجنس (P = 0.692) وراثى (P = 0.137). لكن، وكما كان هناك اتجاه الوراثي هامشية، وكان أداؤها في اتجاه واحد ANOVA أيضا تظهر زيادة كبيرة في محاضر eIF4E في ADNP + / - الفئران الذكور مقارنة مع ADNP + / + الفئران الذكور (# P <0.05). (ب) ADNP: أظهرت اتجاهين ANOVA تأثير كبير من الجنس (F (1،15) = 8.760، P = 0.010) ولها تأثير كبير في التركيب الوراثي (F (1،15) = 14.660، P = 0.002). كشفت آخر LSD اختبار خاص فيشر كبير إلى انخفاض 2 أضعاف في ADNP + / - ذكور الفئران مقارنة مع السيطرة على الفئران (* * * P <0.001). بالإضافة إلى ذلك، كشفت آخر LSD اختبار خاص فيشر زيادة بنسبة 2 أضعاف كبيرة في ADNP + / + ذكور الفئران مقارنة مع ADNP + / + إناث الفئران (* P <0.05). (ج) ADNP الإنسان: ADNP الإنسان الحصين تستخدم قبل 30 تم تحليل مقارنة الذكور والإناث. كما لم يكن هناك اختلاف في مستويات النص ADNP بين المواضيع العادية والفصام، وكان يتم تجميع الأفواج للحصول على 22 رجلا وست نساء. وأظهرت النتائج زيادة ذات دلالة إحصائية عند الرجال (الطالب ر -test، * P <0.05). (د) ADNP2: اتجاهين أظهرت ANOVA ليس له تأثير كبير الجنس (P = 0.977) وليس له تأثير كبير في التركيب الوراثي (P = 0.498). (ه) APOE: في اتجاهين أظهر ANOVA تأثير كبير من الجنس (F (1،23) = 128،734، P <0.001) ولها تأثير كبير في التركيب الوراثي (F (1،23) = 13.430، P = 0.001). كشفت آخر LSD اختبار خاص فيشر زيادة بنسبة 2 أضعاف كبيرة في ADNP + / - إناث الفئران مقارنة مع ADNP + / + إناث الفئران (* * * P <0.001). بالإضافة إلى ذلك، كشف اختبار آخر LSD خاصة فيشر انخفاضا كبيرا للغاية في ذكور الفئران مقارنة مع إناث الفئران على حد سواء ADNP + / + وADNP + / - (* * * P <0.001). في اتجاه واحد وأظهر ANOVA انخفاض ملحوظ في ADNP + / - الفئران الذكور مقارنة مع ADNP + / + الفئران (# P <0.05). (و) ذكور الفئران القديمة تسعة أشهر، eIF4E: لا تأثير التركيب الوراثي المحدد، على عكس (أ) 5- ل6 أشهر من العمر. ADNP، التي تعتمد على النشاط اعصاب البروتين. LSD، الفارق الأقل أهمية.

الرقم الكامل وأسطورة (102 K)

ADNP التعبير الحصين يسلك إزدواج الشكل الجنسي الصارخ

نظرا للاختلافات الجنس والتركيب الوراثي في ADNP + / - الفئران، ونحن مهتمون لمعرفة ما إذا ADNP التعبير في قرن آمون، وهي منطقة الدماغ المرتبطة مباشرة مع التعلم والذاكرة التي تعتمد على الجنس. أوحينا، لأول مرة، وانخفاض معنوي 2 أضعاف ADNP التعبير في قرن آمون الإناث، على غرار النقص المرتبط الوراثي في ADNP + / - الذكور، مع انخفاض الوراثي (ADNP haploinsufficiency) في الإناث كونها تافهة ( الشكل 4B). ليعكس هذا الاختلاف الجنسي للرجال، قمنا إعادة تقييم البيانات السابقة لدينا أيضا في الأنسجة الحصين الإنسان بعد الوفاة 25، 30 اكتشاف نفس الاختلاف بين الجنسين، مع الذكور التعبير عن ~ 25٪ أكثر نص ADNP من الإناث ( الشكل 4C). وعلى النقيض من ADNP، لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية في ADNP2 ذات الصلة ( الشكل 4D)، والاتفاق مع نتائجنا السابقة تظهر أي تأثير الوراثي-ADNP نقص من ADNP2 التعبير. 45 APOE، الجين خطر رئيسي لAD، وهو ما ثبت أن قمعها من قبل ADNP أثناء التطور الجنيني، 13 وانخفضت مرتين في الذكور مقارنة مع الإناث (الشكل 4E)، المتناقضة زيادة ADNP قرن آمون في الذكور (الشكل 4B). ومع ذلك، فإن نقص ADNP لا يؤدي إلى زيادة APOE في الذكور، بدلا من ذلك، لوحظ وجود انخفاض طفيف، مما يشير إلى آليات تعويضية. مقارنة مع الذكور، ADNP + / + إناث، كشفت تضاعف محتوى APOE-نص الذي تضاعف أكثر في ADNP + / - الإناث (الشكل 4E).
أجريت جميع التجارب المذكورة أعلاه في 5- إلى 6 أشهر من العمر الفئران. استخدمت تجربة متابعة عمره 9 أشهر بين الذكور والفئران تبين عدم وجود تأثير التركيب الوراثي للeIF4E في الفئران الأكبر سنا (الشكل 4F) بالإضافة إلى انخفاض كبير في مستويات eIF4E النص بين ADNP + / + 'الشباب' ذكور الفئران وADNP + / + "القديم" الفئران الذكور (P = 0.001، وإرفاقها ر -test، مقارنة الشكل 4F إلى الشكل 4A)، لوحظ وجود انخفاض سن تعتمد مماثل أيضا في ADNP + / - الفئران (P = 0.001، وإرفاقها ر -test ).
وأخيرا، تم اقتراح تشوهات في neuroligins، (NLGNs)، والتي هي المصب لelF4E، كما سببية للتوحد 42 مع جمعية جنس معين من المتغيرات مشتركة من الجينات neuroligin (NLGN3 وNLGN4X) مع ASD. 46 لذلك فإننا التحقيق في neuroligin 4 تعبير نص في ADNP + / - بالمقارنة مع ADNP + / + الذكور والإناث الفئران، على التوالي، في 5-6 أشهر من العمر (أرقام 5A-د). بينما النتائج لم تظهر التغييرات المرتبطة الوراثي في ذكور أو إناث، كانت هناك اختلافات الجنس كبيرة مع زيادات كبيرة في NLGN1 و3 (أرقام 5A-ج) وانخفاض في NLGN4 (الشكل 5D) في ADNP + / - الإناث مقارنة للذكور. لم NLGN2 لا تظهر الاختلافات (الشكل 5B)، في حين أظهرت أيضا زيادة NLGN1 التعبير في التحكم (ADNP + / +) ذكور، مقارنة مع الإناث التحكم (الشكل 5A).
الرقم 5.

عرض Neuroligins التعبير التي تعتمد على الجنس. تم تحليل الحمض النووي الريبي الحصين من الفئران من العمر 6 أشهر 5 لمن الكمية في الوقت الحقيقي PCR (ن = 6-8 الفئران في كل مجموعة). وقورنت 4 NGLN الجينات. (أ) NGLN1: أظهر تحليل التباين الثنائي (ANOVA) تأثير كبير من الجنس (F (1،26) = 16.754، P <0.001)، ولكن ليس له تأثير كبير في التركيب الوراثي (P = 0.561). LSD فيشر اللاحق كشف اختبار فرق كبير بين ذكور الفئران مقارنة مع الفئران الإناث على حد سواء ADNP + / + وADNP + / - (* P <0.05). (ب) NGLN2: في اتجاهين ANOVA أظهرت أثرا مهما للجنس (P = 0.777) وليس له تأثير كبير في التركيب الوراثي (P = 0.450). (ج) NGLN3: في اتجاهين أظهر ANOVA تأثير كبير من الجنس (F (1،24) = 7.800، P = 0.010)، ولكن ليس له تأثير كبير في التركيب الوراثي (P = 0.771). LSD فيشر اللاحق كشف اختبار فرق كبير بين ADNP + / - الفئران الذكور مقارنة مع ADNP + / - إناث الفئران (* P <0.05). (د) NGLN4: في اتجاهين أظهر ANOVA تأثير كبير من الجنس (F (1،25) = 12.258، P = 0.002)، ولكن ليس له تأثير كبير في التركيب الوراثي (P = 0.482). LSD فيشر اللاحق كشف اختبار فرق كبير بين ADNP + / - الفئران الذكور مقارنة مع ADNP + / - إناث الفئران (* P <0.05). (ه) ذكور الفئران من العمر تسعة أشهر، NGLN1: لا تأثير النمط الجيني محددة، مثل (أ) 5- ل6 أشهر من العمر. (و) ذكور الفئران من العمر تسعة أشهر، NGLN2. (ز) ذكور الفئران القديمة تسعة أشهر، NGLN3. (ح) ذكور الفئران القديمة تسعة أشهر، NGLN4. ADNP، التي تعتمد على النشاط اعصاب البروتين. LSD، الفارق الأقل أهمية.

الرقم الكامل وأسطورة (124 K)

وأشارت تجربة المتابعة على الفئران الذكور عمره 9 أشهر أي تغييرات المرتبطة الوراثي، كما وجدت للفئران الشباب (أرقام 5A-ح). تحليل للفرق التي تعتمد على العمر وكشف أي تغيير في NLGN3 وNLGN4 ومع ذلك، تم العثور على خفض تعتمد على سن كبير لنسخة NLGN1 مقارنة ADNP + / + 'الشباب' مقابل ذكور الفئران "القديم" (P = 0.023، وإرفاقها ر - اختبار، أرقام 5A وه) وعلاوة على ذلك، لوحظ وجود انخفاض سن يتوقف كبير لNLGN2 محاضر في ADNP "القديم" + / - الفئران الذكور مقارنة مع ADNP 'الشباب' + / - الفئران الذكور (P = 0.049، وإرفاقها ر -test ، الأرقام 5B و f).

أعلى الصفحة نقاش

من النتائج المفاجئة الأكبر من العمل الحالي ان تضاعف التعبير الحصين من ADNP في الذكور مقابل الماوس الإناث التي تم العثور عليها لمحاكاة الدماغ البشري بعد الوفاة، تليها انخفاض مزدوج في ADNP haploinsufficient الذكور، وليس انخفاضا كبيرا في وADNP + / - الإناث. الزيادة في ADNP التعبير يتوازى الأداء السلوكي المحسن في ADNP الذكور سليمة مقارنة مع الإناث في مهمة الذاكرة الاجتماعية، وتقديم التمييز حاسة الشم سليمة. في المقابل، أدى ADNP haploinsufficiency في ضعف الادراك شديد في الذكور مع الإناث بمنأى إلى حد ما في اختبار التعرف على الأشياء، ومحاكاة النتائج في الأطفال الذين يعانون من الطفرات ADNP مع المريضات أربع تظهر الإعاقة الذهنية الخفيفة، في حين أن معظم الذكور (خمسة من ستة) تظهر الإعاقة الذهنية الشديدة. 6
ومن المهم أيضا أن نضع في الاعتبار أن لدينا مستعمرة، الأباعد مع الفئران مجلس النواب، لا يزال يظهر آثار سلوكية كبيرة في ADNP + / - الذكور، والتي تورط تأثير الوراثي قوي، كما هو متوقع من الدراسات البشرية. وترد هذه النتائج أيضا في الإناث، مع ADNP + / - الفئران تتجه معنويا فقط يفضلون الفئران على الأجسام في اختبار الاعتراف الاجتماعي، على عكس ADNP + / + إناث والذكور. الفرق بين الجنسين في الحصين التعبير ADNP هو أكثر إثارة للانتباه عند مقارنتها مع النتائج السابقة في النواة المقوسة من منطقة ما تحت المهاد التي تبين النتيجة المعاكس، مع ADNP انخفضت التعبير في الذكور ومراقبة دورة وداقية التي تنطوي على تأثيرات الإستروجين. 36 وفي هذا الصدد، ADNP هو جزء من SWI / لونين SNF إعادة عرض تعقيدا 47 بما في ذلك BAF57 تنظم تحديدا مستقبلات هرمون الاستروجين α (ER α) النسخ بوساطة 48، وتبين ADNP لتنظيم التعبير الخاص بها. 13، 49 فضلا عن ذلك، ADNP-التفاعل SWI / SNF عضو BRG1، يتفاعل أيضا مع الاندروجين الذاتية مستقبلات تستجيب المروجين 50 وتشارك كل من BRG1 وBAF57 في تعزيز نشاط مستقبلات الاندروجين. 51 وتشير دراساتنا التفاعل المباشر من ADNP في هذه العمليات، موضحا في جزء الاختلاف الجنسي المرتبطة ADNP راثى -deficient.
دراسة الإنسان على الأطفال الذين يعانون من التوحد تظهر من جديد الطفرات في ADNP المشار إليها ADNP باعتبارها SWI / عضو الجبهة الوطنية الصومالية 6 مع توطين النووية السائد، كما أشارت الدراسات الأصلية لدينا. 47 نحن يعرض حاليا على تفاعل ADNP مع eIF4E حشوية وزيادة eIF4E التعبير في قرن آمون من ADNP البالغ من العمر 6 اشهر 5- إلى + / -. الماوس الذكور، الذي كان قد اقترح كما السببية لASD 42 ومن المثير للاهتمام، وهذا التعبير زيادة eIF4E لم تستمر في 9 أشهر من العمر، والذي اقترن ل قد انخفضت بشكل عام eIF4E التعبير في الفئران الأكبر سنا. هذه النتائج قد تكون ذات صلة إلى حقيقة أن تخليق البروتين الكلي يتناقص مع المخ من الشيخوخة 52، 53 بالإضافة إلى حقيقة أن التوحد هو اضطراب يصيب المبكر يرتبط مع رفع القيود خلال التنمية.
إلى جانب elF4E، يتفاعل ADNP مع العديد من البروتينات الأخرى، بما في ذلك قوات الأمن الفلسطينية (عامل تاو الربط) 54 وكلا PSF وelF4E يتم فسفرته التي كتبها MNK كيناز. 55 وهكذا، ADNP ملزم إما البروتين قد تؤثر الفسفرة وتفعيل حالة eIF4E، وهو المرتبطة بتنظيم الترجمة.
تم العثور على إزدواج الشكل الجنسي أيضا على مستوى neuroligin التعبير، تبين ان تكون ينظمها eIF4E. 42 وعلاوة على ذلك، تم تحديد إزدواج الشكل الجنسي دراماتيكية في التعبير عن APOE مما يشير إلى تأثير أوسع من ADNP على التوحد والجينات ذات الصلة م. مع APOE يجري الجين خطر رئيسي لAD، يتم إجراء اتصال لأعلى خطر AD في الأفراد الذين يعانون من التوحد.
الزيادة الكبيرة للغاية من APOE التعبير في قرن آمون الإناث مقترنة إلى زيادة في ADNP + / - قد تكون مرتبطة الإناث مع زيادة انتشار AD عند النساء مقارنة مع الرجال. 5 وعلاوة على ذلك، neuroligin1 (الضعف في الحصين الماوس الإناث مقارنة مع الذكور ) يتفاعل مع اميلويد بيتا الببتيد لزيادة تشكيل oligomers بيتا اميلويد، 56 حالة مرضية رئيسيا في AD. ومن المثير للاهتمام، في الفئران الأكبر سنا (9 مقابل 5-6 أشهر من العمر)، تم العثور على خفض كبير في محضر NLGN1 مما يشير إلى أن الزيادات في neuroligin1 قد تكون ذات صلة إلى المراحل الأولى من AD.
وقد تبين أن الأمراض الرئيسي الثاني في AD، تاو hyperphosphorylation وتراكم تاو التشابك الليفي العصبي أن تكون جزءا من أمراض الفئران ADNP التي تعاني من نقص. 12 وبالإضافة إلى ذلك، زيادة أولية في ADNP التعبير، يعقبه انخفاض هائل المرتبط بالشيخوخة ، التنبؤ تاو علم الأمراض في الفئران مع ADNP التفاعل مع تاو مرنا الربط. 54، 57 كما هو مبين أعلاه، البروتينات شاملة حددت ADNP كما انخفض البروتين الوحيد في مصل المرضى ميلادي مقارنة مع الضوابط. 35
الدراسة الحالية تضع العلاج ببدائل ADNP كهدف رئيسي للمخدرات. وADNP المشتقة، وثمانية من الأحماض الأمينية الببتيد اعصاب NAP (davunetide)، الحماية من نتائج نقص ADNP في الفطرية ADNP + / - الماوس، وهذا هو، تاو علم الأمراض وإدراكيا 12 وقد أظهرت ومؤشرات إيجابية لزيادة الدرجات المعرفية في الشيخوخة المرضى معتدل المعرفي انخفاض القيمة. 58، 59، 60 على الرغم من أن برنامج العمل الوطني (davunetide) أظهرت وجود نشاط في الضعف الادراكي المعتدل، وكانت النتائج السريرية في فوق النووي التدريجي مرضى الشلل مخيبة للآمال. 61 وفي المقابل، في المرضى الذين يعانون مرض انفصام الشخصية، أشارت NAP (davunetide) معالجة حماية الأنشطة من الحياة اليومية 62 وظيفة خلايا الدماغ (القياسات التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي). 63 حددت النتائج الحالية خشبة المسرح مع نموذج من نقص ADNP أن يقدم نموذجا جديدا لل(1) فهم أفضل لدور المحوري للADNP في النمو العصبي والعصبية في الذكور والإناث، ويمهد الطريق ل(2) تحسين وتحسين NAP (davunetide) والمركبات ذات الصلة 18، 57 للتنمية المستقبلية المحتملة السريرية في ASD والوقاية من ظهور لاحق من AD، مع إيلاء الانتباه إلى الفروق بين الجنسين مثيرة نحو دقيق الطبية تدخل / الطب النفسي متعدية العقلاني.

أعلى الصفحة تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح.

أعلى الصفحة المراجع

• Maenner MJ، رايس CE، Arneson CL، Cunniff C، Schieve LA، نجار LA آخرون. التأثير المحتمل لDSM-5 المعايير على طيف التوحد تقديرات انتشار الفوضى. JAMA الطب النفسي 2014؛ 71: 292-300. | المادة | مجلات | ISI |
• جيلبرج C، E. Billstedt التوحد ومتلازمة اسبرجر: التعايش مع الاضطرابات السريرية الأخرى. اكتا Psychiatr Scand 2000؛ 102: 321-330. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• بينتو D، Pagnamenta AT، Klei L، Anney R، Merico D، R ريغان وآخرون. تأثير وظيفي من التباين العالمي في عدد النسخ النادرة في اضطرابات طيف التوحد. الطبيعة 2010؛ 466: 368-372. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• Talkowski ME، روزنفيلد JA، بلومنتال I، Pillalamarri V، شيانغ C، A Heilbut وآخرون. تسلسل شذوذ الكروموسومات يكشف مواضع النمو العصبي التي تمنح المخاطر عبر الحدود التشخيص. الخليوي 2012؛ 149: 525-537. | المادة | مجلات | CAS |
• Mielke MM، Vemuri P، روكا WA. علم الأوبئة السريرية لمرض الزهايمر: تقييم الفروق بين الجنسين والمساواة بين الجنسين. كلين Epidemiol 2014؛ 6: 37-48. | المادة | مجلات |
• Helsmoortel C، Vulto-فان Silfhout AT، كو BP، Vandeweyer G، غرف L، فان دن ده J وآخرون. A SWI / متلازمة المتعلقة SNF-التوحد الناجمة عن دي نوفو الطفرات في ADNP. نات جينيه عام 2014؛ 46: 380-384. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• O'Roak BJ، بيبس L، فو W، Egertson دينار، Stanaway IB، فيلبس IG آخرون. تعدد التسلسل المستهدف يحدد تحور الجينات متكرر في اضطرابات طيف التوحد. العلوم 2012؛ 338: 1619-1622. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• O'Roak BJ، بيبس L، Girirajan S، كاراكوتش E، كروم N، كو BP وآخرون. تكشف exomes التوحد متفرقة شبكة البروتين مترابطة للغاية من دي نوفو الطفرات. الطبيعة 2012؛ 485: 246-250. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• بسام M، Zamostiano R، ديفيدسون A، Pinhasov A، E جلعادي، بيرل O آخرون. التسلسل الكامل للبروتين جديد يحتوي على الببتيد اعصاب femtomolar المعتمد على النشاط. J نوروتشيم 1999؛ 72: 1283-1293. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• Zamostiano R، Pinhasov A، E جيلبر، Steingart RA، Seroussi E، E جلعادي وآخرون. الاستنساخ وتوصيف تعتمد على النشاط اعصاب البروتين البشري. J بيول كيم 2001؛ 276: 708-714. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• Pinhasov A، S ماندل، Torchinsky A، E جلعادي، Pittel Z، Goldsweig AM آخرون. . تعتمد على النشاط اعصاب البروتين: جين رواية ضروري لتشكيل الدماغ الدماغ بحوث الدماغ ديف الدقة 2003؛ 144: 83-90. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• Vulih-Shultzman I، Pinhasov A، S ماندل، Grigoriadis N، Touloumi O، Pittel Z آخرون. التي تعتمد على نشاط البروتين اعصاب قصاصة NAP يقلل تاو hyperphosphorylation ويعزز التعلم في رواية نموذج الفأر المعدل وراثيا. J Pharmacol إكسب ذر 2007؛ 323: 438-449. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• ماندل S، G Rechavi، Gozes I. تعتمد على آخر اعصاب البروتين (ADNP) تتفاعل بشكل مختلف مع لونين لتنظيم الجينات الأساسية للمرحلة التطور الجنيني. ديف بيول 2007؛ 303: 814-824. | المادة | مجلات | ISI | CAS |
• أوقية S، إيفاشكو-Pachima Y، Gozes أولا ADNP الببتيد المشتقة، NAP ينظم بركة تويولين: الآثار المترتبة عن التغذية العصبية والأنشطة اعصاب. بلوس واحد 2012؛ 7: e51458. | المادة | مجلات |
• Quraishe S، كوان CM، مظهر A. NAP (davunetide) ينقذ ضعف الخلايا العصبية في نموذج ذبابة الفاكهة من tauopathy. مول الطب النفسي 2013؛ 18: 834-842. | المادة | مجلات | ISI |
• Shiryaev N، Jouroukhin Y، جلعادي E، E Polyzoidou، Grigoriadis NC، روزنمان H آخرون. NAP يحمي الذاكرة، ويزيد تاو القابلة للذوبان ويقلل تاو hyperphosphorylation في نموذج tauopathy. Neurobiol ديس 2009؛ 34: 381-388. | المادة | مجلات | ISI |
• Gozes I، إرم T، Maryanovsky E، C Arviv، روزنبرج L، Schirer Y آخرون. رواية تويولين وتاو اعصاب شظايا تبادل أوجه التشابه الهيكلي مع NAP عقار مرشح (Davuentide). J الزهايمر ديس 2014؛ 40: S23-S36. | مجلات | ISI |
• Gozes I، Schirer Y، عيدان-فيلدمان A، ديفيد M، فرمان العساف S. NAP حمض الفا لaminoisobutyric (IsoNAP). J مول Neurosci 2014؛ 52: 1-9. | المادة | مجلات | ISI |
• أوقية S، Kapitansky O، Ivashco-Pachima Y، Malishkevich A، E جلعادي، Skalka N وآخرون. عزر NAP التي تعتمد على النشاط اعصاب البروتين (ADNP) ينظم العمود الفقري شجيري من خلال البروتينات ملزمة نهاية أنيبيب. مول الطب النفسي 2014؛ 19: 1115-1124. | المادة | مجلات | ISI |
• Garbern JY، نيومان M، Trojanowski JQ، لي VM، فيلدمان G، نوريس JW آخرون. A الطفرة التي تؤثر على الصوديوم / مبادل بروتون، SLC9A6، يسبب التخلف العقلي مع تاو الترسيب. الدماغ عام 2010؛ 133: 1391-1402. | المادة | مجلات | ISI |
• Latapy C، Rioux V، غيتون MJ، بوليو JM. حذف مختارة من الدماغ الأمامي الجليكوجين سينسيز كيناز 3beta يكشف دورا مركزيا في القلق الحساسة السيروتونين والسلوك الاجتماعي. Philos ترانس R سوك وند B بيول العلوم 2012؛ 367: 2460-2474. | المادة | مجلات |
• Mukaetova-Ladinska EB، أرنولد H، Jaros E، R بيري، بيري E. استنفاد التعبير MAP2

 

[رافت ابراهيم]

 

http://jhc.sagepub.com/content/48/4/545.full

لأوعية الدموية عامل النفاذية / الأوعية الدموية (عامل نمو بطانة VPF / VEGF) يتفاعل مع اثنين من مستقبلات عالية تقارب التيروزين كيناز، VEGFR-1 وVEGFR-2، لزيادة نفاذية الاوعية الدموية الدقيقة وتحفز الأوعية الدموية. وأعرب كل من مستقبلات بشكل انتقائي من قبل خلايا بطانة الأوعية الدموية، وزيادة لافت للنظر في الأوعية الورم. استخدمنا الأجسام المضادة المحددة لتوطين VEGFR 2 (FLK-1، KDR) في الاوعية الدموية الدقيقة البطانة الكلى الماوس العادية وفي microvessels الناجمة عن TA3 / سانت ورم الثدي أو عن طريق العدوى مع ناقلات الفيروسة الغدانية هندسيا للتعبير VPF / VEGF. كان يعمل هناك طريقة ما قبل التضمين في ضوء والإلكترون مستويات المجهرية باستخدام nanogold أو الغلوثانيون كصحفيين. وقد لوحظ تلطيخ يعادل على كل من اللمعية والسطوح مجافي اللمعة من tumor- والتي يسببها اتش بطانة الأوعية الدموية، ولكن لم يدخر أغشية البلازما عند التقاطعات interendothelial إلا في مواقع متصلة vesiculovacuolar العضيات (VVOs). تم المترجمة VEGFR-2 أيضا على الأغشية وأغشية خلايا الثغور بعض VVOs. هذا التوزيع تلطيخ يتسق مع النموذج الذي VPF / VEGF يزيد نفاذية الاوعية الدموية الدقيقة من خلال فتح VVOs للسماح بمرور خلية transendothelial من البلازما والبلازما البروتينات.

• عامل نفاذية الأوعية الدموية (VPF)
• الأوعية الدموية (عامل نمو بطانة VEGF)
• عامل نفاذية الأوعية الدموية مستقبلات (VPFR)
• الأوعية الدموية عامل نمو بطانة مستقبلات (VEGFR)
• الجنين كيناز الكبد 1 (FLK-1)
• كيناز إدراج مستقبلات التي تحتوي على المجال (KDR)
• التركيب الدقيق
• مناعية
• الخلايا البطانية
• سفن الورم
• الماوس الكلى
• عضية vesiculovacuolar (VVO)

الأوعية الدموية عامل النفاذية / الأوعية الدموية (عامل نمو بطانة VPF / VEGF) هو خلوى متعدد الوظائف القوية التي permeabilizes بطانة الأوعية الدموية للبروتينات البلازما ويعيد البرمجة البطانية التعبير الجيني الخلية وذلك للحث على الأوعية الدموية (كلارك وآخرون 1996.؛ براون وآخرون 1997.؛ فيرارا وديفيس-سميث 1997؛ دفوراك وآخرون 1999.؛ فنغ وآخرون 1999a.؛ فيرارا 1999). ويفرز VPF / VEGF من قبل العديد من الأورام وتفعيل الضامة، الخلايا الكيراتينية والخلايا المفاصل، والخلايا الجنينية المختلفة، والظهارية مثقف وخطوط الخلايا الوسيطة. VPF / VEGF يدفع تأثيرها البيولوجي عن طريق الربط بين اثنين من مستقبلات كيناز التيروزين، VEGFR-1 (FMS مثل التيروزين كيناز مستقبلات أو FLT) وVEGFR 2 (الجنين كيناز الكبد 1، أو FLK-1، في القوارض، مجال إدراج كيناز المحتوية على مستقبلات أو KDR، في البشر) التي يتم التعبير عنها بشكل انتقائي في بطانة الأوعية الدموية (ماثيوز وآخرون 1991.؛ تيرمان وآخرون 1991.، 1992؛ دي فريس وآخرون 1992.؛ كوين وآخرون 1993.؛ موستونين وAlitalo 1995) . وupregulated كل من مستقبلات لافت للنظر في الأورام والجروح، وأنواع معينة من التهاب (مثل التهاب المفاصل الرثياني والصدفية) التي هى overexpressed VPF / VEGF (براون وآخرون 1997). وقد اعترف المجمع الذي يشكل بين-يفرز الورم VPF / VEGF ومستقبلاته كهدف محتمل جذابة للعلاج antiangiogenesis (دفوراك وآخرون 1991.؛ Brekken وآخرون 1998.). في الآونة الأخيرة، كما وصفت ثالث غير التيروزين كيناز مستقبلات للVPF / VEGF، neuropilin، (Soker وآخرون 1998).
على الرغم من أن كلا VEGFR-1 وVEGFR-2 الخضوع الفسفرة بعد التفاعل مع VPF / VEGF، ويعتقد VEGFR-2 لتكون مستقبلات أكثر أهمية فيما يتعلق الحث على زيادة نفاذية الاوعية الدموية الدقيقة والأوعية الدموية (Millauer وآخرون 1993.؛ Waltenberger وآخرون. 1994؛ كرول وWaltenberger 1997؛ جربر وآخرون 1998.؛ فنغ وآخرون 1999b.). VEGFR-2 هو أيضا مستقبلات لأعضاء آخرين في الأسرة VEGF، بما في ذلك VEGF-C، VEGF-D، وVEGF-E (Jeltsch وآخرون 1997.؛ Achen مباشرة وآخرون 1998.؛ اوجاوا وآخرون 1998.).
وتم حصر التعبير على حد سواء VEGFR-1 وVEGFR-2 بواسطة التهجين في الموقع لالاوعية الدموية الدقيقة البطانة الكلى طبيعية، والأورام، والتئام الجروح، ومواقع التهابات (براون وآخرون 1997). كما تم تحديدها VEGFR-2 في الأوعية الدموية للمشيمة الآدمي، سرطان الثدي، سرطان المعدة والتي المناعية المجهرية الخفيفة (فوكوفيتش وآخرون 1996.؛ تانيجاوا وآخرون 1997... دي يونج وآخرون 1998a، ب). ومع ذلك، لم تكن هناك أي تقارير تصف توطين التركيبية إما مستقبلات في بطانة الأوعية الدموية.
نفيدكم هنا توطين التركيبية من VEGFR 2 (FLK-1 / KDR) في بطانة الأوعية الدموية في ثلاثة أنظمة النموذج الذي يعبر غاية VPF / VEGF: (أ) الشعيرات الدموية الكبيبي وperitubular الكلى الفأر العادي. (ب) microvessels تزويد جيدا اتسم سرطان الثدي الماوس. و (ج) السفن الجديدة الناجمة عن ناقلات الفيروسة الغدانية صممت لبإفراط VPF / VEGF (الغدة VPF / VEGF) (بيترسون وآخرون تحت الطبع). وتم الحصول على نتائج مماثلة باستخدام preembedding الأساليب التي تستخدم إما محسنة الفضة nanogold أو البيروكسيديز الفجل كصحفيين. وكانت الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة إيجابية لVEGFR-2 في جميع النماذج الثلاثة، وفي الأخيرين، يمكن أن تكون مترجمة إلى اللمعية ومجافي اللمعة الأسطح والأغشية العضيات السيتوبلازمية vesiculovacuolar (VVOs). هذه النتائج تتفق مع الأدلة الأخرى التي VVOs توفير ممر مهم للتسرب من البلازما والبلازما البروتينات ردا على VPF / VEGF (فنغ وآخرون 1996، 1997، 1999a). تم المترجمة VEGFR-2 أيضا أن البطانة اللمفاوية في الغدة-VPF / مواقع حقن عامل نمو بطانة الاوعية ولكن لم يتم الكشف في الهيئات عديد الحويصلات والهيئات ويبل-بالادي، حفر المغلفة، حويصلات المغلفة، أو في الصفيحة القاعدية الكامنة البطانة VEGFR-2-إيجابية.

القسم السابق القسم التالي

المواد والأساليب

الحيوانات، الأورام، والمتجهات

TA3 / سانت الأورام، والمستمدة أصلا من غدية الثديية التي وضعت بشكل عفوي في A / HeHa سلالة الماوس، تم passaged أسبوعيا في شكل استسقاء في تجاويف البريتوني من الإناث الفئران A / جاكس. للحث على الأورام الصلبة، تم حقن 1 × 10 6 الخلايا السرطانية في الفضاء تحت الجلد من ~20-ز أنثى A / جاكس الفئران. أعدت ناقلات الفيروسة الغدانية كما هو موضح سابقا (أوري وآخرون 1996.؛ هاردي وآخرون 1997.). أنثى BALB / ج BYJ Hfh11 الفئران عارية نو العوز المناعي، 4-6 أسابيع من العمر، تم الحصول عليها من مختبر جاكسون (بار هاربور، ME). تم تصميم ناقلات الفيروسة الغدانية للتعبير عن الفئران VPF / VEGF 164 (جوزمان وآخرون 1993 تم حقن) و 2.5 × 10 8 PFU في الجلد الجناح أو الساق العضلات عارية (العوز المناعي) الفئران (بيترسون وآخرون تحت الطبع). وباختصار، / الحيوانات المحقونة VEGF-الغدة VPF تتطور استجابة عائية قوية مصحوبة فرط النفوذية الوعائية وذمة ولكن من دون الخلايا الالتهابية.

الأجسام المضادة لVEGFR 2 (FLK-1)

تم استخدام الماوس FLK-1 / SEAP أو المجال للذوبان خارج الخلية من FLK-1 (sFlk-1) كما مستمنع مع نتائج مماثلة. FLK-1 / SEAP تم عزل وتنقيته كما هو موضح سابقا (تسلر وآخرون 1994.؛ Brekken وآخرون 1998.). بعد تنقيتها، ومستقبلات (في PBS) العقيمة التي تمت تصفيتها والمجمدة في قسامات حتى الاستخدام. وقد تم توليد الأجسام المضادة بتحصين ثلاث إناث الأرانب مع 60-70 ميكروغرام من أي FLK-1 / SEAP أو المجال خارج الخلية القابلة للذوبان من FLK-1 (sFlk-1). تم تقسيم الحقن (50 ميكرولتر لكل منهما) على مدى ثلاثة مواقع تحت الجلد على كل أرنب. وفي وقت لاحق، كانت تدار SC حقن منشطة من 25-40 ميكروغرام من sFlk-1 في TiterMax كل 5 أسابيع لمدة 6 أشهر إلى سنة 1. وقد نزف الحيوانات من الأذن والأمصال التي تم جمعها وتجميعها بعد 2-3 أسابيع كل حقنة منشطة. تم قياس التتر مع فحص ELISA غير المباشرة باستخدام sFlk-1 كما المستضد (هوانغ وآخرون 1998) وأيضا من خلال تحليل FACS على الخلايا التي كانت إما VEGFR 2 (FLK-1) -positive أو -negative [يرجى المقدمة من الدكتور J. Waltenberger، أولم، ألمانيا (Waltenberger وآخرون 1994)]. كانت الأجسام المضادة بعد ذلك من ارتفاع عيار-تنقية تقارب (≥ 1: 50،000) مصل. (؛ بيسكاتواي، NJ فارماسيا) وفقا لتعليمات الشركة الصانعة وعن طريق الربط بين 1-2 ملغ من تنقيته sFlk-1 إلى 1.0 مل HiTrap NHS تنشيط العمود سيفاروز إعداد عمود النسب. تم المخفف الأمصال 1: 2 في برنامج تلفزيوني مع نان 3 وتعميمها على عمود لمدة 24-48 ساعة في 4C. ثم غسلها العمود مع 50-100 كميات عمود من برنامج تلفزيوني ومزال في درجة الحموضة المنخفضة والعالية مع 0.1 M حمض الستريك، ودرجة الحموضة 2.8، و 0.1 M ثلاثي الإيثيلامين، ودرجة الحموضة 11.5 على التوالي. وكانت غلة النموذجية ~200 ميكروغرام من معين مفتش / مل مصل. وقد تبين الأجسام المضادة أن تكون محددة لVEGFR-2 بواسطة ELISA وتحليل لطخة غربية (هوانغ وآخرون 1998).

تثبيت الأنسجة والتحضير لImmunohisto / الكيمياء الخلوية

تسعة أيام بعد تلقي TA3 / سانت الورم، تم التضحية ستة الفئران A / جاكس تحمل الصلبة TA3 / سانت الأورام وستة السيطرة على الفئران من نفس السلالة التي كتبها CO 2 الخدر والأورام، جنبا إلى جنب مع عينات الجلد والكلى السيطرة A / الفئران جاكس، تم حصادها. تم حصاد أجزاء من الجلد الأذن وعضلات الساق بالمثل من الفئران عارية في 1، وبعد 3 أو 5 أو 8 أيام حقن-الغدة VPF / VEGF أو اتش تحمل إدراج التحكم (lacZ أو البروتين الفلوري الأخضر).
وكانت محاولات لإثبات VEGFR-2 على مستوى الإلكترون المجهري عن طريق إجراءات postembedding ناجحة. لذلك، اعتمدنا البروتوكول قبل التضمين باستخدام nanogold أو الغلوثانيون كمراسلة. كانت مغمورة الأنسجة فورا في طازجة 4٪ لامتصاص العرق في 0.02 M العازلة الفوسفات، ودرجة الحموضة 7.4. بعد 4 ساعات من التثبيت في درجة حرارة الغرفة (RT)، تم نقل الأنسجة إلى 30٪ سكروز في المخزن نفسه PBS بين عشية وضحاها في 4C. وأخيرا، كانت جزءا لا يتجزأ الأنسجة في أكتوبر مجمع (مايلز، الخرط، IN) وتخزينها في النيتروجين السائل في -176C لاستخدامها لاحقا. أقسام المجمدة أو 5 أو 10 ميكرون سميكة، وقطعت على ناظم البرد القياسي (الأنسجة تيك II) وجمعت على الشرائح المجهرية تنظيفها مسبقا (Fisherbrand، Colorfrost / زائد؛ فيشر العلمية، بيتسبرغ، PA). كانت الشرائح لمدة 20 دقيقة المجفف في الهواء قبل تلطيخ للضوء أو المجهر الإلكتروني.

بروتوكول المناعي

قطعت أقسام ناظم البرد خمسة ميكرون والتي شنت على الشرائح الزجاجية لالمناعية المجهرية الخفيفة. قطعت أقسام ناظم البرد عشرة ميكرومتر، التي شنت، ومعالجتها وفقا لنفس بروتوكول المناعية للالغرز لاحق في الإي بي لقطاعات مجهرية ضوء 1μm وأيضا للفحص المجهري إلكترون. تم تنفيذ كافة الخطوات التالية المناعية في RT مع أقسام ناظم البرد التي شنت على الشرائح الزجاجية: (أ) غسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.6، 5 دقائق. (ب) تزج في 0.3٪ بيروكسيد الهيدروجين (فيشر العلمي، معرض الحديقة، NJ) في الميثانول، 30 دقيقة، (ج) ويغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق. (د) تزج في 5٪ الماعز العادي المصل (خ ع) (مختبرات النواقل؛ بورلنجام، CA)، و 20 دقيقة. (ه) الابتدائية بولكلونل الأجسام المضادة أرنب لVEGFR 2 (T014) من قبل اثنين من المؤلفين (RAB، PET) إعداد (تنقية تقارب هوانغ وآخرون 1998) كانت تستخدم في التخفيف من البروتين 01:40 (= 1 ميكروغرام / ميكرولتر) في 0.02 M PBS، 60 دقيقة، (و) ثلاثة يغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق لكل منهما؛ (ز) الضد الثانوية (تنقية تقارب والماعز البيروكسيديز المضادة للأرنب مفتش الأضداد؛ (ناقلات)، 1: 100 في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 60 دقيقة، (ح) ثلاثة يغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقيقة لكل منهما؛ مجمع الغلوثانيون (ط) أفيدين-البيوتين الفجل (ABC) (ناقلات) في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 30 دقيقة، (ي) ثلاثة يغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق لكل منهما؛ (ك) 0.05٪ 3،3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، التي تحتوي على 0.003٪ بيروكسيد الهيدروجين، 5 دقائق، (ل) ويغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق، (م) بوستفيكس في 1 ٪ غلوتارالدهيد في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، لمدة 5 دقائق؛ (ن) بعد الشطف بالماء، وcounterstained المقاطع مع تعديل الهيماتوكسيلين ماير (أمريكا الأنسجة الكواشف، ستوكتون، كاليفورنيا) لمدة 5 دقائق. (س) ويغسل في الماء لمدة 30 دقيقة تليها الجفاف من خلال سلسلة من ethanols وجبل الأقسام تحت coverslips.
تم تنفيذ خمسة ضوابط لضمان خصوصية الغلوثانيون المناعية: (أ) استبدال الأجسام المضادة الأولية من قبل مفتش أرنب غير ذي صلة؛ (ب) إغفال الأجسام المضادة الأولية محدد؛ (ج) إغفال من الأجسام المضادة الثانوية؛ (د) إغفال مجمع ABC؛ (ه) إغفال DAB.

المناعية Nanogold فضة بروتوكول

أعدت أقسام بالنسبة للبروتوكول المناعي. تم إجراء الخطوات التالية في RT مع أقسام ناظم البرد التي شنت على الشرائح الزجاجية: (أ) غسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.6، 5 دقائق. (ب) تزج في 50 ملي الجلايسين في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 10 دقيقة، (ج) ويغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق. (د) تزج في 5٪ NGS (ناقلات)، و 20 دقيقة. (ه) في احتضان الأجسام المضادة الأولية، T014، كما لتلطيخ المناعي. (و) ثلاثة يغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق لكل منهما؛ (ز) في احتضان الأجسام المضادة الثانوية (تنقية تقارب nanogold، 1.4 نانومتر في القطر مترافق الماعز المضادة للأرنب مفتش الأضداد أو nanogold مع 1.4 نانومتر في القطر مترافق الماعز المضادة للأرنب تنقية تقارب فاب "(Nanoprobes؛ ستوني بروك، NY)، 1: 100 في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 60 دقيقة، (ح) ثلاثة يغسل في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق لكل منهما؛ (ط) بوستفيكس في 1٪ غلوتارالدهيد في 0.02 M PBS، ودرجة الحموضة 7.4، 5 دقائق؛ (ي) ثلاثة يغسل في الماء المقطر، 5 دقائق لكل منهما؛ (ك) وضع مع HQ حل تعزيز الفضة (Nanoprobes) ل11/06 دقيقة في غرفة مظلمة؛ (ل) اثنين يغسل في الماء المقطر، 2 دقيقة لكل منهما؛ (م) إصلاح في 5٪ وحمض الصوديوم، 1 دقيقة، (ن) يشطف بالماء ومباين مع تعديل الهيماتوكسيلين ماير لمدة 5 دقائق. (س) ويغسل في الماء لمدة 30 دقيقة، تليها الجفاف من خلال سلسلة من ethanols، وجبل الأقسام تحت ساترة.
تم تنفيذ أربعة ضوابط لضمان خصوصية nanogold المناعية: (أ) استبدال الأجسام المضادة الأولية من قبل مفتش أرنب غير ذي صلة؛ (ب) إغفال الأجسام المضادة الأولية محدد؛ (ج) إغفال من الأجسام المضادة الثانوية؛ (د) إغفال الحل HQ تعزيز الفضة.

معالجة الأنسجة ل1 ميكرون أقسام الإي بي والمجهر الإلكتروني

بعد المناعية مع أي من البروتوكولين، وpostfixed أقسام 10 ميكرومتر تعلق على الشرائح الزجاجية في 1٪ رباعي أكسيد الأوزميوم في المخزن SYM-Collidine، ودرجة الحموضة 7.4، لمدة 10 دقيقة في RT، وغسلها مع 0.05 M الصوديوم العازلة ماليات، ودرجة الحموضة 5.2، وملطخة 2٪ خلات اليورانيل في 0.05 M الصوديوم العازلة ماليات، ودرجة الحموضة 6.0، لمدة 5 دقائق على RT. تم غسلها أقسام بالماء المقطر ثم المجففة في ethanols متدرج وتسلل مع تسلسل أكسيد البروبيلين-الإي بي 812. تم إجراء الغرز التي كتبها قلب كبسولات بلاستيكية Eponfilled على أقسام الأنسجة المرفقة الشريحة. بعد البلمرة لمدة 16 ساعة في 60C، تم فصل كتل الإي بي من الشرائح الزجاجية عن طريق الغمر وجيزة في النيتروجين السائل.
قطعت أقسام البلاستيك ميكرون واحد للفحص المجهري الخفيفة مع ultratome (رايشرت، فيينا، النمسا) وملطخة بالغيمزا القلوية في فرن 60C لمدة 60 دقيقة. لالمجهر الإلكتروني، وقطعت أقسام رقيقة بسكين الماس على ultratome (رايشرت) والتي تم جمعها على غير المصقول شبكات-200 شبكة النحاس (تيد بيلا، أوستن، تكساس). كان ينظر شبكات غير ملوثين مع المجهر الإلكتروني النافذ (CM 10؛ فيليبس، ايندهوفن، هولندا).

الإلكترون المجهري والتحليل الإحصائي

درست الكلى، الأورام، والجلد حقن اتش والعضلات والهيكل العظمي في ثلاثة حيوانات في الأوقات المحددة في النص. درسنا ست عينات منفصلة لكل الأنسجة وما مجموعه 30 EM أقسام الكلى، 24 من الورم، و 36 من أنسجة حقن اتش. تم إجراء التحليل الإحصائي مع -test مان ويتني U.

القسم السابق القسم التالي

النتائج

توطين VEGFR-2 في الكلى Microvessels من الفئران العادية

وأعرب عن VPF / VEGF بقوة podocytes الكبيبي وظهارة أنبوبي الكلى طبيعية، والكلى هي واحدة من عدد قليل من أنسجة البالغين الطبيعي التي يتم فيها الكشف عن VPF / VEGF مستقبلات التعبير بسهولة عن طريق التهجين في الموقع (Berse وآخرون 1992.؛ براون وآخرون . 1992a، 1997؛ دفوراك وآخرون 1999.). بواسطة المناعية المجهرية الخفيفة، الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة الكبيبي وperitubular الملون بشكل مكثف مع الأجسام المضادة لVEGFR-2 مع أي مراسل (الشكل 1A يوضح المناعية nanogold فقط). ومع ذلك، فإن الشرايين البطانة بطانة والشرايين الصغيرة ملطخة طفيفة أو لا على الاطلاق. كما لم ملطخة Podocytes وأنبوبي الظهارة.
بواسطة المجهر الإلكتروني، والجسيمات nanogold (الشكل 2A) والإنزيم (الشكل 2B) للصحفيين وصفت بدقة البطانة الكبيبي، تشفق على صفيحة القاعدية تحتاني وكذلك podocytes الظهارية والعمليات أقدامهم. لأن البطانة الكبيبي رقيقة للغاية، لم نكن قادرين على توطين تلطيخ على نحو أدق، أي إلى اللمعية أو سطح مجافي اللمعة. وكانت الضوابط لكل تقنية سلبي (الشكل 2C).

توطين VEGFR-2 في Hyperpermeable الأوعية الدموية البطانة Endothelium توريد TA3 / سانت ماوس الثديية سرطانيه

بواسطة المجهر الضوئي، سواء microvessels المرتبطة الورم (الشكل 1B) والأوعية اللمفاوية (لا يظهر) أظهرت مكثفة ومحددة تلطيخ الخطية لVEGFR-2، في حين نوى الخلايا البطانية والخلايا السرطانية لا وصمة عار. يتم تكبير أول الأوعية الدموية الجديدة الناجمة عن TA3 / سانت الأورام، الجيوب-خلية حوطية الفقيرة وصفته السفن "الأم" (ناجي وآخرون 1995.؛ بيترسون آخرون في الصحافة). تقسيم السفن الأم لاحقا في سفن ابنة أصغر من خلال عملية سد اللمعة من الخلايا البطانية (ناجي وآخرون 1995.؛ فنغ آخرون في الصحافة؛. بيترسون آخرون تحت الطبع). وكان سد البطانة أيضا بقوة VEGFR-2-الإيجابي (أرقام 1B و1D، السهام). الأوعية الدموية والأوعية اللمفاوية في الجلد الطبيعي المجاور للأورام ملطخة ضعيفة أو لا على الاطلاق لVEGFR 2 (الشكل 1C، السهام). وقدم كل من نانو الذهب والغلوثانيون للصحفيين نتائج مماثلة بواسطة المجهر الضوئي.
بواسطة المجهر الإلكتروني، وصفت مجافي اللمعة واللمعية بطانة الأوعية الدموية غير مستقر، وليس بشكل مستمر، مع الأجسام المضادة لVEGFR-2 مع كل أساليب immunocytochemical (الشكل 3؛ فقط بيانات البيروكسيديز معروضة). لم يكن هناك اختلاف في كثافة العلامات nanogold بين التجويف البطانية وablumen (الجدول 1). الخلايا البطانية المبطنة السفن المرتبطة الورم، مثل البطانة venular العادية، تحتوي على العديد من VVOs، مجموعات بارزة من الحويصلات مثل caveolae غير المصقول، والفجوات التي تمتد السيتوبلازم البطانية من التجويف لablumen (كوهن وآخرون 1992.؛. دفوراك وآخرون 1996 ؛ فنغ وآخرون 1996.، 1999a). في الأوعية الورم وفي الأوردة العادية حفز مع VPF / VEGF، وتوفير VVOs مسارا لتسرب transendothelial بروتينات البلازما والجزيئات المنتشرة الأخرى. أيضا ملطخة VVOs تحديدا مع الأجسام المضادة لVEGFR-2؛ 52٪ من 102 VVOs عدها وصفت (يعني 1.5 جزيئات الذهب / VVO). وكانت أغشية البلازما الجانبية للاتصالات الخلوية interendothelial أحيانا إيجابية الوزراء البريطانى، ولكن فقط في الحالات شائعة فيه VEGFR-2-إيجابية حدث الحويصلة VVO لضمها (الشكل 3A). كانت أغشية الثغور بعض VVOs وcaveolae VEGFR-2-إيجابية، وأفضل ينظر مع مراسل الغلوثانيون عندما لم يكن الملون الحويصلة برمتها (انظر السهام في أرقام 3B و 3D). كانت أقل كثيرا المسمى الحويصلات VVO وفجوات أعمق داخل السيتوبلازم البطانية من تلك أقرب إلى اللمعية أو الأسطح مجافي اللمعة (الشكل 3C).
وصفت أغشية البلازما ومكونات VVOs السفن الجلد الطبيعية البعيدة عن الأورام الشوري أيضا لVEGFR-2، ولكن بوتيرة أقل ومع انخفاض كثافة مقارنة مع السفن المرتبطة بشكل وثيق مع SC العقيدات الورم.

عرض نسخة أكبر:

• في هذا الإطار
• في نافذة جديدة

• تحميل لشريحة PowerPoint

الشكل 1

المناعية من microvessels مع الأجسام المضادة لVEGFR-2. (A) الكلى الماوس العادي، مما يدل تلطيخ قوية من البطانة الوعائية الكبيبي وperitubular (السهم) الشعيرات الدموية. المناعية Nanogold والفضة ما قبل التضمين منهجية، 1 ميكرون سميكة قسم الإي بي counterstained مع بالغيمزا. (BF) الأجزاء الطرفية الصلبة TA3 / سانت الأورام تنمو في موقع SC الجلد بعد 9 أيام زرع (B) والمواقع الجلد الماوس ضخت في وقت سابق من 4 أيام مع الغدة-VPF / VEGF (CF). السفن الأم الموسعة (V) وصمة عار بقوة مع الأجسام المضادة لVEGFR-2 في جميع الأرقام. في C، وتقع محيطيا السفن (أعلى اليمين، والسهام) وصمة عار أقل كثافة من السفن الأم والمحيطة بها على الفور microvessels التي استجابت ل-الغدة VPF / VEGF. البطانة اللمفاوية (رابطة شباب الصفوة) ملطخة أيضا بقوة (E) ولكن البطانة تصلب (أ، F)، لا. السهام في B و D تشير سد الخلايا البطانية (ناجي وآخرون، 1995). تقسيم السفن الأم عادة لتشكيل التشابك سفينة glomeruloid (F، السهم) التي ظلت بقوة VEGFR-2 إيجابية. (BF) 5 ميكرون أقسام المناعي الثابتة المجمدة مع الهيماتوكسيلين مباين. القضبان: A، BF = 20 ميكرون، C = 50 ميكرون.

عرض نسخة أكبر:

• في هذا الإطار
• في نافذة جديدة

• تحميل لشريحة PowerPoint

الرقم 2

أقسام الكلى الماوس أعدت مع المناعية Nanogold الفضي (A) أو بروتوكول المناعي (B) في توطين VEGFR-2 تظهر العلامات معين من الخلايا البطانية الكبيبي (السهام). لا الذهب محسنة الفضة (A) ولا الغلوثانيون (B) مراسل بربط العمليات القدم الخلايا الظهارية الكبيبي أو الصفيحة القاعدية بين الظهارية والخلايا البطانية. (C) لمراقبة (إغفال الأجسام المضادة المحددة، بروتوكول المناعي) لا يظهر أي وسم عمليات الظهارية القدم (EP)، الخلايا البطانية (E) أو الصفائح كل منهما القاعدية (BL) في هذا الكبيبة. نلاحظ أيضا أغشية شق الحفاظ عليها بين العمليات القدم الظهارية (السهم). القضبان: A = 260 نانومتر، B = 210 نانومتر، C = 196 نانومتر.

توطين VEGFR-2 لسفن Hyperpermeable جديد المستحثة في الفئران العادية عن طريق ناقلات الفيروسة الغدانية تعرب عن الفئران VPF / VEGF 164 (الغدة VPF / VEGF)

تم حقن الغدة VPF / VEGF في الجلد أو الساق عضلات الفئران عارية العوز المناعي العادية. أعربت خلايا انسجة Transduced VPF / VEGF، على النحو الذي يحدده في الموقع التهجين (بيترسون وآخرون في الصحافة)، مما أدى إلى استجابة عائية المحلية. كما هو الحال في TA3 / سانت الأورام، وقد تميزت الأوعية الدموية في البداية عن طريق تشكيل لسفن أم كبيرة، يليها تقسيم في وقت لاحق إلى سفن ابنة أصغر من خلال عملية سد الخلايا البطانية (ناجي وآخرون 1995.؛ فنغ آخرون في الصحافة). كما هو مبين في الأرقام 1C-1F، وupregulated VEGFR-2 التعبير لافت للنظر في كل من السفن الأم وابنتها مقارنة مع microvessels الطبيعية المجاورة. ملطخة اللمفاوية البطانة أيضا بقوة لVEGFR 2 (الشكل 1E)، ولكن البطانة بطانة الشرايين لم يكن وصمة عار (الشكل 1F).
بواسطة المجهر الإلكتروني، وأيضا زيادة محددة VEGFR-2 وضع العلامات لافت للنظر في microvessels الغدة-VPF / التي يسببها VEGF مقارنة مع بطانة الاوعية الدموية الدقيقة العادية (الجدول 1). الأغشية اللمعية ومجافي اللمعة البلازما أظهرت العلامات تعادل مع كل من الغلوثانيون وطريقة nanogold (الجدول 1، أرقام 4A و 4B). ومع ذلك، كانت الجانبية البطانية أغشية البلازما خلية في تقاطعات خلية لا المسمى (الشكل 4A). الحويصلات VVO، فجوات، والثغور ربط الحويصلات المجاورة والفجوات وكثيرا ما وصفت. وهكذا، 54٪ من 111 VVOs عدها وصفت (يعني 1.8 جزيئات الذهب / VVO) (أرقام 4E-4G). بالإضافة إلى ذلك، بعض الخلايا البطانية أظهرت توسيع صهاريج من الشبكة الإندوبلازمية الخشنة وهذه، فضلا عن صهاريج حول النواة، وصفت أيضا مع الأجسام المضادة لVEGFR 2 (الشكل 4C). وصفت Caveolae أيضا نادرا، ولكن كانت الحويصلات المغلفة لا (الشكل 4D).

القسم السابق القسم التالي

نقاش

من خلال الاستفادة من بروتوكولين تضمين قبل مختلف عن مناعية قمنا المترجمة VEGFR 2 (FLK-1 / KDR)، واحد من اثنين عالية تقارب مستقبلات التيروزين كيناز VPF / VEGF، لبطانة الأوعية الدموية في ثلاثة مواقع من VPF قوي / التعبير VEGF في الماوس: الكلى العادي، وTA3 / سانت سرطان الثدي، والجلد حقن مع ناقلات الفيروسة الغدانية هندستها لبإفراط الفئران VPF / VEGF 164. ففي هاتين الحالتين، كل من اللمعية ومجافي اللمعة أغشية بطانة الأوعية الدموية الملون بقوة وعلى وجه التحديد، جنبا إلى جنب مع الأغشية وأغشية بعض caveolae وVVOs. لأن تصطف الشعيرات الدموية الكبيبي وperitubular من قبل البطانة رقيقة على غير العادة، لم نتمكن من التمييز اللمعية من تلطيخ مجافي اللمعة في هذه السفن. تم المترجمة VEGFR-2 أيضا على RER موسعة من الخلايا البطانية ومتصلا صهاريج محيط بالنواة من تزايد الخلايا البطانية في مواقع الجلد حقن الغدة-VPF / VEGF. لم يكن لوحظ VEGFR-2 تلطيخ في عدة مواقع أخرى في بطانة الأوعية الدموية، بما في ذلك أغشية البلازما الأفقي في تقاطعات خلية interendothelial، الميتوكوندريا، نوى، والهيئات عديد الحويصلات والهيئات ويبل-بالادي، حفر المغلفة، حويصلات المغلفة، والجسيمات الحالة، والصفائح القاعدية. كما لم ملطخة أغشية Fenestral أجزاء منوفذة من البطانة، الخلايا الظهارية الكبيبي، عمليات أقدامهم، وأغشية شق من أجل VEGFR-2 في الكلى. VEGFR-2-إيجابية كانت الخلايا الظهارية أنبوبي المتاخمة للالشعيرات الدموية peritubular سلبية أيضا. لم تكن ملطخة الخلايا TA3 / سانت الورم لVEGFR-2، ولا كانت الأعصاب أو الكولاجين خلالي في أي من الأنسجة التي تمت دراستها. وكانت الضوابط لكل إجراء immunocytochemical السلبية.
كل من عالية تقارب VPF / VEGF التيروزين كيناز مستقبلات، VEGFR-1 وVEGFR-2، وأعرب في أعداد نسخة منخفضة نسبيا في عدة أنواع من الخلايا البطانية مثقف. التقديرات المنشورة تختلف من 27،000 إلى 150،000 نسخة من VEGFR-2 في الخلية وتيرة VEGFR-1 هو ~10 أضعاف أقل (فايسمان وآخرون 1990.؛ Detmar وآخرون 1995.؛ THIEME وآخرون 1995.). ومع ذلك، لا يعرف الكثير عن وتيرة إما مستقبلات على بطانة الأوعية الدموية في الجسم الحي. على النحو الذي يحدده في الموقع التهجين، يتم التعبير عن كل من مستقبلات بتكلفة منخفضة جدا إلى مستويات غير قابلة للكشف في معظم الأنسجة الطبيعية، باستثناء الكلى (براون وآخرون 1997.؛ دفوراك وآخرون 1999.). ومع ذلك، يتم upregulated التعبير عن كل من مستقبلات لافت للنظر في الاوعية الدموية الدقيقة البطانة المتاخمة لمواقع VPF / VEGF overexpression، أي في الأوعية الدموية المصاحبة للورم (براون وآخرون 1997)، وفي السفن الجديدة التي تشكل استجابة لحقن المحلي من الغدة -vpf / VEGF (بيترسون وآخرون تحت الطبع). البيانات المقدمة هنا هي متسقة مع الملاحظات السابقة في أنه VEGFR-2 غير قابل للكشف من قبل المناعية في الأوعية الدموية الدقيقة في معظم الأنسجة الطبيعية، باستثناء الكلى، ولكن وأعرب بقوة في موقعين VPF / VEGF overexpression (TA3 / سانت سرطان الثدي والجلد مواقع حقن الغدة-VPF / VEGF).

عرض نسخة أكبر:

• في هذا الإطار
• في نافذة جديدة

• تحميل لشريحة PowerPoint

الشكل (3)

الاستعدادات المناعي غير ملوثين توطين VEGFR-2 إلى هياكل البطانية في TA3 / سانت الماوس الثدي غدية بعد 9 أيام من الحقن 1 × 10 6 الخلايا السرطانية في الفضاء SC من الفئران. VEGFR-2 موجود الوزراء البريطانى (على النحو الذي يحدده الإلكترون الكثيفة الغلوثانيون ناتج التفاعل) على اللمعية والأغشية البلازما مجافي اللمعة (AD) وعلى أغشية VVOs (A، C). بعض مكونات حويصلي من VVOs والفردية وصمة عار تماما عن VEGFR caveolae-2 (الأسهم في A، C). ترتبط الحويصلات الأخرى التي تفتح إلى الوحشي (A) أو مجافي اللمعة (C) السطوح مع ودائع واسعة من VEGFR-2 على المتاخمة غشاء البلازما (النصال مفتوحة). بعض caveolae تعلق على أغشية البلازما اللمعية تظهر VEGFR-2 المرتبطة أغشية أن إغلاق هذه الهياكل (الأسهم في B، D). العديد من الهياكل البطانية لا وصمة عار لVEGFR-2. وتشمل هذه الميتوكوندريا (M)، والهيئات ويبل-بالادي (W)، والهيئات عديد الحويصلات (MV)، وأغشية البلازما الجانبية التي تضم تقاطعات بين الخلايا (رأس السهم مغلقة، A). L، التجويف. القضبان: A = 480 نانومتر، B، C = 160 نانومتر؛ D = 80 نانومتر.

عرض هذا الجدول:

• في هذا الإطار
• في نافذة جديدة

• تحميل لشريحة PowerPoint

الجدول 1

سطح كثافة العلامات على الاوعية الدموية الدقيقة البطانة من TA3 / سانت الأورام 9 يوم، 4 أيام الغدة-VPF / السفن الأم الجلد الناجم عن VEGF، والجلد التحكم العادي مع الأجسام المضادة لVEGFR-2؛ خدم محسنة الفضة nanogold كما المراسل. تم قياس اللمعية ومحيطها مجافي اللمعة على حدة ومقارنتها إحصائيا مع -test مان ويتني U

في دراسات سابقة أننا المترجمة VPF / VEGF إلى بطانة الأوعية الدموية الأوعية المرتبطة الورم عن طريق المناعية (دفوراك وآخرون 1991.؛ براون وآخرون 1997.). لأن هذه الخلايا البطانية لم تكن أنفسهم التعبير عن VPF / VEGF، استنتجنا أن تلطيخ لوحظ يمثل ورم يفرز خلايا VPF / VEGF التي كانت متجهة إلى مستقبلاته على بطانة الأوعية الدموية. تمديد هذا النهج إلى مستوى الإلكترون المجهري، وجدنا أن الأجسام المضادة لVPF / VEGF ملطخة بشدة السطوح مجافي اللمعة من ورم بطانة الأوعية الدموية، جنبا إلى جنب مع حويصلات VVO والفجوات. كانت ملطخة أيضا السطوح اللمعية من نفس الخلايا البطانية، ولكن إلى حد أقل بكثير (تشو كونغ وآخرون 1995). عرضنا تفسيران لهذه النتائج. وكان أحد الاحتمالات أن مستقبلات VPF / VEGF وزعت غير متماثلة، مع أكثر كونها موجودة على مجافي اللمعة من على سطح الخلايا البطانية اللمعية. هذا قد يكون له معنى في أنه في معظم الحالات، على سبيل المثال، والأورام، التئام الجروح، والالتهابات، ويفرز VPF / VEGF من خلايا الأنسجة وبالتالي واجه سطح مجافي اللمعة من الاوعية الدموية الدقيقة البطانة قبل سطح اللمعية (براون وآخرون 1992b.، 1997؛ Detmar وآخرون 1994.؛ فافا وآخرون 1994.؛. كوتش وآخرون 1994). من ناحية أخرى، والتعرض للأسطح مجافي اللمعة من بطانة الأوعية الدموية لتركيزات أعلى من VPF / VEGF الذي يفرز محليا من قبل ورم أو خلايا الأنسجة الأخرى يمكن أن تمثل بشكل جيد على قدم المساواة لملاحظاتنا من غير المتماثلة توزيع VPF / VEGF، حتى لو كان عدد متساو من VEGF كانت مستقبلات التي يمكن العثور عليها على اللمعية والسطوح مجافي اللمعة. البيانات المقدمة هنا تشير إلى أنه عندما كان overexpressed VPF / VEGF محليا في الجلد عن طريق الإدارة المحلية من VPF / الهندسة VEGF ناقلات الفيروسة الغدانية، تم العثور على أرقام يعادل VEGFR-2 على اللمعية ومجافي اللمعة أسطح بطانة الأوعية الدموية. وبطبيعة الحال، تقول هذه البيانات شيئا عن كفاءة الإشارات من VPF / VEGF عندما يتفاعل مع المستقبلات التي يتم التخلص منها على اللمعية مقارنة مع سطح البطانية مجافي اللمعة.
توطين VEGFR-2 إلى الأغشية VVO وإلى اللمعية والبلازما مجافي اللمعة أغشية بطانة الأوعية الدموية، ولكن ليس لأغشية البلازما الأفقي في تقاطعات خلية interendothelial، ويتسق مع آليات اقترحنا لزيادة نفاذية الاوعية الدموية الدقيقة التي يسببها VPF / VEGF وسطاء فعال في الأوعية الأخرى (فنغ وآخرون 1996، 1997).باختصار، لقد قدمت دليلا على أن VVOs والهياكل التي غالبا ما تتركز بشكل استراتيجي في مناطق parajunctional من الوريد العادي وورم البطانة، وتوفير الأساسي عبر الممر الخلوي للتسرب من الجزيئات عبر مستمرة بطانة الأوعية الدموية. ردا على وسطاء فعال في الأوعية، وأغشية تفصل الفردية الحويصلات VVO من بعضها البعض ومن معة الأوعية الدموية وablumen مفتوحة، مما يتيح للالمتحولة مرور البطانية من استشفاف من حويصلة واحدة أو فجوة إلى أخرى حتى النهاية عبور حاجز غشائي. يقف هذا الرأي على النقيض من وجهة النظر التقليدية، التي اقترحتها أصلا Majno والزميلة (1969)، ومؤخرا دعا من قبل المختبر ماكدونالد (بالوك وآخرون 1997)، أن وسطاء فعال في الأوعية تعزيز تقلصات الخلايا البطانية التي تسحب الخلايا البطانية المجاورة بعيدا عن بعضها البعض لتوليد الثغرات خلية interendothelial من خلالها البلازما يمكن أن تسرب. لمناقشة مفصلة من الجدل الدائر حول مسارات التي اتخذتها تعميم الجزيئات الكلية في عبور بطانة الأوعية الدموية في استجابة لوساطة فعال في الأوعية، ويشار إلى القراء على عدة مقالات المراجعة الأخيرة (دفوراك وآخرون 1999.؛ فنغ وآخرون 1999a.؛ ماكدونالد وآخرون 1999؛ ميشيل ونيل 1999).

عرض نسخة أكبر:

• في هذا الإطار
• في نافذة جديدة

• تحميل لشريحة PowerPoint

الرقم 4

الاستعدادات المناعية Nanogold الفضة توطين VEGFR-2 إلى هياكل البطانية في مواقع عائية التي يسببها في وقت سابق من 4 أيام في جلد الفئران عارية كل الغدة VPF / VEGF (AE، G) أو في 5 أيام في العضلات (F). التسمية-الموسع الذهب والفضة تشير يرتبط VEGFR-2 مع أغشية البلازما (A، B)، ولكن ليس مع التقاطعات (الأسهم، A)، داخل صهاريج من RER (رأس السهم، C) وصهريج حول النواة، ولكن ليس مع الميتوكوندريا (السهم ، C)، مع caveolae (D) ولكن ليس مع حفر المغلفة أو حويصلات (السهم، D)، ومع VVOs (EG). L، التجويف. القضبان: A = 1.5 ميكرون، B = 140 نانومتر، C = 0.8 ميكرون، D = 140 نانومتر، E = 130 نانومتر، F = 70 نانومتر، G = 80 نانومتر.

وأخيرا، فإنه من الفائدة التي الأوعية اللمفاوية في مواقع حقن الغدة-VPF / VEGF الملون أيضا بقوة مع الأجسام المضادة لVEGFR-2. لم يتم الإبلاغ الأوعية اللمفاوية إلى بإفراط VEGFR-2 في مواقع الورم، ولكن هذا ليس مستغربا لأن عموما لم يعتقد أورام للحث على تشكيل الأوعية اللمفاوية جديدة. بالإضافة إلى ذلك، قد تكون القنوات اللمفاوية الصعب التمييز من الأوعية الدموية الجديدة عن طريق التهجين في الموقع. من ناحية أخرى، ذكرت مفاوية للغشاء مشيمائي الفرخ للتعبير عن VEGFR-2 وVEGFR-3 (يا وآخرون 1997)، ويقال VEGF-C، الذي يتفاعل مع كل من هذه المستقبلات، للحث على تشكيل مفاوية على حد سواء والأوعية الدموية (تساو وآخرون 1998).

القسم السابق القسم التالي

شكر وتقدير

بدعم من الولايات المتحدة الصحة العامة خدمة المعاهد الوطنية للصحة منح AI-33372 (AMD)، CA-50453 (HFD)، CA74951 وCA54168 (PET)، T32 GM07062 (RAB)، وHL-59316، وذلك بتمويل من هوارد هيوز المعهد الطبي (RCM). تلقى AP دعم الزمالة من مؤسسة ينر-جرين، ستوكهولم، السويد.

القسم السابق القسم التالي

المادة ملاحظات

• العنوان الحالي: قسم الأوعية الدموية البيولوجيا، معهد الأمل القلب، سياتل، WA.

• تلقى 1 يوليو 1999.
• قبلت 18 نوفمبر 1999.

القسم السابق

الأدب مستشهد

• ↵
  • Achen مباشرة MG،
  • Jeltsch M،
  • Kukk E،
  • ماكينن T،
  • فيتالي A،
  • ويلكس AF،
  • Alitalo K،
  • مكدس SA

  (1998) الأوعية الدموية عامل النمو البطاني D (VEGF-D) هو يجند لالتيروزين كيناز VEGF مستقبلات 2 (Flk1) وVEGF مستقبلات 3 (Flt4). بروك Natl أكاد العلوم USA 95: 548 - 553
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • بالوك P،
  • هيراتا A،
  • ثورستون G،
  • فوجيوارا T،
  • نيل CR،
  • ميشال CC،
  • ماكدونالدز DM

  (1997) الثغرات البطانية: دوام من تشكيل والإغلاق في الأوردة الملتهبة من الفئران. آم J الفيزيولوجيا 272: L155 - L170
  ميدلاين المادة بالدفع عبر Infotrieve شبكة العلوم جوجل الباحث العلمي
• ↵
  • Berse B،
  • البني LF،
  • فان دي المياه L،
  • دفوراك HF،
  • Senger DR

  (1992) وأعرب عن الأوعية الدموية عامل النفاذية (الأوعية الدموية عامل نمو بطانة) الجينات تفاضلي في الأنسجة الطبيعية، الضامة، والأورام. مول بيول خلية 3: 211 - 220
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • Brekken RA،
  • هوانغ X،
  • الملك SW،
  • ثورب PE

  (1998). الأوعية الدموية عامل النمو البطاني كعلامة للورم البطانة السرطان الدقة 58: عام 1952 - عام 1959
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • البني L،
  • Detmar M،
  • Claffey K،
  • ناجي J،
  • فنغ D،
  • دفوراك A،
  • دفوراك H

  (1997) الأوعية الدموية عامل النفاذية / الأوعية الدموية عامل نمو بطانة: خلوى عائية متعدد الوظائف. في غولدبرغ I، روزين E، محرران. تنظيم الأوعية الدموية بازل، Birkhauser دار نشر، 233 - 269
  منحة جوجل
• ↵
  • البني LF،
  • Berse B،
  • Tognazzi K،
  • Manseau EJ،
  • فان دي المياه L،
  • Senger DR،
  • دفوراك HF،
  • روزين S

  (1992a) الأوعية الدموية عامل النفاذية مرنا والبروتين التعبير في الكلى البشرية. الكلى كثافة العمليات 42: 1457 - 1461
  CROSSREF ميدلاين ترتيب المادة عبر Infotrieve شبكة العلوم جوجل الباحث العلمي
• ↵
  • البني LF،
  • يو KT،
  • Berse B،
  • يو TK،
  • Senger DR،
  • دفوراك HF،
  • فان دي المياه L

  (1992b). التعبير عن عامل نفاذية الأوعية الدموية (الأوعية الدموية عامل نمو بطانة) عن طريق الخلايا الكيراتينية البشرة أثناء التئام الجروح J إكسب ميد 176: 1375 - 1379
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • تساو Y،
  • الزيزفون P،
  • Farnebo J،
  • تساو R،
  • اريكسون A،
  • كومار V،
  • تشي JH،
  • كلايسون-الويلزية L،
  • Alitalo K

  (1998) الأوعية الدموية عامل نمو بطانة الأوعية الدموية C يدفع في الجسم الحي. بروك Natl أكاد العلوم USA 95: 14389 - 14394
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • كلارك DE،
  • سميث SK،
  • شاركي AM،
  • CHARNOCK جونز DS

  (1996) توطين VEGF والتعبير عن مستقبلاته FLT وKDR في المشيمة البشرية طوال فترة الحمل. همهمة Reprod 11: 1090 - 1098
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • دي يونج JS،
  • فان ديست PJ،
  • فان دير فالك P،
  • BAAK JP

  (1998a) التعبير عن عوامل النمو، والنمو العوامل المثبطة، ومستقبلاتها في سرطان الثدي. . I: جرد بحثا عن الحلقات autocrine ونظير الصماوي J Pathol 184: 44 - +52
  CROSSREF ميدلاين ترتيب المادة عبر Infotrieve شبكة العلوم جوجل الباحث العلمي
• ↵
  • دي يونج JS،
  • فان ديست PJ،
  • فان دير فالك P،
  • BAAK JP

  (1998B) التعبير عن عوامل النمو، والعوامل التي تكبح النمو، ومستقبلاتها في سرطان الثدي. ثانيا: الارتباط مع انتشار والأوعية الدموية J Pathol 184: 53 - +57
  CROSSREF ميدلاين ترتيب المادة عبر Infotrieve شبكة العلوم جوجل الباحث العلمي
• ↵
  • دي فريس C،
  • اسكوبيدو JA،
  • أوينو H،
  • Houck K،
  • فيرارا N،
  • وليامز LT

  (1992) المكتب الاتحادي للهجرة مثل التيروزين كيناز، ومستقبلات لعامل نمو الأوعية الدموية البطانية. العلوم 255: 989 - 991
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • Detmar M،
  • البني L،
  • Claffey K،
  • يو KT،
  • كوشر O،
  • جاكمان R،
  • Berse B،
  • دفوراك H

  (1994). overexpression من عامل نفاذية الأوعية الدموية ومستقبلاته في الصدفية J إكسب ميد 180: 1141 - 1146
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • Detmar M،
  • يو KT،
  • ناجي JA،
  • فان دي المياه L،
  • البني LF،
  • Berse B،
  • Elicker BM،
  • يدبيتر S،
  • دفوراك HF

  (1995) Keratinocytederived عامل نفاذية الأوعية الدموية (الأوعية الدموية عامل نمو بطانة) هو mitogen قوية للخلايا البطانية الجلد الاوعية الدموية الدقيقة. J الاستثمار Dermatol 105: +44 - 50
  CROSSREF ميدلاين ترتيب المادة عبر Infotrieve شبكة العلوم جوجل الباحث العلمي
• ↵
  • دفوراك AM،
  • كون S،
  • مورغان ES،
  • الثعلب P،
  • ناجي JA،
  • دفوراك HF

  (1996) وعضية-الحويصلي فجوي (VVO): بنية الخلايا البطانية متميزة توفر طريقا العابر لللتسرب الجزيئات. J كريات بيضاء بيول 59: +100 - 115
  ملخص
• ↵
  • دفوراك HF،
  • ناجي JA،
  • فنغ D،
  • البني LF،
  • دفوراك AM

  (1999). الأوعية الدموية عامل النفاذية / الأوعية الدموية عامل نمو بطانة وأهمية الاوعية الدموية الدقيقة فرط النفوذية في الأوعية الدموية داء الأعلى Microbiol IMMUNOL 237: 97 - 132
  ميدلاين المادة بالدفع عبر Infotrieve شبكة العلوم جوجل الباحث العلمي
• ↵
  • دفوراك HF،
  • Sioussat TM،
  • البني LF،
  • Berse B،
  • ناجي JA،
  • Sotrel A،
  • Manseau EJ،
  • فان دي المياه L،
  • Senger DR

  (1991) توزيع عامل نفاذية الأوعية الدموية (الأوعية الدموية عامل نمو بطانة) في الأورام: تركيز في الأوعية الدموية المصابة. J إكسب ميد 174: 1275 - +1278
  الملخص / الحرة النص الكامل
• ↵
  • فافا R،
  • أولسن N،
  • سبنسر الأخضر G،
  • يو KT،
  • يو TK،
  • Berse B،
  • جاكمان R،
  • Senger D،
  • دفوراك H،
  • البني L

  (1994). الأوعية الدموية عامل النفاذية / عامل نمو بطانة (VPF / VEGF): تراكم والتعبير في سوائل المفاصل والأنسجة البشرية المفاصل الروماتويدي J إكسب ميد 180: 341 - 346
  الملخص / الحرة النص الكامل
• • فنغ D،
  • ناجي JA،
  • دفوراك A،
  • دفوراك HM

  (في الصحافة) مسارات مختلفة من التسرب جزيء ضخم من السفن ورم hyperpermeable. Microvasc الدقة
  منحة جوجل
• ↵
  • فنغ D،
  • ناجي J،
  • هيب J،
  • دفوراك H،
  • دفوراك A

  (1996) العضيات الحويصلي-فجوي وتنظيم نفاذية الوريد إلى macromolceules من قبل عامل الأوعية الدموية النفاذية، الهستامين، والسيروتونين. J إكسب ميد 183: عام

 

[رافت ابراهيم]

 

العوامل الكامنة وراء انفجار السلوك في شبكة مثقف الحصين الخلايا العصبية تتعرض لصفر المغنيسيوم

http://jn.physiology.org/content/91/2/946.short

تم التحقيق العوامل التي تسهم في خفض الناجم عن المغنيسيوم عمل الخلايا العصبية انفجار محتمل في زراعة الخلايا الحصين الابتدائية في ارتفاع وانخفاض كثافة الثقافة. في أبعاده صفر المتوسطة المغنيسيوم الخارجي، الخلايا العصبية الهرمية من ثقافات عالية الكثافة أنتجت العمل من تلقاء أنفسهم رشقات نارية المحتملة المتكررة فرضه على اللاإستقطابات depolarizations لفترات طويلة. قلصت هذه رشقات نارية جزئيا NMDA مستقبلات د -APV. وكشف التحليل الدوائي من مصغرة التيارات بعد المشبكي مثير (EPSCs) 2 المكونات: واحدة حساسة للد -APV وآخر إلى أمبا مستقبلات DNQX. وكانت عناصر متميزة حركيا. وأيد مشاركة مستقبلات NMDA في خفض الأحداث متشابك التي يسببها المغنيسيوم توطين الوحيدات NR1 من مستقبلات NMDA مع قبل المشبكي الحويصلي بروتين synaptophysin. Presynaptically، يتسبب المغنيسيوم الصفر زيادة كبيرة في وتيرة EPSC يعزى على الأرجح إلى زيادة فرط الاستثارية العصبية الناجمة عن انخفاض غشاء تهمة سطح الفرز. وزاد محتوى كمي يعني إلى حد كبير في المغنيسيوم الصفر. لم الخلايا من الثقافات منخفض الكثافة لا يحمل العمل انفجار محتمل في المغنيسيوم الصفر ولكن زاد العرض فعلت تردد EPSC. كانت الخلايا العصبية منخفض الكثافة أقل المناعي synaptophysin ونقاط الاشتباك العصبي النشطة أقل على النحو الذي يحدده FM1-43 التحليل. وتبين هذه النتائج أن هناك عوامل متعددة في انفجار الشبكة. زيادة احتمال إطلاق سراح الارسال presynaptically، وتعزيز NMDA مستقبلات بوساطة استثارة postsynaptically، ومدى الترابط الخلايا العصبية يساهم في بدء وصيانة مرتفعة استثارة الشبكة.
مقدمة

وتوسط العصبي مثير سريع في قرن آمون المقام الأول الغلوتامات بناء على 3 أنواع من المستقبلات ionotropic اسمه لمنبهات المفضل لديهم: kainate، α-الأمينية-3-هيدروكسي-5-ميثيل-4-isoxazolepropionic حمض (أمبا)، وN -methyl - د -aspartate (NMDA) (Dingledine وآخرون 1990.). كل 3 أنواع من مستقبلات تتضمن القنوات الأيونية التي عند تفعيلها، تصبح الموجبة قابلة للاختراق. يتم الاحتفاظ مثير التفاعلات متشابك glutamatergic في المختبر في التحضيرات للشريحة الحصين (بارفيت وماديسون 1993) والهرمية ثقافة الخلية. الثقافات العصبية قرن آمون إنشاء شبكات التهاب الأعصاب كثيفة مع جهات الاتصال متشابك متعددة (بانكر وكوان 1977؛ فليتشر وآخرون 1991.؛ حوش وDingledine 1986؛ مولر وسيفرت 1982). وأعرب متزايد أمبا ومستقبلات NMDA والمترجمة إلى مواقع متشابك مع مرور الوقت (Bekkers وستيفنز 1989؛ راو وآخرون 1998.). وقد عززت هذه الدراسات التشريحية التي كتبها النتائج الفسيولوجية سليمة وظيفيا التفاعلات متشابك مثير (كامينغز وآخرون 1996.، ويلكوكس وآخرون 1994.).
على مدى عدة سنوات، أدى دراسة النواحي الفسيولوجية والمرضية للالعصبي glutamatergic في تطوير التقنيات التي يمكن التضمين مستوى استثارة التفاعلات متشابك. واحدة من هذه التقنية تنطوي على تلاعب من الأيونات ثنائية التكافؤ. وقد تم توثيق دور الكالسيوم في الافراج عن ناقل عصبي exocytotic جيدا (انظر Poage لوMeriney 2002 لاستعراض حديث). وقد استخدمت انخفاض الكالسيوم خارج الخلية لسنوات عديدة بوصفها أداة موحدة لمنع انتقال متشابك. المغنيسيوم أيضا اتسم الآثار على التفاعلات متشابك. دودج وRahamimoff (1967 أظهرت) أولا ان الافراج كمي عند تقاطع الضفدع العصبي العضلي انخفض بشكل حاد حيث ارتفع المغنيسيوم 2+ التركيز. في قرن آمون، وقد تم العثور على المغنيسيوم مرتفع للتخفيف أو إلغاء اللاإستقطابات depolarizations العصبية طويلة والعمل و synchonized رشقات نارية المحتملة رمزا للنشاط صرعي (Schwartzkroin والأمير 1978). على العكس، والحد من المغنيسيوم أقل من المستويات الفسيولوجية تحرض على تعزيز excitabilty في كل شريحة الحصين (والثر وآخرون 1986) والثقافات (Sombati وديلورنزو 1995).
وقد يفترض آلية تخفيض تعزيز المغنيسيوم العصبي مثير يجب أن تكون متصلة الحصار أيونات 'الفسيولوجية للقنوات مستقبلات NMDA. منذ فترة طويلة من المسلم به أن يوفر المغنيسيوم الفسيولوجية والفراغية الحصار التي تعتمد على التيار الكهربائي من الأيونات الموجبة المسام قابلة للاختراق من المستقبلات NMDA وبالتالي يجعلها غير نشطة إلى حد كبير في إمكانات غشاء العادية (Coan وCollingridge 1985؛ Collingridge وآخرون عام 1983.؛ Hablitz وLangmoen 1986؛ ماير ويستبروك 1984). وقد أثبتت العديد من الدراسات أن تزامن نشاط الخلايا العصبية عفوية الناجم عن القضاء على المغنيسيوم خارج الخلية يتم تخفيض أو إلغاء من قبل NMDA مستقبلات (Albowitz وآخرون 1997.؛ Coan وCollingridge 1987؛ Collingridge وآخرون 1988؛. Gulyas-كوفاتش وآخرون 2002.؛ جوتيريز وآخرون آل 1999.؛ تانكريدي وآخرون 1990.). وأشارت هذه الدراسات أن زيادة excitabilty الناجم عن انخفاض المغنيسيوم في المقام الأول ظاهرة بعد المشبكي، والناجمة عن زيادة تدفق depolarizing الأيونات، معظمهم من الكالسيوم من خلال قنوات مستقبلات NMDA.
وأشارت دراسات أخرى آليات مثير الإضافية المرتبطة تخفيض المغنيسيوم خارج الخلية. انخفاض المغنيسيوم (مقابل إزالة) يسببها الردود مثير المعزز في المنطقة CA1 من الحصين التي لم تنقضها NMDA مستقبلات (هامون وآخرون 1987). دراسة متأنية من قبل مودي وزملاؤه (1987 اقترحت) أن الحد من المغنيسيوم قد ينتج انخفاض في الحقل الكهربائي عبر الغشاء الخلايا العصبية التي كتبها انخفاض سطح تهمة التسبب في فحص ما هو، في جوهره، وهو الاستقطاب الغشاء.
ومع ذلك، فقد أشارت دراسات النمذجة في الحصين أن استثارة المعززة، رغم أنه ضروري، ليس كافيا لحدوث انفجار في شبكة من الخلايا العصبية الهرمية. أظهرت محاكاة شبكة نموذجية من انفجار الحصين الذي يمكن أن يحدث انفجار، حتى في وجود تثبيط الخلايا العصبية، إلا إذا الاتصال بين الخلايا العصبية في الدائرة كثيفة على نحو كاف. الربط المنخفض يمنع تطوير انفجار (تروب وآخرون 1984، 1987).
وقد استخدمنا تقنيات الكهربية وimmunocytochemical لدراسة العوامل التي تؤثر في انخفاض انفجار الناجم عن المغنيسيوم في شبكات مثقف الخلايا العصبية الهرمية قرن آمون. على وجه التحديد، سعينا إلى تحديد مساهمات العمليات قبل المشبكي وبعد المشبكي لتعزيز استثارة الشبكة واختبار الفرضيات نموذج يحركها الربط الكافي اللازم لانفجار متزامن.

طرق

وجاءت معاملة الحيوانات المبادئ التوجيهية التي وضعتها جامعة فيرجينيا للعلوم الصحية مركز البحوث الحيوانية اللجنة. تم بذل كل الجهود للحد من التوتر الحيوان وعدم الراحة.
ثقافات الحصين

تم إعداد الخلايا العصبية cocultures الحصين / الدبقية وفقا لطريقة Goslin وآخرون. (1998). وكانت الخلايا العصبية والخلايا الدبقية مثقف على ثم الجمع بين الأسطح منفصلة لتشكيل الأنسجة الثقافة "ساندويتش". يسمح هذا النهج إعداد كثافة منخفضة نسبيا الثقافات قرن آمون في حين لا يزال يسمح بالوصول من الخلايا العصبية الحصين للمواد عصبية المشتقة من الخلايا الدبقية. ويلخص كل جزء من التحضير.

إعداد coverslips

وضعت في حامض النيتريك 10٪ لل≥18 ح؛ coverslips FisherBrand (25 ملم 12-545-86-1D). وثم تشطف Coverslips في 6 تغييرات من الماء المقطر (20 دقيقة لكل شطف) وتعقيمها مع الحرارة الجافة (225 درجة لمدة 6 ساعات). بعد التبريد، والمغلفة coverslips مع بولي ل -lysine (1 ملغ / مل في المخزن بورات)، وضعت في 37 درجة الحاضنة بين عشية وضحاها، ثم تشطف مرتين بالماء المقطر المعقم (30 دقيقة لكل منهما شطف). وكانت Coverslips من الطبقات مع الحد الأدنى الضروري المتوسطة (MEM)، بالإضافة إلى 10٪ مصل الحصان (HS: انظر Goslin آخرون للمكونات مفصلة) وضعت في 37 درجة الحاضنة. MEM جديدة / تم إضافة HS يوم من إجراء coculture (انظر النص التالي).

إعداد ثقافة الدبقية الأساسي

تم إعداد مزارع الخلايا الدبقية 10 أيام قبل coculturing مع الخلايا العصبية قرن آمون. قبل العزلة الدبقية، طبقت 3 قطرات من معقم، البارافين ذاب في القمم من مثلث متساوي الأضلاع في عدة العقيمة 60 ملم أطباق الأنسجة الثقافة. قدم البارافين التباعد الضروري للحفاظ لل coverslips التي تحتوي على الخلايا العصبية قرن آمون من الاتصال مباشرة الخلايا الدبقية خلال coculturing (انظر النص التالي). بدلا من ذلك، تم تقديم تباعد عن طريق خفض longitidinally تفلون O-خواتم (عرض 3 مم، 22 مم ID؛ أجزاء صغيرة، ميامي البحيرات، FL). في غطاء تدفق الصفحي، تم قطع رأس الأطفال حديثي الولادة الفئران الوليدة سبراغ داولي بعد وضعه على الجليد لمدة 2-3 دقيقة. أزيلت العقول في محلول ملحي متوازن الباردة HEPES مخزنة هانك (HEPES / HBSS). تم عزل نصفي الكرة المخية وإزالة السحايا. تمت إزالة الزائدة HEPES / HBSS والأنسجة المفروم ناعما كما ممكن مع مقص. وضعت الأنسجة في 12 مل HEPES جديدة / HBSS التي أضيفت 1.5 مل التربسين 2.5٪ و 1.5 مل الدناز (1٪). تم تحضين الأنسجة عند 37 درجة لمدة 15 دقيقة مع التحريك المستمر بطيئة السرعة. تم تمرير طاف من خلال معقمة شبكة من النايلون (215 م)، وتضعف مع حجم مساو من 10٪ HS في MEM. تم طرد تعليق خلية في 800-1،000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. ومعلق الكريات في 10 مل MEM / 10٪ HS. احصي الخلايا مع عدادة الكريات. كان العائد عموما 6 × 10 6 -1 × 10 7 خلايا في الدماغ. وكانت مخففة الخلايا لحوالي 30000 خلية / مل في 10٪ HS / MEM. وضعت 3 مل في كل عدة 60 ملم أطباق الأنسجة الثقافة. تم المتوسطة استبدال تماما اليوم بعد الطلاء. بعد ذلك، تم استبدال المتوسط ​​كل 4 أيام مع 10٪ HS / MEM.

الحصين إعداد ثقافة العصبية

تم إعداد الثقافات من E-18 سبراغ داولي أجنة الفئران. كانت مقطوعة الرأس الأجنة والعقول إزالة ووضعها في HEPESHBSS. تم إزالة الحصين تحت المجهر تشريح وجمع في طبق بتري صغيرة في HEPES-HBSS. وضعت الحصين من القمامة واحدة في أنبوب الطرد المركزي 15 مل. ويستنشق HEPES-HBSS قبالة واستبدالها مع 5 مل من 0.25٪ التربسين. وقد حضنت إعداد عند 37 درجة لمدة 15 دقيقة. تم استبدال الحل التربسين مع 5 مل HEPES-HBSS. الشطف مع HEPES-HBSS تكررت مرتين أكثر في 5 دقائق فترات. تم triturated الحصين حتى لا تظل أجزاء من الأنسجة. وتم تحديد كثافة الخلايا مع عدادة الكريات وكان عادة حوالي 5 × 10 5 خلايا / الحصين. أعدت اثنين من كثافة الخلايا العصبية قرن آمون. للثقافات عالية الكثافة، وأضيفت 100،000 الخلايا لكل من الأطباق التي تحتوي لل coverslips المغلفة متعدد الليزين معدة مسبقا. للثقافات منخفض الكثافة، وأضيفت 10،000 الخلايا. بعد 3-4 ساعات، تم نقل coverslips إلى أطباق تحتوي على الطبقات الوحيدة الخلية الدبقية في المصل خالية MEM مع N2 الملحق. تحولت Coverslips ذلك أن الخلايا العصبية قرن آمون واجهت الخلايا الدبقية ووضعها على البارافين أو تفلون الفواصل. كان تباعد حوالي 2 ملم بين طبقات الخلايا. تمت إضافة N2 ملحق (1 مل) كل 10 يوما.

الكهربية

وتم سحب أقطاب التصحيح من 1.5 مم (OD) × 1.1 مم بال micropipettes (ID) البورسليكات على الأفقي يلهب براون مسرى مكروي مجتذب (نموذج P-97، الآلات سوتر) باستخدام بروتوكول سحب 2-المرحلة. وكانت المقاومة القطب 5-8 MΩ. امتلأت نصائح القطب مع الحل تسجيل الأسهم الداخلي يتكون من (مم) CSCL 153.3، MgCl 2 1.0، 10.0 HEPES، وجلايكول الإثيلين مكرر (الأثير β-aminoethyl) N، N، N '، N' حمض -tetraacetic ( EGTA) 5.0، ودرجة الحموضة 7.3 (مع العقيمة التي تمت تصفيتها CsOH)، الأسمولية 275-280 الميلي أسمول. وكان الحل الداخلي العقيمة التي تمت تصفيتها قبل الاستخدام. الحل الكهربائي عرقوب احتوى على تجديد ATP يتألف من 3 ملي ATP (الصوديوم الملح)، 19 ملي فسفوكرياتين، و 50 U / مل فسفوكيناز الكرياتين.
قبل التجريب الكهربية، وإزالة coverslips تحتوي على الخلايا العصبية قرن آمون من مستنبت، ووضعها في 30 × 10 ملم صحن الثقافة البوليسترين تحتوي على تسجيل خارجي يتكون من كلوريد الصوديوم (142)، CaCl 2 (1.0)، CSCL (8.1)، MgCl 2 (2.1 ) والجلوكوز (10.0)، وHEPES (10.0)، ودرجة الحموضة 7.4 (هيدروكسيد الصوديوم). تم تعديل الأسمولية إلى 320-325 الميلي أسمول مع السكروز. وكان الحل تسجيل خارجي العقيمة التي تمت تصفيتها قبل الاستخدام. لاسميا الصفر التجارب المغنيسيوم، MgCl 2 محله تركيز يعادل osmotically من كلوريد الصوديوم. تجارب في شرائح قرن آمون قد تورط السيزيوم الخارجي مرتفعة في تحريض عفوية النشاط انفجار المتكررة في CA3 والتلفيف المسنن ولكن فقط في وجود الكادميوم مانع قناة الكالسيوم (شيونغ وسترينجر 2001). لتحديد ما إذا كان السيزيوم مرتفعة في حل خارجي لدينا أسهم في انفجار الخلايا العصبية في الثقافة وتكرار حل خارجي يستخدم من قبل Sombati وديلورنزو (1995) في دراسة النشاط الكهربية للخلايا العصبية مثقف يتعرض إلى الصفر المغنيسيوم، بوكل (2.5 ملم) محل CSCL في بعض التجارب. وزادت كلوريد الصوديوم إلى 145 ملم في هذه التجارب. لاحظنا أي اختلاف في وتيرة انفجار المتكررة في هذه الحلول الخارجية (2)؛ تم الجمع بين النتائج التي تم الحصول عليها في ظل الظروف 2. كان ينظر إلى الخلايا العصبية مثقف على مرحلة مجهر نيكون مقلوب. تم ربطه الميكروية مع مكبر للصوت من قبل أكسون الآلات CV-4 headstage ومناورة في موضع التسجيل مع PCS 5000 سلسلة micromanipulator (بيرلي الآلات، الصيادون، NY).
وقدمت تسجيلات خلية كاملة في درجة حرارة الغرفة مع Axopatch 1-D المشبك التصحيح مكبر للصوت (أكسون الآلات، يونيون سيتي، كاليفورنيا) والمنخفضة تمرير تصفيتها في 2 كيلو هرتز مع 8 القطب بسل تصفية قبل الرقمنة. وسجلت البيانات إلى جهاز كمبيوتر شخصي مع Axoscope البيانات 7.0 برنامج الحصول باستخدام واجهة Digidata 1200 (الصكوك أكسون). تم ترقيم تسجيلات الجهد المشبك التيارات بعد المشبكي مثير (EPSCs) في 10-20 هرتز، تم رقمنة تسجيلات المشبك الحالي من إمكانات غشاء الخلايا العصبية في 20 كيلوهرتز. وقد تم تحليل EPSCs باستخدام برنامج MiniAnalysis (Synaptosoft، ديكاتور، GA).

مناعية

كانت ثابتة Coverslips تستخدم لNMDA مستقبلات الوحيدات NR1، أمبا مستقبلات الوحيدات GluR1، أو synaptophysin المناعية مع بارافورمالدهيد 4٪ (PFA) / 4٪ السكروز في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لمدة 20-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ذكرت راو وكريج (1998) أن NR1 مستقبلات الوحيدات تلطيخ المطلوب الميثانول التثبيت. ومع ذلك، كنا قادرين على تحقيق تلطيخ مرضية مع PFA. تم permeabilized الخلايا العصبية مع 0.25٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق. تم غسلها Coverslips مرتين مع PBS، سدت مع 10٪ مصل الأرنب في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة، ويتعرض لالأجسام المضادة الأولية في 3٪ مصل الأرنب في برنامج تلفزيوني.
تم استخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الماوس 54.1 إلى NR1 (PharMingen، سان دييغو، CA) بتركيز 2 ميكروغرام / مل والأرنب بولكلونل الأجسام المضادة لGluR1 (Chemicon الدولية، تيميكولا، كاليفورنيا) كانت تستخدم في 1 ميكروغرام / مل. إما الماوس مكافحة synaptophysin (Chemicon؛ لاستخدامها في التجارب المزدوج وضع العلامات مع GluR1) أو أرنب مكافحة synaptophysin (مختبرات Zymed، سان فرانسيسكو، CA، للاستخدام مع NR1) كانت تستخدم بتركيز 2.5 ميكروغرام / مل.
وتصور الأجسام المضادة الأولية مع الأجسام المضادة تألقي مترافق الثانوية (3-4 ميكروغرام / مل، المسابر الجزيئية، يوجين، OR). كانت fluorochromes المستخدمة اليكسا فلور 488 (GluR1) واليكسا فلور 594 (NR1). وصفت Synaptophysin الأجسام المضادة الأولية مع الأجسام المضادة الثانوية مترافق إما اليكسا فلور 488 أو فلور اليكسا 594. Coverslips تم تركيبه في الجلسرين. تم القبض على الصور الفلورسنت على نيكون مقلوب الكسوف TE 200 المجهر مزودة بكاميرا رقمية CF Photometrics CoolSnap باستخدام الهدف غمر 40 × النفط (1.0 الفتحة العددية). تم القبض على الصور باستخدام برنامج التصوير Metamorph وإعدادها للطباعة مع AdobePhotoshop 6.0.
لرؤية خلية كاملة، امتلأت الخلايا العصبية لأول مرة مع البيوتين (مختبرات المتجهات؛ 0.5 ملغ / مل في حل ماصة الداخلية)، ثم حضنت مع strepatavidin مترافق مع فلور اليكسا 350 (المسابر الجزيئية).

FM1-43 التصور

تم تحميل الخلايا عن طريق التعرض ل10 ملي البوتاسيوم حل خارجي (الأسمولية التي تحتفظ بها انخفاض يصاحب ذلك في تركيز الصوديوم) مع 8 ميكرومتر FM1-43 لمدة 10 دقيقة. والخلايا ثم يغسل 3-4 مرات مع الحل الخارجي العادي. لdestaining والتصور، تعرضت الخلايا لاسميا صفر المغنيسيوم الخارجية.

تحليل البيانات

وتعرض البيانات كوسيلة + SE ما لم يذكر خلاف ذلك في النص.

النتائج

خصائص الخلايا العصبية

حدد الخلايا العصبية الهرمية شكليا على شكل في ثقافة درست 13-17 يوما من قبل بأكملها تقنية خلية التصحيح، المشبك. في التجارب الأولية، وقد شغل في الخلايا الهرمية وعملياتها مع biocytin خلال تسجيل الكهربية وتصور مع صبغة الفلورسنت بعد التثبيت. ظهرت الكبيرة والتشعبات ذات القطر الصغير من قمة وقاعدة من الخلايا العصبية الهرمية وتتفرع إلى التشعبات الثانوية والثالثية (الشكل 1). جذع شجيري معقدة من الخلايا العصبية الهرمية امتدت عدة مئات من ميكرون من سوما الخلية. وقد أظهرت دراسات سابقة أن interneurons nonpyramidal هم شكليا الخلايا العصبية بين القطبين أو متعدد الأقطاب المتميزة التي الخلية سوما البقع بشكل مكثف مع الاصطناعية حمض الغاما γ انزيم كربوكسيل حمض الجلوتاميك (GAD؛ Esclapez وهاوزر 1999). تم فحص خصائص الغشاء السلبية والإيجابية من هذه الخلايا العصبية الهرمية في وضع المشبك الحالي في المحتوية على المغنيسيوم الوسط الخارجي لإثبات أن خصائص الخلايا العصبية تتفق مع تلك التي ل، خلايا قابلة للحياة صحية. وكان يعني غشاء المحتملة الراحة -58.3 ± 2.4 بالسيارات (ن = 23)، في اتفاق جيد مع الدراسات السابقة على الخلايا العصبية الهرمية مثقف (كولتر وآخرون 1992).

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 1.

الحصين الهرمية الخلايا العصبية مثقف لمدة 16 يوما. وقد شغل الخلية مع البيوتين عن طريق تسجيل ماصة ثم حضنت مع streptavidin مترافق إلى التحقيق الفلورسنت (انظر طرق). ملاحظة الخطوط العريضة لسوما الخلية متعدد الأقطاب في يمين الوسط الشديد من الصورة.

وقد تم قياس مقاومة المدخلات العصبية في عينة من الخلايا (ن = 7) عن طريق حقن 2-الصورة البقول الحالية (-1.0 إلى 0.3 غ بزيادات 0.1 غ). أعطيت R في قبل المنحدر من مؤامرة التيار مقابل تغيير الجهد (مانجان وبيرترام 1998). وR في كان 71.3 ± 4.2 MS، وهي نسبة أعلى من تلك التي سجلت في الخلايا العصبية الهرمية مع الميكروية حادة في دراساتنا السابقة (مانجان وبيرترام 1998؛ مانجان وLothman 1996؛. Rempe وآخرون 1995)، ولكن في اتفاق مع دراسات أخرى باستخدام أقطاب التصحيح (Spruston وجونستون 1992؛. Spruston وآخرون 1994). وتم تحديد أيضا العمل المحتملة (ا ف ب) الخصائص كمؤشر النشطة، التي تعتمد على الجهد وظيفة الغشاء. وقد تباينت غشاء المحتملة عن طريق الحقن الحالي. وكانت عتبة AP اطلاق -59.4 ± 2.2 بالسيارات (ن = 24). عقد غشاء المحتملة في -58 بالسيارات عن طريق الحقن الحالي (عادة <100 باسكال) أسفرت في بعض الأحيان الجزائرية تجاوزت عفوية مع السعة 77.2 ± 3.4 بالسيارات. وكانت هذه الخصائص AP وفقا للنتائج السابقة (Rempe وآخرون 1995). نادرا (4 من 36 الخلايا العصبية اختبار)، أدى الاستقطاب (حوالي -50 بالسيارات) في العمل رشقات نارية المحتملة لفترات طويلة. في 3/4 الخلايا، وكانت هذه رشقات نارية لا المتكررة؛ في انفجار خلية واحدة واصل مع فاصل interburst عدم انتظام لمدة الاستقطاب (حوالي 3 دقائق).
في أبعاده المغنيسيوم 2+ خالية من الوسط الخارجي (0 [مغ 2+] س)، معظم الخلايا عرضت انفجار المستدام المتكررة التي تتكون من عدة (≥) 3 نقاط وصول مع فترات interspike من <200 مللي فرضه على فترات طويلة (500-2،000 مللي ثانية) الاستقطاب (الشكل 2 B). واقترح قطعتين من الأدلة على أن ارتفاع انفجار كان بدلا من خاصية الخلايا العصبية الذاتية يحركها الشبكة. أولا، كان نشاط مماثل غائبا عن الخلايا في الثقافات منخفض الكثافة (انظر الشكل 7 أدناه). ثانيا، فرط لتصل الى -90 بالسيارات التي كتبها DC حقن الحالي في كثير من الأحيان لم إنهاء انفجار. وقع انفجار في 38/43 الخلايا فحص ويستمر لمدة تسجيل (≤20 دقيقة). التعرض ل0 [مغ 2+] س لم يغير كثيرا يستريح غشاء المحتملة (RMP) (-57.6 ± 3.1 بالسيارات، وقعت فترة من 2-10 ق بين رشقات نارية في جميع الخلايا، تم احتساب متوسط ​​RMP من هذا الفاصل الزمني interburst) ، R في (67.7 ± 3.3 MS، ن = 7)، أو العمل ارتفاع محتمل سجلت في إمكانية عقد -58 بالسيارات (79.6 ± 2.1 بالسيارات، ن = 21). ومع ذلك، فقد تحول عتبة اطلاق AP بشكل كبير في -77.7 ± 4.5 بالسيارات بعد 0 [مغ 2+] س التعرض. بالإضافة إلى ذلك، أدت المعاملة في نمط تغير من AP اطلاق النار. بدلا من التي تحدث بشكل فردي المسامير، الجزائرية في 0 [مغ 2+] س تميل إلى الجماعة في العهود تكرار منفصلة (الشكل 2 B). انفجار السلوك في 0 [مغ 2+] س يتناقض مع إجراءات إطلاق محتمل في المجموعة الاستشارية للألغام العادية حيث لم 32/36 الخلايا تنفجر (الشكل 2 A).

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 2.

. التسجيلات المشبك الحالية من مثقف الخلايا العصبية الهرمية قرن آمون في وضعها الطبيعي وأبعاده صفر المغنيسيوم الخارجي (0 [مغ 2+] س): تسجيل من خلية هرمي 16 يوما في الثقافة. الوسط الخارجي يتضمن 2.1 ملي المغنيسيوم 2+. عقدت غشاء المحتملة في -58 بالسيارات التي كتبها DC حقن الحالي B: التسجيل من الخلايا العصبية 15 يوما في الثقافة. تم استبدال المغنيسيوم في الحل الخارجي من قبل equiosmolar نا +. عقدت غشاء المحتملة في -58 بالسيارات C: الصيدلة الخلايا الهرمية انفجار في 0 [مغ 2+] س تتبع أعلى: التسجيل من الخلايا الهرمية 14 يوما في الثقافة تتعرض ل0 [مغ 2+] س أثر الأوسط: تسجيل من نفس الخلية 25 دقيقة بعد إضافة 40 ميكرومتر د -APV، وهي مستقبلات NMDA. . انفجار النشاط الموهن ولكن لم تلغ أثر القول: النشاط مثير الخلايا العصبية توقف 15 دقيقة بعد مزيد من إضافة 20 ميكرومتر DNQX، وهو خصم أمبا مستقبلات. التسجيلات في A، B، C وهي من خلايا مختلفة.

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 7.

الخلية التسجيلات الحالية والجهد المشبك كلها، في الحالات العادية و0 [مغ 2+] س، من الخلايا العصبية الهرمية الحصين مثقف في منخفض الكثافة. 0 [مغ 2+] س العلاج لم تسفر عن العمل انفجار محتمل (A)؛ لم تردد sEPSC تظهر زيادة طفيفة، ولكنها مهمة (B) C: جزء التراكمي فترة interevent الرسم البياني للخلايا هو مبين في B. 0 [مغ 2+] أسفرت س الشرط في تغيير كبير في توزيع الفاصل (كولموجوروف-سميرنوف 2 عينة الاختبار؛ د = 0.31، P = 0.04). كانت طبيعية و0 [مغ 2+] س تسجيلات من خلايا مختلفة.

دور مستقبلات NMDA

إزالة المغنيسيوم يعزز النشاط مثير في الشبكات العصبية من خلال إلغاء الحصار التي تعتمد على الجهد NMDA مستقبلات الغلوتامات من نوع (آشر وآخرون 1988.؛. مودي وآخرون 1988؛ تانكريدي وآخرون 1988.؛ يستبروك 1994). نحن اختبار ما إذا كان 0 [مغ 2+] س يسببها رشقات نارية يمكن أن يكون قد تم حظره من قبل NMDA مستقبلات حمض د -2-الأمينية-5-phosphonovaleric (د -APV؛ الشكل 2 C). فالعصبون 17 DIV عرضت العمل من تلقاء أنفسهم رشقات نارية المحتملة المتكررة في 0 [مغ 2+] س حل خارجي. إضافة د -APV (40 ميكرومتر) خفضت متوسط ​​عدد إمكانات العمل في انفجار وزيادة الفاصل الزمني interburst ولكنهم لم يعودوا الخلية لاطلاق النار متقطعا من إمكانات العمل واحدة لوحظ في المغنيسيوم العادي. فقط على مزيد إضافة dinitroquinoxaline أمبا مستقبلات مانع (DNQX، و 20 ميكرومتر) كان الانفجار السلوك القضاء عليها. وتكررت هذه الملاحظة في 14 خلايا من 8 الاستعدادات ثقافة منفصلة (كل ثقافة المحضرة من الأجنة مختلفة). في المغنيسيوم الخارجي العادي، ألغيت مدفوعة synaptically عمل اطلاق محتمل من قبل DNQX وحده (لا تظهر البيانات)؛ ما زالت خلايا قادرة على ارتفاعه إذا استقطابها من قبل DC حقن الحالي. وأظهرت هذه الدراسات أن APV فقط الموهن جزئيا 0 [مغ 2+] س يسببها الانفجار.
وكان أحد التفسيرات المحتملة لفشل د -APV لمنع تماما 0 [مغ 2+] س يسببها رشقات نارية أن مستقبلات NMDA لم تكن موجودة في نقاط الاشتباك العصبي في الخلايا العصبية الحصين مثقف وهذه لم تشارك في النقل العصبي مثير. بالتناوب، 40 ميكرومتر د -APV قد يكون insuffi-cient لمنع التيارات NMDA مستقبلات في 0 [مغ 2+] س الشرط. وأخيرا، فمن الممكن أن آليات متعددة تعزز انتقال متشابك في 0 [مغ 2+] س المتوسطة. لتقييم هذه الإمكانيات، وأجريت تسجيلات الجهد المشبك من العفوية التيارات بعد المشبكي مثير (sEPSCs) في -50 بالسيارات في وجود 5 ميكرومتر bicuculline methiodide لمنع GABA A الأحداث بوساطة مستقبلات. في بعض التجارب، تم استخدام 1 ميكرومتر سم الأسماك الرباعية الأسنان (TTX) للقضاء على إطلاق سراح عفوية حويصلات متعددة العصبي وإنتاج واحدة أحداث كمي بعد المشبكي [أي EPSCs مصغرة (mEPSCs).]
الرقم 3 يظهر mEPSC متوسط ​​يتكون من ≥1،000 الأحداث من 10 الخلايا تحت 0 [مغ 2+] س الظروف. كان الحدث متوسط ​​ومتوسط ​​10-90٪ زمن صعود 2.2 ± 0.3 مللي وتسوس biexponential مع τ 1 و τ 2 من 16.2 ± 1.4 و 80.8 ± 3.2 مللي ثانية، على التوالي. بعد إضافة د -APV (3 الشكل، السهم العلوي)، الخلايا العصبية المنتجة mEPSCs مع ارتفاع متوسط ​​قدره 1.2 ± 0.3 مللي وتسوس monoexponential مع τ 33.3 ± 2.2 مللي ثانية (5 خلايا، 612 الأحداث). إذا، بدلا من عرقلة NMDA الأحداث بوساطة مستقبلات، تعرض خلايا TTX المعاملة إلى أمبا مستقبلات مانع DNQX (الشكل 3، السهم السفلي)، وكانت mEPSCs الناتجة أبطأ بكثير حركيا، مع فترة ارتفاع 4.4 ± 0.9 مللي و تسوس τ من 64.1 ± 3.7 مللي ثانية (373 الأحداث، 5 خلايا). وأشارت هذه التجارب أن مستقبلات NMDA كانت موجودة ونشطة في نقاط الاشتباك العصبي في 0 [مغ 2+] س الشرط. واقترحوا أيضا أن جميع التيارات بوساطة مستقبلات NMDA تم حظره من قبل 40 ميكرومتر د -APV.

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 3.

الصيدلة من مصغرة التيارات بعد المشبكي مثير (mEPSCs) في الخلايا الهرمية تتعرض ل0 [مغ 2+] يا أقصى اليسار التتبع: كان متوسط ​​mEPSC مع حركية تسوس biexponential. التعرض لد -APV (السهم العلوي) أنتج mEPSC متوسط ​​مع أسرع 10-90٪ الوقت ارتفاع (1.2 ± 0.3 مللي ثانية مقابل 2.2 ± 0.3 مللي ثانية) والاضمحلال monoexponential مع تسوس τ 33.3 ± 2.2 مللي ثانية. إذا تعرضت لDNQX (بدلا من د -APV؛ السهم السفلي)، وmEPSCs مما أدى لديهم ارتفاع أبطأ بكثير (4.4 ± 0.9 مللي ثانية) وتسوس τ (64.1 ± 3.7 مللي ثانية).

أكدنا أيضا وجود مستقبلات NMDA في نقاط الاشتباك العصبي في الخلايا العصبية الهرمية في الثقافة في 13-17 أيام عن طريق تلطيخ المناعى. تم فحص تلزم NMDA مستقبلات الوحيدات NR1 فيما يتعلق قبل المشبكي الحويصلي بروتين synaptophysin. في الخلية هو موضح في الشكل. 4، وكانت مجموعات synaptophysin (مخضر) واضحة في جميع العمليات الخلوية داخل مجال الرؤية (من اليسار لوحات، لوحة أسفل هو وجهة نظر تضخم أعلى من المنطقة محاصر في لوحة العليا). كان NR1 تلطيخ أكثر منفصلة (أحمر مضان) ولكن كان على نطاق واسع في هذه الخلايا العصبية (لوحات المتوسطة). وكشف غطاء من synaptophysin وNR1 مضان أن معظم مجموعات NR1 colocalized مع synaptophysin (لوحات اليمين، مجموعات البرتقال)، مما يشير إلى موضع بعد المشبكي لمستقبلات NMDA في هذه المرحلة من تطور الخلايا العصبية.

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 4.

الخلايا العصبية الحصين 14 يوما في الثقافة المسمى مع الأجسام المضادة مناعي لsynaptophysin (الخضراء) والوحيدات NR1 من مستقبلات NMDA. وضع العلامات من كل هو الأقرب واسعة والقاصي إلى خلايا الجسم داخل مجال الرؤية (الصف العلوي، واليسار والوسط). تراكب الصور 2 يكشف colocalization من synaptophysin وNR1 (أعلى يمين، بونتا البرتقالي). يتم تكبير مربع المبينة في أعلى يسار الصورة في الصف السفلي من الصور.

الآثار قبل المشبكي انخفاض المغنيسيوم

بالإضافة إلى رفع الحظر مستقبلات NMDA، خفضت المغنيسيوم يمكن أن تحدث زيادة استثارة بآليات قبل المشبكي. على سبيل المثال، نزوح المغنيسيوم الكالسيوم في طبقة سطح الغشاء قبل المشبكي (ماكلولين وآخرون 1978)، وبالتالي تقليل كمية الكالسيوم المتوفرة لدخول محطات قبل المشبكي. ومن ثم فإن إزالة المغنيسيوم تعزيز الإفراج قبل المشبكي من خلال تسهيل تدفق الكالسيوم إلى المحطة قبل المشبكي. ولذلك درسنا تأثير انخفاض المغنيسيوم على وتيرة الافراج عن جهاز الإرسال. الشكل 5، A و B يوضح sEPSCs المسجلة في المغنيسيوم الطبيعي وانخفاض.وزادت وتيرة sEPSC بشكل ملحوظ في الخلايا العصبية المسجلة في 0 [مغ 2+] س. وقعت 90٪ من الأحداث مع فترات interevent <800 مللي ثانية (الشكل 5 C). في المغنيسيوم العادي، وكان الفاصل الزمني مقارنة 5200 مللي ثانية (الشكل 5 C). التحول في فترة interevent للخلية المصورة في الشكل. 5 كان كبيرا [كولموجوروف-سميرنوف 2-عينة الاختبار؛ د = 0.58، P <0.001]. وكشف تحليل 8 خلايا في كل من المغنيسيوم الطبيعي وتقليل زيادة مماثلة في التردد. في كل خلية، انخفضت 90٪ interevent قيمة قطع الفاصلة التي كتبها ≥3 أضعاف.

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 5.

عفوية التيارات بعد المشبكي مثير (sEPSCs) في الخلايا الهرمية hiipocampal مثقف. تردد sEPSC، وسجلت في العادي المغنيسيوم الخارجي (A يتم زيادة)، بشكل ملحوظ في صفر المتوسطة المغنيسيوم (B). C: المتراكمة المؤامرة جزء من الرسم البياني فترات interevent للتسجيلات كاملة 4-مين من الخلايا هو مبين في A و B. وكانت فترات أقصر بكثير في صفر المغنيسيوم (كولموجوروف-سميرنوف 2-عينة الاختبار؛ د = 0.58، P <0.001). التسجيلات في A و B هي من 2 خلايا مختلفة.

أظهرت هذه البيانات زيادة وتيرة التيارات متشابك سجلت postsynaptically، يعزى على الأرجح في جزء منه إلى زيادة استثارة الدوائر العصبية. ومع ذلك، فإنها لم توضح ما إذا كانت إزالة المغنيسيوم تتأثر أيضا آليات الإفراج الغلوتامات قبل المشبكي. درسنا أولا النشاط متشابك قبل وبعد تطبيق 1 ميكرومتر TTX لتقييم أثر 0 [مغ 2+] س بشأن الإجراءات المحتملة التي تعتمد على إطلاق جهاز الإرسال. الشكل 6، AوB يظهر أمثلة من sEPSC (لا TTX) وmEPSC (بعد تطبيق TTX) في خلايا 16 DIV في الحالات العادية و0 [مغ 2+] س الظروف. عن النشاط الخلوي هو مبين، وزادت وتيرة mEPSC بشكل كبير في 0 [مغ 2+] س حالة (الشكل 6. C؛ كولموجوروف-سميرنوف 2-عينة الاختبار؛ د = 0.26، P <0.001). وكان عدد من mEPSCs سجلت في فترة 4 دقيقة 188 في المغنيسيوم العادي و 331 في 0 [مغ 2+] س. في 6 أزواج من الخلايا المعرضة أو لم تتعرض لالمغنيسيوم، كان عدد mEPSCs أعلى 57.6 + 12.9٪ في 0 [مغ 2+] س الشروط مقابل المغنيسيوم العادي. تشير هذه النتيجة إلى أن تم تعزيز الإجراءات المحتملة مستقل الافراج عن ناقل عصبي في 0 [مغ 2+] س الشرط.

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 6.

تأثير سم الأسماك الرباعية الأسنان (TTX) على توزيع السعة EPSC. سجلت الخلايا لمدة 4 دقائق. ثم أضاف 1 ميكرومتر TTX إلى الوسط الخارجي. بعد 10 دقيقة، وسجلت EPSCs لفترة 4 دقيقة أخرى. A: مثال sEPSCs في الحالات العادية (اليسار) وصفر (الحق) المغنيسيوم الخارجي من خلية 16 يوما في الثقافة. تسببت إضافة TTX تخفيض شامل في EPSC السعة، وإنتاج mEPSCs (B). C: المتراكمة المؤامرة جزء من الرسم البياني فترات interevent للخلايا هو مبين في A و B. وكانت فترات أقصر بكثير في الصفر 0 [مغ 2+] س (كولموجوروف-سميرنوف 2-عينة الاختبار؛ د = 0.26، P <0.001). D: توزيع السعة من التسجيلات كاملة 4-مين من الخلايا هو مبين في A و B . وكان الأكثر انتشارا EPSC السعة حوالي 50 باسكال (المسجلة في -50 باسكال) بغض النظر عن مستوى المغنيسيوم أو وجود TTX. ملاحظة ذيل الأحداث عالية السعة في 0 المغنيسيوم 2+ حالة قبل TTX بالإضافة إلى ذلك. تم استخدام نسبة sEPSC وmEPSC سعة لحساب محتوى كمي يعني الإفراج الغلوتامات (انظر النص).

درسنا أيضا ما إذا كان محتوى كمي، وبالتالي فإن السعة، من sEPSCs تم تعديلها من قبل 0 [مغ 2+] س. وعلى الرغم من إجراء أي تحليل كمي الرسمي، تم حساب متوسط ​​عدد العصبي الكميات صدر في إمكانات العمل قبل المشبكي بواسطة الأسلوب المباشر في السيطرة و0 [مغ 2+] س الظروف. كانت سعة sEPSC الأكثر شيوعا 50-60 السلطة الفلسطينية، بغض النظر عن حالة المغنيسيوم (الشكل 6 D والحانات مفتوحة). وقد مال وتوزيع السعة sEPSC تجاه التيارات السعة العالي في وضعها الطبيعي و0 [مغ 2+] س. ومع ذلك، كانت أحداث المرتفعة السعة أكثر تواترا في 0 [مغ 2+] س وصلت إلى الحد الأقصى من حوالي 400 السلطة الفلسطينية للأحداث واحدة مقابل 150 للسلطة الفلسطينية في المغنيسيوم العادي. هذه الأحداث السعة أعلى ممثلة يفترض أن الغلوتامات من عدة كمات صدر في وقت واحد. بعد TTX، كانت 50-60 سعة السلطة الفلسطينية mEPSC الأكثر انتشارا ولكن تم القضاء ذيل التيارات متشابك أعلى-السعة (المغنيسيوم العادي) أو خفضها بصورة كبيرة في عدد من الأحداث (0 [مغ 2+] س). تم حساب محتوى كمي متر من نسبة متوسط ​​sEPSC السعة أن يعني mEPSC السعة. في هذا المثال، كانت القيم 1.41 في المغنيسيوم العادي و2.40 ل0 [مغ 2+] س. تم إجراء الحساب المباشر للمتر في 6 خلايا في كل من المغنيسيوم الطبيعي وانخفاض. يعني المحتوى كمي في المغنيسيوم العادي كان 1.36 + 0.05 وارتفع بشكل ملحوظ في 0 [مغ 2+] س إلى 2.09 + 0.15 (P <0.01، ر -test).

تأثير الكثافة خلية في انفجار احتمال

أثبتت التجارب السابقة أن 0 [مغ 2+] س العلاج عززت انتقال متشابك مثير من قبل كل من وسائل قبل المشبكي وبعد المشبكي. ومع ذلك، فإنه من غير الواضح ما إذا كان 0 [مغ 2+] س زيادة قوة autapses (المشابك المتكررة من الخلايا العصبية على نفسه) أو أن من الترابط بين الخلايا العصبية الهرمية. في الماضي، وقد تجلى انفجار المتكررة في microcultures تحتوي على عدد قليل من 2 الخلايا العصبية الحصين مثير (سيجال وFurshpan 1990). ومع ذلك، قد لا تكون هذه النتائج تنطبق على إعداد ثقافة المستخدمة في تجاربنا في أن الخلايا تعرضوا لحاصرات النشاط متشابك (kynurenate ورفع المغنيسيوم 2+) لعدة أسابيع وأظهرت انفجار السلوك فقط عندما كانت تغسل الثقافات خالية من هذه حاصرات . وقد تجلى المزمن NMDA مستقبلات الحصار إلى زيادة ملحوظة تجميع مستقبلات NMDA وتعزيز التحول إلى توزيع أكثر متشابك (راو وكريغ 1997). وعلى النقيض من هذا النموذج microculture، تم العثور على الترابط بين الخلايا العصبية متعددة ضرورية لانفجار المتكررة الناجمة عن البنسلين، بيكروتوكسين، أو البيريدين 4-الأمينية في شرائح قرن آمون (Hablitz 1984؛ Schwartzkroin والأمير 1978). لاختبار ما إذا كانت الوصلات بين الخلايا العصبية الحصين اللازمة لانفجار المتكررة، التي كانت تزرع في منخفض الكثافة (10 4 الخلايا العصبية / ساترة). الردود على مراقبة و0 [مغ 2+] س الظروف كانت مقارنة مع تلك التي تزرع في كثافة عالية (10 5 الخلايا العصبية / ساترة) بعد 13-17 يوما في الثقافة. الشكل 7 يبين التسجيلات current- والجهد المشبك من الخلايا العصبية الهرمية مثقف من نفس الخلايا الجنينية الحصين التي تم تقسيمها إلى مجموعات المنخفضة والعالية الكثافة. في الثقافات منخفض الكثافة، وكانت قادرة على توليد إمكانات العمل عفوية الخلايا العصبية. التعرض ل0 [مغ 2+] س لم تسفر المتكررة انفجار (0/18 الخلايا) ولكن لم زيادة وتيرة التيارات بعد المشبكي مثير (الشكل 7 A). زادت وتيرة sEPSC بشكل ملحوظ مع 0 [مغ 2+] س العلاج في 13/9 الخلايا (الشكل 7،. B و C، كولموجوروف-سميرنوف 2 عينة الاختبار؛ د = 0.31، P = 0.04).
على الرغم من استثارة الشبكة كانت لم تتغير في 0 [مغ 2+] س في الثقافات منخفض الكثافة، ينبغي أن لا يزال قد تعززت تغييرات في nonaction الإمكانات التي تعتمد على الغلوتامات قبل المشبكي الإفراج الاحتمالات. درسنا هذا الاحتمال بمقارنة تردد mEPSC في الثقافات منخفض الكثافة تحت العادي و0 [مغ 2+] س الظروف. الشكل 8 A يدل على سبيل المثال من mEPSCs المسجلة من الخلايا 14 DIV. في المغنيسيوم العادي، كانت mEPSCs نادرة. في 0 [مغ 2+] س، زاد التردد mEPSC بشكل ملحوظ. وقعت ثمانين في المئة من الأحداث مع فاصل interevent أقل من حوالي 4000 مللي ثانية. في 0 [مغ 2+] س، وكان الفاصل الزمني أقصر بكثير في 1550 مللي ثانية (كولموجوروف-سميرنوف الاختبار؛ د = 0.35، P <0.001).

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 8.

EPSCs مصغرة المسجلة في الخلايا من الثقافات منخفض الكثافة في الحالات العادية و0 [مغ 2+] س. A: مقتطفات من تسجيلات 4 دقيقة من 2 خلايا مختلفة B: تحليل التسجيلات كاملة من الخلايا هو مبين في A كشف أقصر بكثير توزيع interevent الفاصل في 0 [مغ 2+] س (كولموجوروف-سميرنوف 2-عينة الاختبار؛ DF = 0.35، P <0.001).

النتيجة أن الخلايا العصبية من الثقافات منخفض الكثافة لا يمكن أن يكون ذلك حافزا لانفجار اقترح أنها تشكل نقاط الاشتباك العصبي النشطة أقل أن تلك مثقف أكثر كثافة. تم اختبار هذا مباشرة. ومقارنة وجود اتصالات متشابك في الخلايا من lowand ثقافات عالية الكثافة النوعية التي تلطيخ للتوزيع synaptophysin. في الخلايا العصبية من ثقافة عالية الكثافة في الصورة في الشكل. 9 A، كانت مجموعات synaptophysin في كل مكان على كل العمليات العصبية. في العديد من المناطق، لا يمكن تمييز نقاط والفردية بسبب الكثافة العالية. في المقابل، كان توزيع synaptophysin أكثر متفرق في المثال منخفض الكثافة. الفردية نقاط وsynaptophysin كانت متميزة بسهولة على جميع العمليات، مما يشير إلى أن الخلايا العصبية في الثقافة منخفض الكثافة تقديم وتلقي الاتصالات متشابك أقل.

• حمل الرقم
• فتح في علامة تبويب جديدة
• تحميل باور بوينت

التين. 9.

مقارنة synaptophysin (A) وFM1-43 (B) مضان في عالية مقابل منخفض الكثافة الثقافات الحصين. تلطيخ لsynaptophysin علامة قبل المشبكي والإلتقام الحويصلي هو أعلى بشكل ملحوظ في الثقافات أكثر كثافة.

لدراسة النشاط متشابك نشط، تم علاج الخلايا العصبية من الثقافات العالية والمنخفضة الكثافة مع صبغة الفلورسنت FM1-43، الذي ارتفع في الحويصلات المشبكية endocytosed وغير قابلة للكشف على الحويصلة إيماس، وبالتالي وضع العلامات نقاط الاشتباك العصبي التي تمر بنشاط exocytotic / دورة endocytotic (Cochilla وآخرون 1999). الشكل 9 B يظهر الخلايا العصبية من الثقافات العالية والمنخفضة الكثافة تتعرض لFM1-43. وكان عدد من نقاط والفلورسنت أعلى بشكل ملحوظ في الخلايا العصبية ذات الكثافة السكانية العالية. تم إجراء التحليل الكمي للنقاط و5 في خلايا كل من ثقافات عالية ومنخفضة الكثافة عن طريق عد نقاط وعلى مساحة حوالي 30 × 30 ميكرون. تم إحصاء نقاط ومناطق في 2 لكل خلية تظهر أعظم النشاط متشابك. في الخلايا العصبية منخفض الكثافة، وكان متوسط ​​عدد FM1-43 نقاط والفلورسنت 48.7 ± 5.1. لالخلايا العصبية ذات الكثافة السكانية العالية، وكان النشاط أعلى بكثير، 177.2 ± 25.1 (P <0.001، ر -test). تدل هذه البيانات على أن الربط الوظيفي بين الخلايا، مقاسا الاتصالات متشابك نشطة، يتم تخفيض كثيرا في الثقافات منخفض الكثافة.

نقاش

النتائج الرئيسية لهذه الدراسة هي 1 كانت) شبكات الخلايا العصبية الحصين مثقف قادرة على توليد العمل من تلقاء أنفسهم رشقات نارية المحتملة المتكررة مشابهة جدا لتلك التي لوحظت في سليمة الاستعدادات شريحة الحصين عندما تتعرض لاسميا صفر المغنيسيوم؛ 2) postsynaptically، وقلصت السلوك الانفجار، ولكن لم تلغ، من قبل د -APV، مما يشير إلى أن إلغاء الحصار المغنيسيوم القنوات مستقبلات NMDA ساهمت في انفجار بداية وصيانتها؛ 3) presynaptically، 0 [مغ 2+] س تسبب في زيادة احتمال الإفراج الغلوتامات (تحليل اقترح زيادة مصاحبة في يعني المحتوى كمي)؛ 4) خفضت التعديلات التي يسببها المغنيسيوم في خصائص الخلايا العصبية قبل وبعد المشبكي كافية لإحداث انفجار في الثقافات الكثافة أقل مع الاتصالات المشبكية متفرق، مشيرا إلى أن الانفجار كان الشبكة، بدلا من الذاتية الخلوية، الظاهرة. ومع ذلك، 0 [مغ 2+] س فعل إحداث زيادة في كل من النشاط sEPSC وmEPSC في الثقافات منخفض الكثافة.
الخلايا العصبية الحصين مثقف كنموذج للانفجار

مؤخرا أصبحت ثقافة الخلية أداة لدراسة التفاعلات متشابك واللدونة (انظر سالتر 2001 للمراجعة). وسعت الكهربية والخصائص المورفولوجية المعلومات على وظيفة المشبك يست قابلة لأنواع أخرى من التحضيرات (Gomperts وآخرون 2000.؛ ستيفنز وWesseling 1999). وقد تم زراعة الخلايا أيضا أداة قيمة للتحقيق في الحالات المرضية المتعلقة تغيير وظيفة متشابك العادية (ديلورنزو وآخرون 1998.؛ Furshpan 1991).
النتائج التي توصلنا إليها بشأن خفض تحريض المغنيسيوم النشاط انفجار عفوي في الخلايا العصبية الحصين مثقف إضافة إلى هذا الفهم. انهم متفقون مع النتائج طويلة الأمد للانفجار بتخفيض المغنيسيوم في شريحة (أندرسون وآخرون 1986.؛ Avoli وآخرون 1987.)، ثقافة شريحة (جوتيريز وآخرون 1999.، والاستعدادات الثقافة () Sombati وديلورنزو 1995).
النتائج التي توصلنا إليها تشير بقوة إلى أن الانفجار النشاط في نتائج إعداد لدينا من التفاعلات متشابك بدلا من خصائص الخلايا العصبية الذاتية. ومع ذلك، البيانات المتوفرة لدينا لا يستبعد الأخير. السلوك انفجار وقع في بعض الأحيان في المغنيسيوم الخارجي العادي. فمن غير المرجح أن فرط الاستثارية الخلايا العصبية في هذه الحالات كانت نتيجة لنقص الأكسجة (Rubaj وآخرون 2003) أو درجة الحموضة التغيير. وشملت الثقافات على حد سواء CA1 CA3 والهرمية الخلايا العصبية. خصائص pacemaking الجوهرية لهذه الأخيرة قد وصفت بشكل جيد وعلى غرار (تروب وآخرون 1991). فمن الممكن أنه نظرا كثافة كافية والترابط بين منطقة خلايا غنية الهرمية CA3 بشكل خاص من الثقافة والنشاط العفوي يمكن ان تحدث. وقد أظهرت العديد من الدراسات أن يحركها شبكة تصريف الشديدة الاستثارة المتكررة في قرن آمون سليمة تنشأ في CA3 وتنتشر إلى CA1 (Hablitz 1984؛ مودي وآخرون 1988).
ويدعم أهمية التفاعلات الشبكة في تمكين النشاط انفجار عدة خطوط من الأدلة. أولا، لم فرط العصبية من 10-20 بالسيارات من إمكانات يستريح لن تقضي انفجار، رغم أنه تم تخفيض مدة انفجر والتردد. ثانيا، لم الخلايا العصبية من الثقافات منخفض الكثافة لا تنفجر تحت إما عادية أو 0 [مغ 2+] س الظروف. الثالث والحصار الدوائي من الإثارة القضاء رشقات نارية متشابك في 0 [مغ 2+] س. سوف تكون هناك حاجة التسجيلات المزدوجة في وقت واحد لمعالجة نهائيا مسألة ما إذا كانت الخلايا العصبية يتلقون تزامن القصف مثير.

انخفاض انفجار المغنيسيوم: الآليات بعد المشبكي

وقد لوحظ فرط الاستثارية الحصين الناجم عن انخفاض المغنيسيوم أو إزالة لعدة سنوات. هو واضح بما فيه الكفاية أن تأثير نقص المغنيسيوم قد استخدمت كنموذج للنوبات الفص الصدغي منذ أواخر 1970s (باك وآخرون 1978). وقد لاحظ العديد من التقارير التبعية انخفاض المغنيسيوم انفجار على وظيفية NMDA مستقبلات / قنوات (Albowitz وآخرون 1997.؛ Collingridge وآخرون 1988؛. Gulyas-كوفاتش وآخرون 2002.؛. جوتيريز وآخرون 1999؛ هامون وآخرون 1987.؛ . Quilichini وآخرون 2002؛ تانكريدي وآخرون 1988.). وربما يعزى ذلك إلى تأثير بعد المشبكي موثقة جيدا من المغنيسيوم في عرقلة كهربية مستقبلات NMDA / قنوات من خارج الخلية في الغشاء يستريح المحتملة (Dingledine وآخرون 1990). نتائجنا تدعم هذه الدراسات السابقة. أولا، أظهرت الدراسات المناعي مستقبلات NMDA كانت محلية (وتلزم NMDA مستقبلات الوحيدات NR1) مع synaptophysin في ثقافات انفجار قادر، مما يدل على موضع متشابك. ثانيا، إن إزالة المغنيسيوم شرطا للانفجار في كل ما يقرب من التجارب، في حين كان الموهن الانفجار من قبل محددة NMDA مستقبلات د -APV. وهكذا NMDA تنشيط مستقبلات التي كتبها انخفاض المغنيسيوم يبدو بالغ الأهمية لبدء وصيانة انفجار الخلايا العصبية في إعداد لدينا.
ومع ذلك، تشير البيانات المتوفرة لدينا يمكن أن تكون آليات بعد المشبكي مثير إضافية المنطوق. لم المفرطة نشاط الخلايا العصبية (رشقات نارية من EPSCs عالية التردد) الناجم عن انخفاض المغنيسيوم لن تعود إلى وضعها الطبيعي بعد تثبيط مستقبلات NMDA مع د -APV. EPSC انفجار وقع تزال، على الرغم من فترات interburst وزادت وقلل مدة تنفجر. كان الحصار من أمبا مستقبلات الغلوتامات من نوع ضروري للقضاء على النشاط. وتشير هذه الملاحظات أن زيادة نشاط مستقبلات أمبا وكذلك تنشيط مستقبلات NMDA يمكن أن تسهم في فرط الاستثارية العصبية في 0 [مغ 2+] س. أحد التفسيرات المحتملة لهذه الملاحظة قد تكون الفرضية الأخيرة الركيزة الفسيولوجية للالتقوية على المدى الطويل، وهو شكل من اللدونة متشابك التي قد تكمن وراء التعلم والذاكرة. ياو وآخرون. (2001) أثبتت أن تنشيط مستقبلات NMDA في نتائج ثقافة في التعيين السريع (في غضون دقائق) مستقبلات أمبا إلى مواقع متشابك NMDA مستقبلات مع زيادة موازية في وتيرة mEPSC. وقع تعزيز مماثل من mEPSCs بعد وجيزة، وتطبيق التنسيق من الجلايسين لتنشيط مستقبلات NMDA (لو وآخرون 2001). كان زيادة انتقال مثير إيماس الدراجات التابعة والمعنية يفترض أن مستقبلات أمبا من أماكن بعيدة لموقع تفعيل NMDA (ليانغ وHuganir 2001؛ Luscher وFrerking 2001؛. Luscher وآخرون 1999). هذا التدفق من مستقبلات أمبا إلى مواقع متشابك يمكن أن يؤدي إلى د مقاومة لل-APV استثارة لاحظنا.

انخفاض انفجار المغنيسيوم: الآليات قبل المشبكي

وعلى الرغم من تظاهر تعزيز NMDA بوساطة مستقبلات excitabilty أن تلعب دورا في خفض المغنيسيوم الناجم عن انفجار، فإنه من غير المحتمل أن تلعب دورا هاما في التعديلات قبل المشبكي لاحظناه في المغنيسيوم صفر: زيادة وتيرة sEPSC وزيادة واضحة في متوسط ​​كمومي محتوى. وتشير هذه التغيرات أن احتمال الافراج عن الغلوتامات وبنسبة انخفاض المغنيسيوم.
واقترح أحد آلية محتملة لأول مرة Frankenhauser وهودجكين (1957). ففكروا أن التخفيضات في الكاتيونات ثنائي التكافؤ يمكن أن يزيد excitabilty العصبية عن طريق خفض تهمة الفحص على سطح الغشاء. وهذا من شأنه أن يسبب جزء أصغر من إمكانات عبر الغشاء في الانخفاض عبر طبقة ثنائية المادة الدهنية (ماكلولين وآخرون 1971)، مما أدى إلى خفض الحقل الكهربائي لمست من قبل المواصلة تعتمد على الجهد مثل قنوات الكالسيوم في محطة متشابك. مولر وفنكلستين (1974) المقترح في وقت لاحق نموذجا على مزيد من الماغنسيوم محددة. أنها افترضت أن زيادة المغنيسيوم 2+ التركيز يزيح الكالسيوم في السطح تهمة طبقة المتاخمة للغشاء سالبة الشحنة، وبالتالي خفض كمية الكالسيوم المتوفرة للتدفق إلى محطات متشابك. خفض أو القضاء على المغنيسيوم 2+ سوف يكون له تأثير عكسي، وزيادة فعالية الكالسيوم 2+ التركيز عند مصب قبل المشبكي الكالسيوم 2+ القنوات. هذه الآلية قد يفسر زيادة في الكالسيوم داخل الخلايا لوحظ في معزولة تماما الخلايا العصبية CA1 الهرمية في وجود انخفاض المغنيسيوم خارج الخلية، تدفق بوساطة قنوات الكالسيوم التي تعتمد على الجهد (تشانغ وآخرون 1996). وبالتالي أثر واحد قبل المشبكي للحد من المغنيسيوم 2+ سيكون لزيادة احتمال الإفراج على النحو المقترح في نموذج كاتز العصبي (كاتز 1971). احتمال الافراج يعكس ما إذا كان احتلت موقع الإطلاق وتوافر الارسال (Dobrunz وستيفنز 1997؛ هانس وGustaffson، 2002؛ ستالي وآخرون 1998، 2001)، ولكن يمكن عن طريق التضمين الكالسيوم والمغنيسيوم (Bouron 2001). المغنيسيوم انخفاض قد يؤدي أيضا إلى زيادة إطلاق الغلوتامات من خلال تسهيل خروج الكالسيوم من مخازن داخل الخلايا عن طريق تثبيط انخفاض المغنيسيوم ryanodine المستقبلات (Masumiya وآخرون 2001). سواء تحدث هذه العملية هي إشكالية بالنظر إلى أن التقلبات في تركيز المغنيسيوم خارج الخلية لا تظهر لتغيير مستويات داخل الخلايا (تشانغ وآخرون 1996).
ويمكن لهذه الآليات شرح ملحوظة زيادة في وتيرة sEPSC، مما يعكس زيادة الافراج عن الغلوتامات قبل المشبكي، لوحظ انخفاض في المغنيسيوم. ويمكن أيضا أن تفسر الزيادة تحسب في المحتوى كمي يعني. على الرغم من أننا لم تحاول تحليل كمي الرسمي لهذه الدراسة، ونحن لم تستخدم 2 أساليب مختلفة لتحديد محتوى كمي. لم هذه الأساليب لا نوافق على مدى هذه الزيادة، ولكن في كلتا الحالتين، كان الزيادة الكبيرة.

انخفاض انفجار المغنيسيوم: الربط

وقد اقترحت الدراسات الفسيولوجية والنمذجة في الحصين أن تزامن الانفجار في بعض النظم من الخلايا العصبية الهرمية قد تتطلب الربط بين الحد الأدنى الحرج من الخلايا وكافية قوة متشابك مثير لدفع شبكة (باين وآخرون 1999.؛ تروب وونغ 1983؛ تروب وآخرون آل 1995). أظهرت محاكاة شبكة نموذجية من الحصين انفجار الخلايا العصبية التي يمكن أن يحدث انفجار، حتى في وجود تثبيط الخلايا العصبية، إلا إذا الاتصال بين الخلايا العصبية في الدائرة كثيفة على نحو كاف. الربط المنخفض يمنع تطوير انفجار (تروب وآخرون 1987). في دراسات مختبرية في الحصين والقشرة المخية الحديثة تشير إلى أن الندرة النسبية للاتصالات متشابك مثير المرجح يساهم في الوليد مقاومة القوارض مصادرة (سوان وHablitz 2000).
اختبرنا هذه الفكرة عن طريق إخضاع الثقافات منخفض الكثافة لنفس الشروط التي أنتجت انفجار السلوك في الثقافات ذات الكثافة السكانية العالية. التناقض بين الاستعدادات 2 عندما تتعرض ل0 [مغ 2+] س كان واضحا في 2 التحيات. لم يلاحظ أي عمل عدة رشقات نارية محتملة في أي الخلايا العصبية منخفض الكثافة اختبار بغض النظر عن عدد الأيام التي تزرع في الثقافة ومناعي لوسم synaptophysin أشار عدد أقل بكثير من المواقع متشابك المحتملة. وقد تأكدت هذه النتيجة الأخير قبل وضع العلامات من نقاط الاشتباك العصبي مع FM1-43. وكان عدد من نقاط الاشتباك العصبي exocytosing بنشاط أقل بكثير في الثقافات منخفض الكثافة. وكانت الزيادة في كل من sEPSC وmEPSC تردد واضح في 0 [مغ 2+] س، مشيرا إلى أن الآليات قبل المشبكي ليزيد من افراز الصوديوم تعمل في منخفض الكثافة وكذلك الثقافات ذات الكثافة السكانية العالية.
أهمية الاتصال في توليد الشاذة نشاط الخلايا العصبية مثير يمكن تقديره من خلال دراسة نماذج حيوانية من نوبات الفص الصدغي. نشاط الخلايا العصبية وصفها في هذه الدراسة (إمكانات العمل متعددة فرضه على اللاإستقطابات depolarizations لفترات طويلة) مماثلة لتلك التي لوحظت في هذه النماذج. على المستوى الخلوي، ويتجلى النشاط الاستيلاء في نشاط مثير متزامن بين عدد كبير من الخلايا العصبية (دوديك وآخرون 1999). وهناك ميزة التشريحية بارزة في العديد من النماذج الحيوانية من نوبات الفص الصدغي المزمنة هي تنتشر من العمليات العصبية وتشكيل لاحق من شاذ، ويفترض أن الغلوتامات بوساطة التفاعلات متشابك مثير (ليمان وآخرون 2001.؛ Sutula وآخرون 1996.؛ Wuarin ودوديك 1996 )، على الرغم من أن تنتشر ليست سمة عالمية من هذه النماذج (سوان وآخرون 2001). في الآونة الأخيرة، لينش وSutula (2000 أظهرت) الشاذة، على ما يبدو الأحادي المشبك الدوائر مثير المتكررة التي من المرجح يكمن وراء نشاط الخلايا العصبية غير طبيعي في هذا النموذج.

شكر وتقدير

 

[رافت ابراهيم]

 

http://www.omicsgroup.org/journals/i....php?aid=55801

.
Masgutova التكامل neurosensorimotor المنعكس؛ MNRI. التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكرر. الخلايا الليمفاوية. السيتوكينات. الخلايا القاتلة الطبيعية مقدمة Masgutova التكامل neurosensorimotor لا ارادي وأمراض الجهاز التنفسي مرض الانسداد الرئوي المزمن هو السبب الرئيسي للوفاة والعجز في جميع أنحاء العالم. منذ عام 2000 في روسيا وأوروبا، والإصابة بالأمراض التنفسية المزمنة والتهابات وتيرة المستشفيات المطلوبة للتعامل معها زادت [1 - 3]. التهاب الشعب الهوائية هو واحد من أكثر الأمراض المعدية الأكثر شيوعا في الجهاز التنفسي لدى الأطفال. في الأشكال السريرية الحالية للالتهاب الشعب الهوائية وتشمل الحاد والمتكرر والمزمن [4]. الحادة (بسيطة) التهاب الشعب الهوائية هو شكل من أشكال التهاب حاد في غلالة المخاطية للقصبات مع عدم وجود علامات الرئة تتأثر الأنسجة. في معظم الأحيان التهاب الشعب الهوائية يتطور نتيجة لأمراض الجهاز التنفسي الحادة من مسببات مختلفة، مثل الفيروسية، البكتيرية، الفطرية، الطفيليات، أو مختلطة. الحاد التهاب الشعب الهوائية الانسدادي يتميز تضيق و / أو احتقان الجهاز التنفسي نتيجة للذمة وتضخم من غلالة المخاطية، والإفراط في إفراز المخاط أو تشنج قصبي الذي يحدد صورة سريرية محددة. في سن متلازمة معرقلة 3 يتحدد أساسا من الإفراط في إفراز المخاط الكثيف اللزج وتضخم من غلالة المخاطية. تشنج قصبي يتطور في كثير من الأحيان في الأطفال أكثر من 4 سنوات. في حالة التهاب الشعب الهوائية المتكررة مع متلازمة bronchoobstructive (أكثر من 2-3 في السنة) نموذج يمكن تعريفها بأنها التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكرر (ROB). ويعتقد أن الاضطرابات تنظيم الجهاز المناعي للمساهمة في تطوير وتكرار الأمراض التنفسية الالتهابية المزمنة [5، 6]. على سبيل المثال، عند الأطفال، ويرتبط ROB مع الجلد التأتبي والأمراض الالتهابية المعدية، والأطفال المرضى، والخصائص التشريحية والفسيولوجية في الجهاز التنفسي، وتنظيم الخضري، وغير ناضجة المخاطية في الجهاز التنفسي الحواجز غالبا ما تعيق تشخيص الربو القصبي. ويرتبط التهاب الجهاز التنفسي المتكررة مع النشاط immunopathological وخلل في النظام الكظري النخامي [7، 8]. قصور الغدة الكظرية الحاد، وهو عامل في تطور أمراض مثل ROB، يمكن أن تتطور في الأفراد الذين يعانون من نوبات متكررة من أمراض الجهاز التنفسي. ولذلك فمن المهم لدراسة التفاعل بين الجهاز العصبي وجهاز المناعة، لأن هذه العلاقة تؤثر على مستويات proinflammatory والسيتوكينات والهرمونات المضادة للالتهابات (خصوصا الكورتيزول) في الأشخاص الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي مثل ROB. في هؤلاء المرضى، والعلاج التقليدي في كثير من الأحيان غير فعالة وقد لا يؤدي إلى مغفرة طويلة. منذ عام 1999، تم التركيز على استخدام مناعة في علاج ROB، على الرغم من الأساليب العلاجية الأخرى كانت فعالة [أيضا +9 - 11]. نحن التحقيق في الآثار المترتبة على واحدة من هذه المعالجة البديلة. قارنا آثار العلاج من تعاطي المخدرات القياسية بالإضافة إلى MNRI مع تلك العلاج من تعاطي المخدرات وحدها على وظيفة النظام والكورتيزول مستويات المناعة لدى الأطفال مع ROB. أمراض مثل ROB تجعل من الصعب الزفير جميع الهواء من الرئتين. مسببات ROB يلعب دورا في استمرار فيروسات الجهاز التنفسي مثل فيروس الجهاز التنفسي المخلوي والفيروسات الغدية، وأنه يلعب الآن دورا متزايدا في تطوير التهابات الشعب الهوائية التي تسببها المفطورة الرئوية والكلاميديا ​​الرئوية. هي إلى حد كبير بسبب الخصائص التشريحية والفسيولوجية لنظامهم التنفسي انسداد الشعب الهوائية لدى الأطفال: ضيق في الشعب الهوائية، وتفتيت وhydrophilicity من الغشاء المخاطي للالقصبات الهوائية، ميلها إلى ذمة، وفرط الناتجة عن أي عملية الالتهاب الخلفية . لم مجتمع الدراسة لدينا لا تشمل الأطفال الذين يعانون من الربو أو الذين يعانون من المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (سارس)، وهو التهاب فيروسي التهاب الشعب الهوائية الذي هو أيضا مرض الرئة المقيدة فيها الأطفال يجدون صعوبة في توسيع تماما رئاتهم بالهواء. التسبب في التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة معقد التسبب في التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة عند الأطفال. العوامل المعدية تلعب دورا رئيسيا في تحديد تطور المرض. تأثير الفيروس على الأنسجة غير ناضجة يمكن أن يؤدي إلى التهاب مزمن في القصبات حتى في مرحلة الطفولة المبكرة. التنفسي الحاد عدوى فيروس يسهل مضيفا التهاب بكتيري. تعتبر مسببات الأمراض الالتهابية رئيسية تكون المستدمية النزلية، Strеptococcus الرئوية ونزلي الموراكسيلة. وقد كشفت الدراسات التي H. النزلية، S. الرئوية يمكن أن تؤثر على ظهارة الهدبية وتفاقم وظيفة الأهداب. استنساخ الجراثيم يؤدي إلى تطور الالتهابات نتيجة لبنية القصبات الهوائية الضارة الذات وتفعيل أنزيمات الخلايا الالتهابية. ويضعف نتيجة لهذه العمليات إزالة مخاطي هدبي الذي يؤدي إلى panbronchitis والتهاب حوائط القصبات، يتوسط تشكيل المشوه التهاب الشعب الهوائية [12]. يمكن مسببات الأمراض داخل الخلايا، مثل الكلاميديا ​​والميكوبلازما استفزاز بداية مرض الانسداد القصبية أو يسبب تفاقم لها، حالة مزمنة وبالطبع شديد من المرض [13]. في الوقت الحاضر ليس هناك شك في أن علاج متلازمة القصبية-معرقلة (BOS) في الأطفال الذين يعانون من التهاب الجهاز التنفسي الحاد ينبغي أن تنظر مسببات المرض والتسبب في إعاقة الشعب الهوائية. ومن المعروف جيدا أن يتميز نشأة انسداد الشعب الهوائية بشكل رئيسي من قبل ذمة التهابية والمخاط الإفراط في إفراز. لذلك تشمل العلاجات BOS المسببة للأمراض وأعراض المضادة للالتهابات، broncholytic والعقاقير حال للبلغم [14]. ومع ذلك، ينبغي للعلاج تهدف أولا القضاء على أسباب المرض، مما أدى إلى BOS، أي في حالة التهابات الجهاز التنفسي - إلى القضاء على العوامل المسببة للأمراض المعدية. التلاعب الأكثر صعوبة، سواء من حيث التشخيص والعلاج، ويبدو أن علاج الأمراض القصبية الانسداد المتكررة المرتبطة مسببات الأمراض غير نمطية من التهابات الجهاز التنفسي (المفطورة الرئوية، الكلاميديا ​​الالتهاب الرئوي، وغيرها)، هو أن يرجع ذلك إلى قدرة استمرار هذه مسببات الأمراض و تأثير immunotropic غير المواتية. قد يؤدي العلاج الدوائي غير عقلاني لانتقال المرض في حالة مزمنة، في بعض الحالات الربو القصبي (BA) قد تتطور. كل ذلك يؤدي إلى انخفاض القدرة على العمل ونوعية حياة المرضى وتعزيز النفقات الاقتصادية الناجمة عن معالجة المرضى BA. وهكذا، كانت تهدف هذه الدراسة إلى تحديد العلاجية المثلى. الدراسات الحديثة [15] تبين أن السارس قد يستفز تطوير عابرة الشعب الهوائية شديدة التفاعل لمدة 4 إلى 6 أسابيع بعد ظهور المرض. الفيروسات تخترق مخاطية من القصبات الهوائية وتؤدي إلى تهيج النهايات العصبية. وهكذا، حتى بعد فترة النقاهة من المرض، والمرضى قد يعانون من أعراض من hyperreactivity القصبي (SAB) لمدة تصل إلى 1 في الشهر وربما تكون في خطر أكبر لتطوير ROB. وبؤر التهابات الجهاز التنفسي المزمنة يمكن أن يؤدي إلى أكثر استقرارا القصبي فرط النشاط. عوامل الخطر المهيئة لظهور hyperreactivity الشعب الهوائية هي مع متلازمة التهاب القصيبات المسد، الشذوذات المناعية المحتملة ذات طابع عام والمحلية، وأمراض الجهاز العصبي، التأتبي "المزاج"، والتغييرات المفرطة التصنع من العليا والتهابات الجهاز التنفسي. ونتيجة لذلك، في بعض المرضى ROB يمكن أن يؤدي إلى الربو أو على الأقل مخاطر عالية من تطورها. في الأطفال الذين يعانون ROB، تاريخ من تأتب و3 أو أكثر من نوبات انسداد الشعب الهوائية يجب أن يثير الشكوك الطبيب بخصوص وجود الربو. أعراض التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة تفاقم ROB يحدث في سياق السارس والتهاب الشعب الهوائية الانسدادي الحادة. عند وجود العدوى الناجمة عن المتدثرة، قد يكون هناك التهاب الملتحمة والتهاب في الحلق مع نسيج محبب وضوحا في الجزء الخلفي من الحلق، تضخم الغدد الليمفاوية في الرقبة، والسعال المستمر خلال حمى معتدلة، وأخيرا، وعرقلة الشعب الهوائية. في المقابل، يتميز عدوى الميكوبلازما زيادة في درجة حرارة الجسم إلى 38 درجة مئوية أو 39 درجة مئوية، وأعراض تشابه تلك سكر (الخمول وربما القيء)، أعراض vegetodystonia (شحوب، وهو نمط الرخامي لتلوين الجلد، والتعرق)، انخفض الفقراء التنظيف عن طريق الفم من البكتيريا وتجفيف الأغشية المخاطية، وإنتاج المخاط والتهاب الأنف والبلعوم، وصعوبة في التنفس عن طريق الأنف. سبعون في المئة من المرضى الذين لديهم الأدلة الشعاعية للتغيرات في الجيوب [16، 17]، على الرغم من أن سريريا، وأعرب عن التهاب الجيوب الأنفية ضعيفة. واحدة من أبرز الأعراض من ROB مع التهابات الميكوبلازما هو مؤلم، والسعال الجاف الذي يمكن أن يسبب القيء ويؤدي إلى اضطراب النوم وثم يتطور إلى متلازمة انسداد بكل مظاهره. في 50٪ من المرضى الذين يعانون من عدوى الميكوبلازما، لا موسعات القصبات ROB لا توفر الإغاثة [+18 - 21]. Masgutova برنامج التكامل المنعكس neurosensorimotor وقد استخدم MNRI منذ عام 1989 في روسيا وأوروبا، وفي الآونة الأخيرة، في بلدان أخرى لعلاج الأفراد مع أنواع معينة من السيارات أو تطوير رد الفعل العجز، واضطرابات السلوك، واضطرابات الكلام أو تطور اللغة، أو صعوبات في التعلم. لقد كان لدينا تجربة السريرية التي MNRI يعزز النمو العصبي عند الأشخاص ضعاف وتمكنهم من دمج الحركات الأساسية، وردود الفعل، نظم التنسيق، والمهارات التي تمكن الأداء الأمثل، والتنمية، والتعلم. لقد وجدنا أن العلاج مع MNRI يحفز أنماط لا ارادي أن توقظ الذاكرة الحسية، وهو ما ثبت بما ينعكس ايجابيا على القوة البدنية والنشاط المناعي، والمعرفية والعاطفية والاجتماعية، والقدرات الحركية. وباختصار، يستند MNRI على التمارين والتقنيات (repatterning، إعادة التأهيل، وإعادة ترميز) التي تنطوي على تكرار أنماط المنعكس ديناميكية والوضعي. تحفيز تلك ردود الفعل يحيي آثار الذاكرة الحركية وراثية وينشط آليات دفاعية فطرية نظام الجسم والدماغ. تمارين MNRI تحفيز الموارد الفطرية مثل التنظيم الذاتي، ومقاومة الإجهاد، وتنظيم الجهاز المناعي. Repatterning، التي سهلت أيضا من قبل التدريبات، ينطوي على تحفيز وظائف "الدفاع" للمناطق الدماغ أقل، وتوسيع الروابط بين الخلايا العصبية، ونمو شبكات العصبية، myelinization، وخلق مسار العصب الجديد، كما هو موضح قبل Sechenov [+22 - +25] Virella وآخرون. [26] وAnokhin [27، 28]. نحن التحقيق في الفرضية القائلة بأن MNRI يمكن أيضا تعزيز وظيفة الجهاز المناعي في الأطفال الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي المزمنة مثل ROB. لقد وجدنا أن هؤلاء المرضى غالبا ما تظهر العجز التنموية السيارات، والمهارات الحركية الأساسية الفقيرة، و / أو ردود الافعال الشاذة. في هؤلاء الأفراد، التنفس يؤدي إلى فرط التوترية أو نقص الضغط على العضلات والأربطة وينتج عدم كفاية آليات الحماية والبقاء على قيد الحياة وأعرب في أنماط المنعكس ملموسة nonintegrated. هو ضعف العلاقة المتبادلة بين الجهاز التنفسي، والعضلات، ونظم المحركات الأساسية، وتطوير أنماط رد الفعل لدى هؤلاء المرضى والفقراء. المواد والأساليب المشاركين في الدراسة في الفترة من سبتمبر 2004 إلى سبتمبر 2005، قمنا بتقييم آثار عدة برامج MNRI (neurostructural، والسيارات، والتكامل لا ارادي، العلاج عن طريق اللمس، repatterning لا ارادي، والتنفس المنعكس، والتكامل المنعكس البصري والسمعي) في 60 طفلا (30 فتاة و 30 صبيا) الذين تتراوح أعمارهم بين 2 و 13 عاما) الذي ROB تم تأكيد والذين عولجوا إما مريضا أو العيادات الخارجية في العيادات وارسو للمعهد سفيتلانا Masgutova الدولية وعلى مستشفى الجمهورية Cuvatov السريرية في اوفا، روسيا. وكان تشكيل مجموعات الدراسة على النحو التالي: • المجموعة 1، 15 من الأطفال الأصحاء (8 الفتيان والفتيات 7) الذي شغل منصب السيطرة على المجموعة • المجموعة 2، 30 طفلا (16 الفتيان والفتيات 14) الذي كان بمثابة الأساس، قبل العلاج أو أي علاج المجموعة 3، 15 طفلا (8 الفتيان والفتيات 7) الذين كانوا في البداية جزءا من المجموعة 2 وذهب لتلقي العلاج القياسية • • المجموعة 4، 15 طفلا (8 الفتيان والفتيات 7) الذين كانوا في البداية جزءا من المجموعة 2 وذهب إلى أن تعامل مع كل MNRI والعلاج من تعاطي المخدرات القياسية الدراسة تم فحص 60 مريضا في سن 2-13 سنة، من بينهم 32 الفتيان والفتيات 28 في تشخيص مؤكد من التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة. وشملت المجموعة الضابطة 15 أطفال أصحاء (8 الفتيان والفتيات 7). تم تشكيل مجموعات المرضى التالية لتحليل فعالية العلاج: المجموعة 1 - المجموعة الضابطة، 15 طفلا مجموعة 2-30 الأطفال، تم تقييم الحالة قبل العلاج مجموعة 3-15 الأطفال الذين تلقوا العلاج الطبي التقليدي مجموعة 4-15 الأطفال، الذين تلقوا العلاج جنبا إلى جنب عن طريق العلاج الطبي وMNRI. وكانت جميع مجموعات متساوية في الجنس والعمر (الشكل 1). تحليل عوامل الخطر لالتهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة في الأطفال فحص يعتبر التاريخ المؤلفة من فترة ما قبل الولادة، حالة التدخين الأم في فترة الحمل والوراثة خطر من الأمراض القصبية والرئة. أيضا تحليل تعتبر الوراثة خطر في atopia وأمراض الحساسية عند الأطفال، غير المواتية في المنزل الصغير البيئة والتدخين السلبي من الأشهر الحياة الأولى (الجدول 1). تم التحقق التشخيص وفقا لمجمع معايير الروتينية: سوابق المريض والأعراض السريرية لعدوى الجهاز التنفسي (الكحة الاسعار المنخفضة للمنتجين، وضيق التنفس مع زفير الصعب، ونشر الاضطرابات auscultative، مثل rales الجافة و / أو رطبة) والمعلمات من المباح الشعب الهوائية التي peakfluorometry و / أو قياس التنفس. تم تقييم معدل الأعراض السريرية للانسداد الشعب الهوائية عن طريق نظام 4 نقاط (الجدول 2). وقد تم توثيق الاضطرابات انسداد الشعب الهوائية التي peakfluorometry و / أو بيانات قياس التنفس في بداية وديناميات العلاج. ويعرض الجدول 3 أطفال القطعان داخل المجموعات وفقا لشدة متلازمة القصبية الانسداد. لتقييم الطابع العكسي للالقصبية-عرقلة استخدمت الدراسة ذروة التألق و / أو قياس التنفس مع تحقيقات broncodilatation: قبل و40 دقيقة بعد استنشاق حل Berodual في (بروميد إبراتروبيوم + فينوتيرول هيدروبروميد) من خلال البخاخات. تم تشخيص ROB في المشاركين في الدراسة من قبل الأطباء في المستشفيات سواء في معهد سفيتلانا Masgutova الدولية للتنمية حركة وأنواع التكامل في وارسو، بولندا، أو في مستشفى الجمهورية Cuvatov السريرية في روسيا على أساس الأعراض والنتائج من الفحص السريري، والمختبرات اختبار وتحليل الشعاعي [25، 26] باستخدام تصنيف أشكال التهاب الشعب الهوائية وأمراض الرئة لدى الأطفال [27] المقبولة في المؤتمر طب الأطفال وأمراض الرئة المتخصصين في موسكو في عام 1995 [+28 - 35]. من 60 مشاركا، وكان 8 الآباء الذين يدخنون. ومع ذلك، ذكرت الآباء أبدا التدخين في الأماكن المغلقة أو في جميع أنحاء أطفالهم. ولم يكن لدى أي من المشاركين أعراض الأمراض من ROB. وقد وافق دراستنا من قبل الأكاديمية الروسية للعلوم الطبية مجلس المراجعة المؤسسية (عدد 07.121 تسجيل) في 15 فبراير 2005، وجددت الموافقة على 10 مايو، 2008. جميع الأطفال وأولياء أمورهم قدم موافقة مستنيرة للمشاركة في الدراسة . العلاج من تعاطي المخدرات القياسية مجموعات الدراسة 1 و 2 لم تتلق العلاج من تعاطي المخدرات. الأدوية التي تعطى للمجموعات 3 و 4 تتكون من bronchospasmolytic، لزعزعة الاستقرار الغشاء، أو الأدوية المضادة للالتهابات و / أو المضادات الحيوية، والتي تم الموافقة على استخدامها في الأطفال من قبل وزارة الروسي للحساسية. تألف كلاء bronchospasmolytic للمشتقات الزانثين (حل 24٪ من أمينوفيلين في أمبولات 1.0 مل للحقن العضلي (1.0 مل) مرة واحدة يوميا أو 0.15- ز أقراص أمينوفيلين (0.15 ز) مرة واحدة أو مرتين في اليوم. ومدة تأثير تباينت وكلاء bronchospasmolytic 12-24 ساعة. كان وصفه أمينوفللين بالإضافة إلى الأدوية broncholytic أخرى (في المقام الأول المستقبلات منبهات والمخدرات مضادات الكولين، مثل 0.3 غرام من الثيوفيلين [Theopec] أو 0.1 غرام من Theobiolong [1-3 مرات في اليوم]) وكانت تدار عن طريق الاستنشاق. كانت العقاقير المضادة للالتهابات استخدام 3٪ اسيتامينوفين (Efferalgan) الحل (شراب)، و 15 ملغ / كغ 3 مرات في اليوم، وأقراص حمض الميفيناميك، 0.25 غرام 3 مرات في اليوم. المضادات الحيوية تدار والسيفالوسبورين (Dardum)، 50-200 ملغ / كغ مرة واحدة يوميا عن طريق الحقن العضلي، وماكروليد (Oletetrinum) أقراص، 0.012 غرام 4-6 مرات في اليوم. واستخدمت جميع الأدوية لمدة 7 إلى 10 أيام، وهذا يتوقف على حالة كل مريض. العلاج معقدة من متلازمة انسداد شملت: - المضادة للبكتيريا المخدرات (أموكسيسيلين جنبا إلى جنب وحمض clavulanic (Amoxi-Clav)، أزيثروميسين، كلاريثروميسين)؛ - استنشاق β2-مضادات للتأثير السريع (فينتولين) أو مزيج من (فينوتيرول + الابراتروبيوم بروميد)، β2 خصم والمخدرات مضادات الكولين. - الكورتيزون عن طريق الاستنشاق (بوديزونيد). - تم استنشاق الأدوية التي الغمامات باري (ألمانيا) واومرون (اليابان). النظام وتمديد العلاج ROB يتفق مع الصف في شدة وقدمت وفقا للمبادئ التالية: - تم تقييم حالة المريض ويتم تقييم الأعراض العشرات. - تم تعديل العلاج السابقة (جرعة broncholytics، الطريق الادارة والوقت بعد الإدارة السابقة)؛ - تمديد العلاج يتفق مع شدة انسداد الشعب الهوائية. في سياق الفحص يمكن تعديل درجة الخطورة. - رصد الأعراض السريرية وpeakfluorometry و / أو قياس التنفس (في البداية وأثناء العلاج على أيام 1 و 5 و 10). علاج التهاب القصبات الانسداد المتكرر كانت الطبقة الدواء كنا لعلاج الانتكاس ROB نفسها المستخدمة لالتهاب الشعب الهوائية الانسدادي الحاد: موسعات الشعب الهوائية. كان واحدا من موسعات القصبات الثيوفيلين. اسم الثيوفيلين هو من الشاي الكلمة اللاتينية التي تعني "أشجار الشاي" وكلمة اليونانية phyllon، ومعنى "ورقة". الميثيل، قصبي أخرى التي استخدمناها، هو مشتق البيورين وهو قلويد الحلقية غير المتجانسة ذات الأصل النباتي وجدت في الصينية سينينسيس الكاميليا وباراغواي هولي (البلوط الأخضر paraguariensis)، وكلاهما من التي تستخدم في إعداد الشاي. موسعات القصبات • تمنع فوسفودايستريز وزيادة تراكم أحادي فسفات الأدينوزين الحلقي في الأنسجة، ومنع الأدينوزين (البيورين) مستقبلات • تقليل تدفق أيونات الكالسيوم عبر قنوات أغشية الخلايا، وبالتالي تقليل النشاط مقلص من العضلات الملساء. هذا يريح عضلات القصبات الهوائية والأوعية الدموية (وخصوصا الأوعية الدموية الدماغية)، والجلد، والكلى • الحث على توسع الأوعية المحيطية • استقرار غشاء الخلايا البدينة، التي تحول دون الإفراج عن وسطاء من الحساسية • زيادة إزالة مخاطي هدبي، وتحفيز تقلص الحجاب الحاجز، وتحسين وظائف الجهاز التنفسي وظيفة من وظائف العضلات بين الضلوع، وتنشيط الجهاز التنفسي • تطبيع وظيفة الجهاز التنفسي وتعزيز تشبع الأكسجين في الدم وتركيز أقل من ثاني أكسيد الكربون • تعزيز التهوية في نقص بوتاسيوم الدم • تحفيز نشاط القلب، وزيادة معدل ضربات القلب وقوة وانتظام ضربات القلب، وزيادة تدفق الدم في الشريان التاجي والطلب على الاكسجين عضلة القلب • انخفاض الأوعية الدموية لهجة (وخصوصا الأوعية الدموية الدماغية والأوعية الدموية في الجلد والكلى) • خفض المقاومة الوعائية الرئوية وانخفاض ضغط الدم في الأوعية الدقيقة نظام زيادة تدفق الدم الكلوي ويكون لها تأثير مدر للبول معتدل • توسيع الصفراوية خارج الكبد القناة • تمنع تراكم الصفائح الدموية (تمنع عامل تفعيل الصفائح الدموية والبروستاجلاندين E2α) وزيادة المقاومة للتشوه خلايا الدم الحمراء (تحسين الخواص الريولوجية من الدم)، والحد من تجلط الدم ودوران الأوعية الدقيقة تطبيع وقد وصفه موسعات الشعب الهوائية لعرقلة الشعب الهوائية من أي منشأ: الربو القصبي (الدواء المفضل لعلاج الربو، بما في ذلك ممارسة النشاط الربو، كما أنها تستخدم كأداة إضافية في أشكال أخرى من الربو)، مرض الانسداد الرئوي (التهاب القصبات الهوائية المزمن المزمن، انتفاخ الرئة) وارتفاع ضغط الدم الرئوي، القلب الرئوي، وذمة في أمراض الكلى (كجزء من العلاج المركب)، وتوقف التنفس أثناء النوم. واستخدمت الأدوية التالية لعلاج مرض الانسداد الرئوي المزمن عندما كانت حالة المريض مستقرة: • بروميد الابراتروبيوم (Atrovent) • سالبوتامول (فينتولين) • فينوتيرول (Berotec) • الأدوية طويلة المفعول: بروميد تيوتروبيوم (سبيريفا)، سالميتيرول (Serevent)، فورموتيرول (Symbicort) • الستيرويدات المستنشقة: بيكلوميثازون دي بروبيونات (Beclazone)، فلوتيكاسون (Flixotide)، بوديسونايد (Pulmicort) • Mucolytics: أسيتيل (Fluimucil) استخدمت يلي لعلاج المرض الحاد: • موسعات الشعب الهوائية • المضادات الحيوية: أموكسيسيلين جنبا إلى جنب وحمض clavulanic (Amoxi- Clav)، أزيثروميسين، كلاريثروميسين • الستيرويدات (بريدنيزون) • الأكسجين تطبيق التكامل Masgutova neurosensorimotor لا ارادي خضع جميع المشاركين في الدراسة تقييم MNRI الأولي خلالها ردودها على 34 أنماط لا ارادي، بما في ذلك الرقبة غير المتكافئة منشط، شد اليد، الساق عبر انثناء والإرشاد، جالانت الشوكي، بيريز الشوكي، مورو، وروبنسون فهم اليد. شملت مجموعات اختبار 15-25 الشيكات من كل المنعكس. تم تقييم الأنماط الأساسية لا ارادي في كل خمس المعلمات: سلامة دائرة علم وظائف الأعضاء، وتسلسل واتجاه الحركة وتوقيت وسرعة وكثافة والتماثل، على النحو التالي: • دائرة علم وظائف الأعضاء: رد الفعل الدائرة من ثلاثة أجزاء يجب تفعيل استجابة المحرك بالضبط مثلها في ذلك مثل الأصيل نمط المشفرة وراثيا المرتبطة التحفيز الحسي محددة. • تسلسل والتوجيه: ويتكون كل المنعكس من تسلسل معين من الحركات التي تبلغ ذروتها في وضعية أو واستمرت باعتبارها حركة في اتجاه معين. ينسق نظام العضلات هذه المواقف والحركات. • التوقيت والسرعة (الكمون): الدائرة لا ارادي تتضمن المدخلات الحسية ومعالجة الدماغ، واستجابة المحرك. استجابة المحرك يجب أن يبدأ جزء صغير من الثانية بعد التحفيز الحسي. كما يجب أن تكمل نمطها بسرعة كافية لأداء وظيفتها الحمائية. رد رد الفعل تأخر أو بطء يمكن أن يؤدي إلى الإصابة. • الكثافة: كثافة منعكس هي كمية الطاقة المادية المقدمة من نظام العضلات والأربطة في استجابة لحافز. يجب أن تعكس قوة هذا الرد شدة التحفيز. مفرط، قاصر النشاط، وردود areflexive غير كافية. • التماثل: يمكن رؤية التماثل في منظمة ثنائية من نمط والتوجيه، والتوقيت، وشدة رد الفعل. • إجراءات حركة برمجة خاصة لنظام لا ارادي • أداء سيارات • دقة الإدراك الحسي والاستجابة الحركية • اتجاه استجابة رد الفعل (عمل المخصوص اختلال النظام، مرضي، أو غائبا) • مستوى الاستجابة، والتي تعتمد على لهجة والنشاط (عادي، بشكل مفرط، قاصر النشاط، أو areflexive) من العضلات والأربطة • التماثل في أنماط رد الفعل بين اليمين واليسار على جانبي الجسم تم تعيين استجابة كل مشارك على درجة أساسية تتراوح 0-20، كما هو مفصل في الجدول رقم 1. أثناء الدراسة، والمجموعات 1 و 2 و 3 لم تتلق العلاج MNRI. في المجموعة 4، MNRI (neurostructural، والسيارات، والتكامل المنعكس، وكلاهما التكامل المنعكس البصري والسمعي العلاج عن طريق اللمس ؛؛ repatterning لا ارادي) قد أنجز مباشرة بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية (التي سبق وصفها) كانت تدار، تعديلها وفقا لكل مشارك السريرية الحالة. المتغيرات تقييم في جميع المشاركين، قمنا بتقييم التغيرات في معالم العدلة النشاط البلعمة، مجموعات سكانية فرعية من الخلايا الليمفاوية، تترازوليوم نتروبلو (NBT) المستوى، مستوى خلوى في الطرفية الكريات البيضاء وحيدة النواة في الدم (PBMLs)، ومستوى الكورتيزول بلازما الدم، سواء قبل بدء العلاج MNRI وبعد يوم من العلاج MNRI توقفت. النشاط البلعمة العدلة تم تقييم العدلات النشاط البلعمة لتحديد نسبة الخلايا الملتهمة، وعدد بلعمية المطلق، وعدد بلعمية، ومتوسط ​​عدد جزيئات اللاتكس داخل الخلايا (نتيجة لتقسيم جميع الجزيئات بلعمية من قبل عدد من الخلايا المشاركة في البلعمة)، وأكلة مؤشر، وعدد من جزيئات اللاتكس تحسب ل1 بلعمية. حجم الجسيمات تراوحت اللاتكس 1،3-1،5 مم. قدرنا قدرة البالعات لاستيعاب NBT في تحقيق NBT عفوية وNBT التحقيق حفز (باستخدام zimozan [Zycanum]) [36]. زيموزان هو الخميرة البوليمر الحيوي غشاء، خميرة cerevisi التي تتكون أساسا من السكريات. مجموعات سكانية فرعية من الخلايا الليمفاوية وقد تم تحديد مجموعات سكانية فرعية من الخلايا الليمفاوية التدفق الخلوي التي يقوم بها مختبرات Caltag (إينفيتروجن، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية). تم غسلها الخلايا في الفوسفات مخزنة المالحة الباردة وكانت ملطخة مع الأجسام المضادة مترافق إلى ثيوسيانات فلوريسئين وفيكوإيريترين وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. ثم غسلها تعليق مرتين في الفوسفات مخزنة المالحة الباردة. وتم قياس النتائج مع تدفق عداد الكريات (FACSCalibur، بيكتون، ديكنسون والشركة، فرانكلين البحيرات، NJ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحديد البوابة خلية السكان من قبل الجبهة والجانب على ضوء تشتت وحجم الخلية. كانت هناك 10000 الخلايا في البوابة. أجريت التحليلات الإحصائية مع WinMDI (الإصدار 2.8، مايكروسوفت، ريدموند، واشنطن، الولايات المتحدة الأمريكية). مستوى خلوى تم تقييم مستوى خلوى في PBMLs باستخدام فحص immunoenzyme مع المجمعات الموحدة لتعريف السيتوكينات. نحن المحتضنة PBMLs (1 × 10 6 خلايا) في مستنبت (RPMI-1640) لمدة 24 ساعة مع 5 ميكروغرام / مل من راصة دموية نباتية (PHA). لم المجموعة الضابطة من PBMLs لا يحتوي PHA (الحث عفوية السيتوكينات). الدم مستوى الكورتيزول البلازما تم تقييم مستويات الكورتيزول بلازما الدم قبل وبعد العلاج في جميع الفئات 4 باستخدام الفحص المناعي (Immulite 2000 عدة الكورتيزول، DPC، لوس أنجلوس، CA، الولايات المتحدة الأمريكية). تقييم إحصائي أجريت جميع التقييمات الإحصائية مع مان ويتني U اختبار، وذلك باستخدام STATISTICA (الإصدار 6.0؛ ستات لينة المؤتمر الوطني العراقي، تولسا، OK، الولايات المتحدة الأمريكية). قيم P (M ± SD) تعتبر أقل من 0.05 كبيرا. النتائج النشاط البلعمة العدلة وكان سبب ROB عن طريق عدوى فيروس الجهاز التنفسي الحادة في 94٪ من المشاركين في الدراسة والتي تعقدت بسبب عدوى بكتيرية في 72٪ من هؤلاء الأفراد. تعرض أعضاء مجموعة 3 انخفاض ملحوظ إحصائيا في مستوى العدلات phagocytosing وقدرة استيعاب بها (جدول 4) بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية فقط. بالإضافة إلى ذلك، لوحظ وجود زيادة ذات دلالة إحصائية الخلايا phagocytosing وفي مؤشر البلعمة في مجموعة 4 بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية بالإضافة إلى MNRI (الجدول 5). تعرض أعضاء مجموعة 3 انخفاض ملحوظ إحصائيا في النشاط جراثيم من الكريات البيض نتيجة لتثبيط آليات ميكروبات التي تعتمد على الأكسجين (الجدول 5) بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية فقط، وعند مقارنة مع مجموعة 1، أظهرت مجموعة 3 انخفاضا الرقم القياسي العام لتحفيز كرات الدم البيضاء في المرضى الذين يعانون من ROB، مما يدل على تثبيط الجهاز المناعي للتفاعل. عاد مؤشر إلى أن القيم ضمن المعدل الطبيعي بعد الانتهاء من العلاج MNRI في مجموعة 4. السكان الفرعي من الخلايا الليمفاوية وكشف تقييم بنية سكانية فرعية لمفاوية في مجموعات 2 و 3 انخفاض عدد CD3، CD4، CD8، القاتلة الطبيعية، والقاتلة الطبيعية الخلايا التائية قبل وبعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية (الجدول 6). زيادة عدد الخلايا معربا عن جزيئات في وقت مبكر (CD25) وأواخر (مستضد الكريات البيض البشرية DR-1 [-DR HLA]) لوحظت تفعيل وزيادة في B-اللمفاويات والخلايا T-التنظيمية الأرقام مرة أخرى في مجموعة 3 قبل وبعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية. بعد أعضاء مجموعة 3 قد أكملت العلاج من تعاطي المخدرات القياسية، بدأ النمط الظاهري خلية لتطبيع تدريجيا، على الرغم من أنه لا يزال لاحظ تعزيز الجهاز المناعي للتفاعل. في المجموعة 4، اختفى التفاعل بعد العلاج MNRI. مستويات CD3 والخلايا القاتلة الطبيعية (بعد MNRI بالإضافة إلى العلاج بالعقاقير القياسية) كانت أعلى بكثير مما كانت عليه في المجموعة 3 (بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية وحدها)، ومستويات HLA-DR وخلايا T التنظيمية كانت في مجموعة 4 أقل في مجموعة 4 من في مجموعة 3. إنتاج PBML انترلوكين 1β (IL-1β)، انترفيرون γ (IFN-γ)، وIL-12 بنسبة عاملا من 2.3 في مجموعات مع ROB (P <0.01).لم المجموعة 4 لا تختلف كثيرا عن المجموعة 1 (المجموعة الضابطة) ولكن لم تختلف كثيرا عن مجموعة 3 (العلاج من تعاطي المخدرات القياسية). كانت IL-4 و IL-10 مستويات أعلى في المجموعات 2 و 3. المجموعة 4 (MNRI زائد القياسية علاج إدمان المخدرات) لا تختلف كثيرا عن المجموعة الضابطة. في المجموعة 3 كان إنتاج IL-4 و IL-10 أعلى منه في المجموعة 4 (p <0.05)، وبالتالي تحفيز إنتاج IL-4 وكان 1.2 أضعاف في مجموعة من 3 في المجموعة 4 (P> 0.05). الدم مستوى الكورتيزول البلازما وكانت مستويات الكورتيزول في الصباح والمساء عينات بلازما الدم من مجموعة 2 و 3 أقل بكثير من تلك الموجودة في المجموعة 1 (الشكل 2). وكانت معاملة Immunocorrective مع MNRI بالإضافة إلى العلاج بالعقاقير القياسية أدى إلى زيادة تدريجية في مستوى الكورتيزول من أعضاء جماعة 4. ومع ذلك، في مجموعة 3 مستوى الكورتيزول من العينة صباح اليوم بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية أقل بكثير من العينة المأخوذة من مجموعة 4 بعد العلاج MNRI قد أضيفت إلى نظام المعالجة. نقاش فقد كان من تجربتنا أن المرضى الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي المزمن غالبا ما يكون اضطراب في الجهاز المناعي. بعد أن أضاف العلاج MNRI للعلاج بالعقاقير القياسية في مجموعة 4، لوحظت التغييرات التالية في المعلمات المناعي: انخفاض مستويات CD3، CD4، CD8، CD16، والقاتلة الطبيعية الخلايا التائية وزيادة مستويات CD19، CD25 علامات تفعيل و HLA- DR، وخلايا CD4 immunoregulatory و CD25. وينظم الخلل في عدد من القطعان الخلية عن طريق العلاج MNRI، وبعد ذلك بلغ عدد سكان الخلايا معربا عن CD3، CD4، CD19، CD25 وعلامات المعدل الطبيعي .في المجموعة 4، تم تصحيح مستوى الكورتيزول غير كاف إلا بعد العلاج MNRI. في الأعضاء المجموعة 3، التي لم تتلق سوى العلاج من تعاطي المخدرات القياسية، كان مستوى الكورتيزول 1،2 حتي 1،35 مرات أقل مما كانت عليه في مجموعة 4. ومن المعلوم أن المضادة للالتهابات والجهاز المناعي آثار هرمون الكورتيزول في التركيز الفسيولوجي ترتبط مع التوليف lipocortin، التي كتل تشكيل أكسيجيناز شحمية وانزيمات الأكسدة الحلقية (منتجات من حمض الأراكيدونيك) [37].المرحلة الكيميائية المرضية من ROB يؤدي إلى إطلاق واسعة من الليكوترين B 4 (LTB 4)، والتي لها دور مهم في تشكيل عوائق الشعب الهوائية [38]. تركيز الكورتيزول منخفضة في البداية في المرضى الذين يعانون من ROB قد تنظم غير فعال في تشكيل LTB 4 ، الجلوبيولين، ومؤثرات أخرى، وبالتالي بالتالي يؤدي إلى نوع من الخلايا تي المساعد 2 (TH2) الاستجابة [39]. ويؤكد هذه الحقيقة عن طريق انخفاض في معدل إنتاج proinflammatory سايتوكاين IL-1β والتنظيمية IFN-γ، و IL-12 التنظيمي وتعزيز مستوى السيتوكينات المضادة للالتهابات IL-4 و IL-10 في الطرفية الدم وحيدات النوى ثقافات الكريات البيض في الأطفال الذين يعانون ROB (جدول 4). وعلى الرغم من تغيير إيجابي في مستويات خلوى في المشاركين الذين تلقوا العلاج من تعاطي المخدرات القياسية، وكان تركيز هذه السيتوكينات في مستنبت الكريات البيض يختلف كثيرا عن ذلك في السيطرة على المجموعة. عندما أضيف العلاج MNRI إلى نظام العلاج، ومستويات السيتوكينات التنظيمية والمضادة للالتهابات تطبيع.ولذلك، بعد العلاج من تعاطي المخدرات التقليدية وعلى الرغم من تحسن سريري، واصل أعضاء مجموعة 3 لعرض من أعراض عدم كفاية الكورتيزول وتثبيط وقت واحد من الحصانة T- الخلية. بعد إضافة MNRI للعلاج بالعقاقير القياسية ل ROB، لوحظ وجود زيادة ذات دلالة إحصائية في العدد المطلق للعدلات segmentonuclear في مجموعة 4 (جدول رقم 5). MNRI في تركيبة مع العلاج القياسي أدى إلى زيادة في النشاط استيعاب العدلات وتطبيع وظيفة الكريات البيض التمثيل الغذائي، وكلاهما مما أدى إلى تحسن مؤشر التحفيز للاختبار NBT إلى قيمة ضمن المعدل الطبيعي (0،97 حتي 1،3). بالإضافة إلى ذلك، لوحظ وجود زيادة ذات دلالة إحصائية في عدد الخلايا معربا عن مستضدات التمايز والخلايا القاتلة الطبيعية (CD16). الخلايا القاتلة الطبيعية هي المؤثرات الرئيسية المناعة الفطرية، لديهم دور حيوي هام في آليات المراقبة المناعية (استهداف الخلايا السرطانية )، في تدمير الفيروسات والخلايا المصابة الطفيلي، وفي تنظيم وتمايز خلايا نخاع العظام (فإنهما ينفيان تنتشر بسرعة خلايا مكونة للدم) في الأشخاص الذين يعانون من رد فعل الكسب غير المشروع ضد المضيف [40]. بالإضافة إلى تأثير immunoregulating لها، وزيادة العلاجية MNRI مستوى الكورتيزول لتركيزات الفسيولوجية في مجموعة 4.IL-1β، الذي تنتجه الكريات البيض وحيدات النوى، ويعزز من إفراز هرمون قشر الكظر وأشارت glucocorticoids.38 نتائجنا أن العلاج MNRI ينشط كرات الدم البيضاء وحيدة النواة. وهكذا، مضيفا MNRI إلى نظام العلاج من تعاطي المخدرات القياسي ل ROB تحسين آثار عدم كفاية ان العلاج على خلايا الجهاز المناعي وزيادة الاستقطاب الاستجابة المناعية لنوع TH1.تم رصد الأطفال في هذه الدراسة لمدة 1 سنة بعد أن تم الانتهاء من العلاج. حدث تفشي ROB في كل مجموعة على النحو التالي: • المجموعة 1 (المجموعة الضابطة): لا تفشي ROB • المجموعة 2 (خط الأساس، قبل العلاج): تم نقل نصف لمجموعة 3 ونصف تم نقلها إلى مجموعة 4 • المجموعة 3 (العلاج من تعاطي المخدرات القياسية): كان ROB بمتوسط ​​7.8 مرات في السنة قبل العلاج، بعد 1 سنة من العلاج الطبي، ومتوسط ​​انخفض إلى 6 مرات في السنة، لا فرق دال إحصائيا • المجموعة 4 (العلاج من تعاطي المخدرات القياسية بالإضافة إلى MNRI): كان ROB ما معدله 8 مرات قبل العلاج باختصار، كشفت نتائج دراستنا أن مستوى IL-1β التي تنتجها كريات الدم البيضاء وحيدة النواة كان أعلى بشكل ملحوظ بعد العلاج MNRI بالإضافة إلى العلاج بالعقاقير القياسية من بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية وحدها. ونقترح أن MNRI ينظم إنتاج ايل 1β والسيتوكينات التنظيمية IFN-γ و IL-12، وبالتالي يؤثر إيجابيا على تفاعل المناعي، والغدد الصماء، والجهاز العصبي، وفي نهاية المطاف التوازن. لا يمكننا استبعاد الأثر المباشر لل MNRI على الدورة الدموية والجهاز الليمفاوي، لأن نتائجنا أظهرت انخفاضا كبيرا في ارتفاع ضغط الدم في العضلات، وأعراض مائي، تشنجات السفينة، والتهاب الأنسجة بعد العلاج MNRI. نقترح أن إضافة MNRI لعلاج الأطفال الذين يعانون من ROB يمكن تصحيح آليات نظام المناعة الضعيفة، والمساهمة في حل الأمراض التنفسية المزمنة، وتمكين مغفرة أطول من المرض المتكرر. ومع ذلك، هناك حاجة لدراسات إضافية من آثار العلاج MNRI على آليات تنظيم المناعة، والغدد الصماء، وظيفة الجهاز العصبي في الأطفال الذين يعانون ROB.

 

[رافت ابراهيم]

 

Masgutova التكامل neurosensorimotor المنعكس؛ MNRI. التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكرر. الخلايا الليمفاوية. السيتوكينات. الخلايا القاتلة الطبيعية مقدمة Masgutova التكامل neurosensorimotor لا ارادي وأمراض الجهاز التنفسي مرض الانسداد الرئوي المزمن هو السبب الرئيسي للوفاة والعجز في جميع أنحاء العالم. منذ عام 2000 في روسيا وأوروبا، والإصابة بالأمراض التنفسية المزمنة والتهابات وتيرة المستشفيات المطلوبة للتعامل معها زادت [1 - 3]. التهاب الشعب الهوائية هو واحد من أكثر الأمراض المعدية الأكثر شيوعا في الجهاز التنفسي لدى الأطفال. في الأشكال السريرية الحالية للالتهاب الشعب الهوائية وتشمل الحاد والمتكرر والمزمن [4]. الحادة (بسيطة) التهاب الشعب الهوائية هو شكل من أشكال التهاب حاد في غلالة المخاطية للقصبات مع عدم وجود علامات الرئة تتأثر الأنسجة. في معظم الأحيان التهاب الشعب الهوائية يتطور نتيجة لأمراض الجهاز التنفسي الحادة من مسببات مختلفة، مثل الفيروسية، البكتيرية، الفطرية، الطفيليات، أو مختلطة. الحاد التهاب الشعب الهوائية الانسدادي يتميز تضيق و / أو احتقان الجهاز التنفسي نتيجة للذمة وتضخم من غلالة المخاطية، والإفراط في إفراز المخاط أو تشنج قصبي الذي يحدد صورة سريرية محددة. في سن متلازمة معرقلة 3 يتحدد أساسا من الإفراط في إفراز المخاط الكثيف اللزج وتضخم من غلالة المخاطية. تشنج قصبي يتطور في كثير من الأحيان في الأطفال أكثر من 4 سنوات. في حالة التهاب الشعب الهوائية المتكررة مع متلازمة bronchoobstructive (أكثر من 2-3 في السنة) نموذج يمكن تعريفها بأنها التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكرر (ROB). ويعتقد أن الاضطرابات تنظيم الجهاز المناعي للمساهمة في تطوير وتكرار الأمراض التنفسية الالتهابية المزمنة [5، 6]. على سبيل المثال، عند الأطفال، ويرتبط ROB مع الجلد التأتبي والأمراض الالتهابية المعدية، والأطفال المرضى، والخصائص التشريحية والفسيولوجية في الجهاز التنفسي، وتنظيم الخضري، وغير ناضجة المخاطية في الجهاز التنفسي الحواجز غالبا ما تعيق تشخيص الربو القصبي. ويرتبط التهاب الجهاز التنفسي المتكررة مع النشاط immunopathological وخلل في النظام الكظري النخامي [7، 8]. قصور الغدة الكظرية الحاد، وهو عامل في تطور أمراض مثل ROB، يمكن أن تتطور في الأفراد الذين يعانون من نوبات متكررة من أمراض الجهاز التنفسي. ولذلك فمن المهم لدراسة التفاعل بين الجهاز العصبي وجهاز المناعة، لأن هذه العلاقة تؤثر على مستويات proinflammatory والسيتوكينات والهرمونات المضادة للالتهابات (خصوصا الكورتيزول) في الأشخاص الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي مثل ROB. في هؤلاء المرضى، والعلاج التقليدي في كثير من الأحيان غير فعالة وقد لا يؤدي إلى مغفرة طويلة. منذ عام 1999، تم التركيز على استخدام مناعة في علاج ROB، على الرغم من الأساليب العلاجية الأخرى كانت فعالة [أيضا +9 - 11]. نحن التحقيق في الآثار المترتبة على واحدة من هذه المعالجة البديلة. قارنا آثار العلاج من تعاطي المخدرات القياسية بالإضافة إلى MNRI مع تلك العلاج من تعاطي المخدرات وحدها على وظيفة النظام والكورتيزول مستويات المناعة لدى الأطفال مع ROB. أمراض مثل ROB تجعل من الصعب الزفير جميع الهواء من الرئتين. مسببات ROB يلعب دورا في استمرار فيروسات الجهاز التنفسي مثل فيروس الجهاز التنفسي المخلوي والفيروسات الغدية، وأنه يلعب الآن دورا متزايدا في تطوير التهابات الشعب الهوائية التي تسببها المفطورة الرئوية والكلاميديا ​​الرئوية. هي إلى حد كبير بسبب الخصائص التشريحية والفسيولوجية لنظامهم التنفسي انسداد الشعب الهوائية لدى الأطفال: ضيق في الشعب الهوائية، وتفتيت وhydrophilicity من الغشاء المخاطي للالقصبات الهوائية، ميلها إلى ذمة، وفرط الناتجة عن أي عملية الالتهاب الخلفية . لم مجتمع الدراسة لدينا لا تشمل الأطفال الذين يعانون من الربو أو الذين يعانون من المتلازمة التنفسية الحادة الوخيمة (سارس)، وهو التهاب فيروسي التهاب الشعب الهوائية الذي هو أيضا مرض الرئة المقيدة فيها الأطفال يجدون صعوبة في توسيع تماما رئاتهم بالهواء. التسبب في التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة معقد التسبب في التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة عند الأطفال. العوامل المعدية تلعب دورا رئيسيا في تحديد تطور المرض. تأثير الفيروس على الأنسجة غير ناضجة يمكن أن يؤدي إلى التهاب مزمن في القصبات حتى في مرحلة الطفولة المبكرة. التنفسي الحاد عدوى فيروس يسهل مضيفا التهاب بكتيري. تعتبر مسببات الأمراض الالتهابية رئيسية تكون المستدمية النزلية، Strеptococcus الرئوية ونزلي الموراكسيلة. وقد كشفت الدراسات التي H. النزلية، S. الرئوية يمكن أن تؤثر على ظهارة الهدبية وتفاقم وظيفة الأهداب. استنساخ الجراثيم يؤدي إلى تطور الالتهابات نتيجة لبنية القصبات الهوائية الضارة الذات وتفعيل أنزيمات الخلايا الالتهابية. ويضعف نتيجة لهذه العمليات إزالة مخاطي هدبي الذي يؤدي إلى panbronchitis والتهاب حوائط القصبات، يتوسط تشكيل المشوه التهاب الشعب الهوائية [12]. يمكن مسببات الأمراض داخل الخلايا، مثل الكلاميديا ​​والميكوبلازما استفزاز بداية مرض الانسداد القصبية أو يسبب تفاقم لها، حالة مزمنة وبالطبع شديد من المرض [13]. في الوقت الحاضر ليس هناك شك في أن علاج متلازمة القصبية-معرقلة (BOS) في الأطفال الذين يعانون من التهاب الجهاز التنفسي الحاد ينبغي أن تنظر مسببات المرض والتسبب في إعاقة الشعب الهوائية. ومن المعروف جيدا أن يتميز نشأة انسداد الشعب الهوائية بشكل رئيسي من قبل ذمة التهابية والمخاط الإفراط في إفراز. لذلك تشمل العلاجات BOS المسببة للأمراض وأعراض المضادة للالتهابات، broncholytic والعقاقير حال للبلغم [14]. ومع ذلك، ينبغي للعلاج تهدف أولا القضاء على أسباب المرض، مما أدى إلى BOS، أي في حالة التهابات الجهاز التنفسي - إلى القضاء على العوامل المسببة للأمراض المعدية. التلاعب الأكثر صعوبة، سواء من حيث التشخيص والعلاج، ويبدو أن علاج الأمراض القصبية الانسداد المتكررة المرتبطة مسببات الأمراض غير نمطية من التهابات الجهاز التنفسي (المفطورة الرئوية، الكلاميديا ​​الالتهاب الرئوي، وغيرها)، هو أن يرجع ذلك إلى قدرة استمرار هذه مسببات الأمراض و تأثير immunotropic غير المواتية. قد يؤدي العلاج الدوائي غير عقلاني لانتقال المرض في حالة مزمنة، في بعض الحالات الربو القصبي (BA) قد تتطور. كل ذلك يؤدي إلى انخفاض القدرة على العمل ونوعية حياة المرضى وتعزيز النفقات الاقتصادية الناجمة عن معالجة المرضى BA. وهكذا، كانت تهدف هذه الدراسة إلى تحديد العلاجية المثلى. الدراسات الحديثة [15] تبين أن السارس قد يستفز تطوير عابرة الشعب الهوائية شديدة التفاعل لمدة 4 إلى 6 أسابيع بعد ظهور المرض. الفيروسات تخترق مخاطية من القصبات الهوائية وتؤدي إلى تهيج النهايات العصبية. وهكذا، حتى بعد فترة النقاهة من المرض، والمرضى قد يعانون من أعراض من hyperreactivity القصبي (SAB) لمدة تصل إلى 1 في الشهر وربما تكون في خطر أكبر لتطوير ROB. وبؤر التهابات الجهاز التنفسي المزمنة يمكن أن يؤدي إلى أكثر استقرارا القصبي فرط النشاط. عوامل الخطر المهيئة لظهور hyperreactivity الشعب الهوائية هي مع متلازمة التهاب القصيبات المسد، الشذوذات المناعية المحتملة ذات طابع عام والمحلية، وأمراض الجهاز العصبي، التأتبي "المزاج"، والتغييرات المفرطة التصنع من العليا والتهابات الجهاز التنفسي. ونتيجة لذلك، في بعض المرضى ROB يمكن أن يؤدي إلى الربو أو على الأقل مخاطر عالية من تطورها. في الأطفال الذين يعانون ROB، تاريخ من تأتب و3 أو أكثر من نوبات انسداد الشعب الهوائية يجب أن يثير الشكوك الطبيب بخصوص وجود الربو. أعراض التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة تفاقم ROB يحدث في سياق السارس والتهاب الشعب الهوائية الانسدادي الحادة. عند وجود العدوى الناجمة عن المتدثرة، قد يكون هناك التهاب الملتحمة والتهاب في الحلق مع نسيج محبب وضوحا في الجزء الخلفي من الحلق، تضخم الغدد الليمفاوية في الرقبة، والسعال المستمر خلال حمى معتدلة، وأخيرا، وعرقلة الشعب الهوائية. في المقابل، يتميز عدوى الميكوبلازما زيادة في درجة حرارة الجسم إلى 38 درجة مئوية أو 39 درجة مئوية، وأعراض تشابه تلك سكر (الخمول وربما القيء)، أعراض vegetodystonia (شحوب، وهو نمط الرخامي لتلوين الجلد، والتعرق)، انخفض الفقراء التنظيف عن طريق الفم من البكتيريا وتجفيف الأغشية المخاطية، وإنتاج المخاط والتهاب الأنف والبلعوم، وصعوبة في التنفس عن طريق الأنف. سبعون في المئة من المرضى الذين لديهم الأدلة الشعاعية للتغيرات في الجيوب [16، 17]، على الرغم من أن سريريا، وأعرب عن التهاب الجيوب الأنفية ضعيفة. واحدة من أبرز الأعراض من ROB مع التهابات الميكوبلازما هو مؤلم، والسعال الجاف الذي يمكن أن يسبب القيء ويؤدي إلى اضطراب النوم وثم يتطور إلى متلازمة انسداد بكل مظاهره. في 50٪ من المرضى الذين يعانون من عدوى الميكوبلازما، لا موسعات القصبات ROB لا توفر الإغاثة [+18 - 21]. Masgutova برنامج التكامل المنعكس neurosensorimotor وقد استخدم MNRI منذ عام 1989 في روسيا وأوروبا، وفي الآونة الأخيرة، في بلدان أخرى لعلاج الأفراد مع أنواع معينة من السيارات أو تطوير رد الفعل العجز، واضطرابات السلوك، واضطرابات الكلام أو تطور اللغة، أو صعوبات في التعلم. لقد كان لدينا تجربة السريرية التي MNRI يعزز النمو العصبي عند الأشخاص ضعاف وتمكنهم من دمج الحركات الأساسية، وردود الفعل، نظم التنسيق، والمهارات التي تمكن الأداء الأمثل، والتنمية، والتعلم. لقد وجدنا أن العلاج مع MNRI يحفز أنماط لا ارادي أن توقظ الذاكرة الحسية، وهو ما ثبت بما ينعكس ايجابيا على القوة البدنية والنشاط المناعي، والمعرفية والعاطفية والاجتماعية، والقدرات الحركية. وباختصار، يستند MNRI على التمارين والتقنيات (repatterning، إعادة التأهيل، وإعادة ترميز) التي تنطوي على تكرار أنماط المنعكس ديناميكية والوضعي. تحفيز تلك ردود الفعل يحيي آثار الذاكرة الحركية وراثية وينشط آليات دفاعية فطرية نظام الجسم والدماغ. تمارين MNRI تحفيز الموارد الفطرية مثل التنظيم الذاتي، ومقاومة الإجهاد، وتنظيم الجهاز المناعي. Repatterning، التي سهلت أيضا من قبل التدريبات، ينطوي على تحفيز وظائف "الدفاع" للمناطق الدماغ أقل، وتوسيع الروابط بين الخلايا العصبية، ونمو شبكات العصبية، myelinization، وخلق مسار العصب الجديد، كما هو موضح قبل Sechenov [+22 - +25] Virella وآخرون. [26] وAnokhin [27، 28]. نحن التحقيق في الفرضية القائلة بأن MNRI يمكن أيضا تعزيز وظيفة الجهاز المناعي في الأطفال الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي المزمنة مثل ROB. لقد وجدنا أن هؤلاء المرضى غالبا ما تظهر العجز التنموية السيارات، والمهارات الحركية الأساسية الفقيرة، و / أو ردود الافعال الشاذة. في هؤلاء الأفراد، التنفس يؤدي إلى فرط التوترية أو نقص الضغط على العضلات والأربطة وينتج عدم كفاية آليات الحماية والبقاء على قيد الحياة وأعرب في أنماط المنعكس ملموسة nonintegrated. هو ضعف العلاقة المتبادلة بين الجهاز التنفسي، والعضلات، ونظم المحركات الأساسية، وتطوير أنماط رد الفعل لدى هؤلاء المرضى والفقراء. المواد والأساليب المشاركين في الدراسة في الفترة من سبتمبر 2004 إلى سبتمبر 2005، قمنا بتقييم آثار عدة برامج MNRI (neurostructural، والسيارات، والتكامل لا ارادي، العلاج عن طريق اللمس، repatterning لا ارادي، والتنفس المنعكس، والتكامل المنعكس البصري والسمعي) في 60 طفلا (30 فتاة و 30 صبيا) الذين تتراوح أعمارهم بين 2 و 13 عاما) الذي ROB تم تأكيد والذين عولجوا إما مريضا أو العيادات الخارجية في العيادات وارسو للمعهد سفيتلانا Masgutova الدولية وعلى مستشفى الجمهورية Cuvatov السريرية في اوفا، روسيا. وكان تشكيل مجموعات الدراسة على النحو التالي: • المجموعة 1، 15 من الأطفال الأصحاء (8 الفتيان والفتيات 7) الذي شغل منصب السيطرة على المجموعة • المجموعة 2، 30 طفلا (16 الفتيان والفتيات 14) الذي كان بمثابة الأساس، قبل العلاج أو أي علاج المجموعة 3، 15 طفلا (8 الفتيان والفتيات 7) الذين كانوا في البداية جزءا من المجموعة 2 وذهب لتلقي العلاج القياسية • • المجموعة 4، 15 طفلا (8 الفتيان والفتيات 7) الذين كانوا في البداية جزءا من المجموعة 2 وذهب إلى أن تعامل مع كل MNRI والعلاج من تعاطي المخدرات القياسية الدراسة تم فحص 60 مريضا في سن 2-13 سنة، من بينهم 32 الفتيان والفتيات 28 في تشخيص مؤكد من التهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة. وشملت المجموعة الضابطة 15 أطفال أصحاء (8 الفتيان والفتيات 7). تم تشكيل مجموعات المرضى التالية لتحليل فعالية العلاج: المجموعة 1 - المجموعة الضابطة، 15 طفلا مجموعة 2-30 الأطفال، تم تقييم الحالة قبل العلاج مجموعة 3-15 الأطفال الذين تلقوا العلاج الطبي التقليدي مجموعة 4-15 الأطفال، الذين تلقوا العلاج جنبا إلى جنب عن طريق العلاج الطبي وMNRI. وكانت جميع مجموعات متساوية في الجنس والعمر (الشكل 1). تحليل عوامل الخطر لالتهاب الشعب الهوائية الانسدادي المتكررة في الأطفال فحص يعتبر التاريخ المؤلفة من فترة ما قبل الولادة، حالة التدخين الأم في فترة الحمل والوراثة خطر من الأمراض القصبية والرئة. أيضا تحليل تعتبر الوراثة خطر في atopia وأمراض الحساسية عند الأطفال، غير المواتية في المنزل الصغير البيئة والتدخين السلبي من الأشهر الحياة الأولى (الجدول 1). تم التحقق التشخيص وفقا لمجمع معايير الروتينية: سوابق المريض والأعراض السريرية لعدوى الجهاز التنفسي (الكحة الاسعار المنخفضة للمنتجين، وضيق التنفس مع زفير الصعب، ونشر الاضطرابات auscultative، مثل rales الجافة و / أو رطبة) والمعلمات من المباح الشعب الهوائية التي peakfluorometry و / أو قياس التنفس. تم تقييم معدل الأعراض السريرية للانسداد الشعب الهوائية عن طريق نظام 4 نقاط (الجدول 2). وقد تم توثيق الاضطرابات انسداد الشعب الهوائية التي peakfluorometry و / أو بيانات قياس التنفس في بداية وديناميات العلاج. ويعرض الجدول 3 أطفال القطعان داخل المجموعات وفقا لشدة متلازمة القصبية الانسداد. لتقييم الطابع العكسي للالقصبية-عرقلة استخدمت الدراسة ذروة التألق و / أو قياس التنفس مع تحقيقات broncodilatation: قبل و40 دقيقة بعد استنشاق حل Berodual في (بروميد إبراتروبيوم + فينوتيرول هيدروبروميد) من خلال البخاخات. تم تشخيص ROB في المشاركين في الدراسة من قبل الأطباء في المستشفيات سواء في معهد سفيتلانا Masgutova الدولية للتنمية حركة وأنواع التكامل في وارسو، بولندا، أو في مستشفى الجمهورية Cuvatov السريرية في روسيا على أساس الأعراض والنتائج من الفحص السريري، والمختبرات اختبار وتحليل الشعاعي [25، 26] باستخدام تصنيف أشكال التهاب الشعب الهوائية وأمراض الرئة لدى الأطفال [27] المقبولة في المؤتمر طب الأطفال وأمراض الرئة المتخصصين في موسكو في عام 1995 [+28 - 35]. من 60 مشاركا، وكان 8 الآباء الذين يدخنون. ومع ذلك، ذكرت الآباء أبدا التدخين في الأماكن المغلقة أو في جميع أنحاء أطفالهم. ولم يكن لدى أي من المشاركين أعراض الأمراض من ROB. وقد وافق دراستنا من قبل الأكاديمية الروسية للعلوم الطبية مجلس المراجعة المؤسسية (عدد 07.121 تسجيل) في 15 فبراير 2005، وجددت الموافقة على 10 مايو، 2008. جميع الأطفال وأولياء أمورهم قدم موافقة مستنيرة للمشاركة في الدراسة . العلاج من تعاطي المخدرات القياسية مجموعات الدراسة 1 و 2 لم تتلق العلاج من تعاطي المخدرات. الأدوية التي تعطى للمجموعات 3 و 4 تتكون من bronchospasmolytic، لزعزعة الاستقرار الغشاء، أو الأدوية المضادة للالتهابات و / أو المضادات الحيوية، والتي تم الموافقة على استخدامها في الأطفال من قبل وزارة الروسي للحساسية. تألف كلاء bronchospasmolytic للمشتقات الزانثين (حل 24٪ من أمينوفيلين في أمبولات 1.0 مل للحقن العضلي (1.0 مل) مرة واحدة يوميا أو 0.15- ز أقراص أمينوفيلين (0.15 ز) مرة واحدة أو مرتين في اليوم. ومدة تأثير تباينت وكلاء bronchospasmolytic 12-24 ساعة. كان وصفه أمينوفللين بالإضافة إلى الأدوية broncholytic أخرى (في المقام الأول المستقبلات منبهات والمخدرات مضادات الكولين، مثل 0.3 غرام من الثيوفيلين [Theopec] أو 0.1 غرام من Theobiolong [1-3 مرات في اليوم]) وكانت تدار عن طريق الاستنشاق. كانت العقاقير المضادة للالتهابات استخدام 3٪ اسيتامينوفين (Efferalgan) الحل (شراب)، و 15 ملغ / كغ 3 مرات في اليوم، وأقراص حمض الميفيناميك، 0.25 غرام 3 مرات في اليوم. المضادات الحيوية تدار والسيفالوسبورين (Dardum)، 50-200 ملغ / كغ مرة واحدة يوميا عن طريق الحقن العضلي، وماكروليد (Oletetrinum) أقراص، 0.012 غرام 4-6 مرات في اليوم. واستخدمت جميع الأدوية لمدة 7 إلى 10 أيام، وهذا يتوقف على حالة كل مريض. العلاج معقدة من متلازمة انسداد شملت: - المضادة للبكتيريا المخدرات (أموكسيسيلين جنبا إلى جنب وحمض clavulanic (Amoxi-Clav)، أزيثروميسين، كلاريثروميسين)؛ - استنشاق β2-مضادات للتأثير السريع (فينتولين) أو مزيج من (فينوتيرول + الابراتروبيوم بروميد)، β2 خصم والمخدرات مضادات الكولين. - الكورتيزون عن طريق الاستنشاق (بوديزونيد). - تم استنشاق الأدوية التي الغمامات باري (ألمانيا) واومرون (اليابان). النظام وتمديد العلاج ROB يتفق مع الصف في شدة وقدمت وفقا للمبادئ التالية: - تم تقييم حالة المريض ويتم تقييم الأعراض العشرات. - تم تعديل العلاج السابقة (جرعة broncholytics، الطريق الادارة والوقت بعد الإدارة السابقة)؛ - تمديد العلاج يتفق مع شدة انسداد الشعب الهوائية. في سياق الفحص يمكن تعديل درجة الخطورة. - رصد الأعراض السريرية وpeakfluorometry و / أو قياس التنفس (في البداية وأثناء العلاج على أيام 1 و 5 و 10). علاج التهاب القصبات الانسداد المتكرر كانت الطبقة الدواء كنا لعلاج الانتكاس ROB نفسها المستخدمة لالتهاب الشعب الهوائية الانسدادي الحاد: موسعات الشعب الهوائية. كان واحدا من موسعات القصبات الثيوفيلين. اسم الثيوفيلين هو من الشاي الكلمة اللاتينية التي تعني "أشجار الشاي" وكلمة اليونانية phyllon، ومعنى "ورقة". الميثيل، قصبي أخرى التي استخدمناها، هو مشتق البيورين وهو قلويد الحلقية غير المتجانسة ذات الأصل النباتي وجدت في الصينية سينينسيس الكاميليا وباراغواي هولي (البلوط الأخضر paraguariensis)، وكلاهما من التي تستخدم في إعداد الشاي. موسعات القصبات • تمنع فوسفودايستريز وزيادة تراكم أحادي فسفات الأدينوزين الحلقي في الأنسجة، ومنع الأدينوزين (البيورين) مستقبلات • تقليل تدفق أيونات الكالسيوم عبر قنوات أغشية الخلايا، وبالتالي تقليل النشاط مقلص من العضلات الملساء. هذا يريح عضلات القصبات الهوائية والأوعية الدموية (وخصوصا الأوعية الدموية الدماغية)، والجلد، والكلى • الحث على توسع الأوعية المحيطية • استقرار غشاء الخلايا البدينة، التي تحول دون الإفراج عن وسطاء من الحساسية • زيادة إزالة مخاطي هدبي، وتحفيز تقلص الحجاب الحاجز، وتحسين وظائف الجهاز التنفسي وظيفة من وظائف العضلات بين الضلوع، وتنشيط الجهاز التنفسي • تطبيع وظيفة الجهاز التنفسي وتعزيز تشبع الأكسجين في الدم وتركيز أقل من ثاني أكسيد الكربون • تعزيز التهوية في نقص بوتاسيوم الدم • تحفيز نشاط القلب، وزيادة معدل ضربات القلب وقوة وانتظام ضربات القلب، وزيادة تدفق الدم في الشريان التاجي والطلب على الاكسجين عضلة القلب • انخفاض الأوعية الدموية لهجة (وخصوصا الأوعية الدموية الدماغية والأوعية الدموية في الجلد والكلى) • خفض المقاومة الوعائية الرئوية وانخفاض ضغط الدم في الأوعية الدقيقة نظام زيادة تدفق الدم الكلوي ويكون لها تأثير مدر للبول معتدل • توسيع الصفراوية خارج الكبد القناة • تمنع تراكم الصفائح الدموية (تمنع عامل تفعيل الصفائح الدموية والبروستاجلاندين E2α) وزيادة المقاومة للتشوه خلايا الدم الحمراء (تحسين الخواص الريولوجية من الدم)، والحد من تجلط الدم ودوران الأوعية الدقيقة تطبيع وقد وصفه موسعات الشعب الهوائية لعرقلة الشعب الهوائية من أي منشأ: الربو القصبي (الدواء المفضل لعلاج الربو، بما في ذلك ممارسة النشاط الربو، كما أنها تستخدم كأداة إضافية في أشكال أخرى من الربو)، مرض الانسداد الرئوي (التهاب القصبات الهوائية المزمن المزمن، انتفاخ الرئة) وارتفاع ضغط الدم الرئوي، القلب الرئوي، وذمة في أمراض الكلى (كجزء من العلاج المركب)، وتوقف التنفس أثناء النوم. واستخدمت الأدوية التالية لعلاج مرض الانسداد الرئوي المزمن عندما كانت حالة المريض مستقرة: • بروميد الابراتروبيوم (Atrovent) • سالبوتامول (فينتولين) • فينوتيرول (Berotec) • الأدوية طويلة المفعول: بروميد تيوتروبيوم (سبيريفا)، سالميتيرول (Serevent)، فورموتيرول (Symbicort) • الستيرويدات المستنشقة: بيكلوميثازون دي بروبيونات (Beclazone)، فلوتيكاسون (Flixotide)، بوديسونايد (Pulmicort) • Mucolytics: أسيتيل (Fluimucil) استخدمت يلي لعلاج المرض الحاد: • موسعات الشعب الهوائية • المضادات الحيوية: أموكسيسيلين جنبا إلى جنب وحمض clavulanic (Amoxi- Clav)، أزيثروميسين، كلاريثروميسين • الستيرويدات (بريدنيزون) • الأكسجين تطبيق التكامل Masgutova neurosensorimotor لا ارادي خضع جميع المشاركين في الدراسة تقييم MNRI الأولي خلالها ردودها على 34 أنماط لا ارادي، بما في ذلك الرقبة غير المتكافئة منشط، شد اليد، الساق عبر انثناء والإرشاد، جالانت الشوكي، بيريز الشوكي، مورو، وروبنسون فهم اليد. شملت مجموعات اختبار 15-25 الشيكات من كل المنعكس. تم تقييم الأنماط الأساسية لا ارادي في كل خمس المعلمات: سلامة دائرة علم وظائف الأعضاء، وتسلسل واتجاه الحركة وتوقيت وسرعة وكثافة والتماثل، على النحو التالي: • دائرة علم وظائف الأعضاء: رد الفعل الدائرة من ثلاثة أجزاء يجب تفعيل استجابة المحرك بالضبط مثلها في ذلك مثل الأصيل نمط المشفرة وراثيا المرتبطة التحفيز الحسي محددة. • تسلسل والتوجيه: ويتكون كل المنعكس من تسلسل معين من الحركات التي تبلغ ذروتها في وضعية أو واستمرت باعتبارها حركة في اتجاه معين. ينسق نظام العضلات هذه المواقف والحركات. • التوقيت والسرعة (الكمون): الدائرة لا ارادي تتضمن المدخلات الحسية ومعالجة الدماغ، واستجابة المحرك. استجابة المحرك يجب أن يبدأ جزء صغير من الثانية بعد التحفيز الحسي. كما يجب أن تكمل نمطها بسرعة كافية لأداء وظيفتها الحمائية. رد رد الفعل تأخر أو بطء يمكن أن يؤدي إلى الإصابة. • الكثافة: كثافة منعكس هي كمية الطاقة المادية المقدمة من نظام العضلات والأربطة في استجابة لحافز. يجب أن تعكس قوة هذا الرد شدة التحفيز. مفرط، قاصر النشاط، وردود areflexive غير كافية. • التماثل: يمكن رؤية التماثل في منظمة ثنائية من نمط والتوجيه، والتوقيت، وشدة رد الفعل. • إجراءات حركة برمجة خاصة لنظام لا ارادي • أداء سيارات • دقة الإدراك الحسي والاستجابة الحركية • اتجاه استجابة رد الفعل (عمل المخصوص اختلال النظام، مرضي، أو غائبا) • مستوى الاستجابة، والتي تعتمد على لهجة والنشاط (عادي، بشكل مفرط، قاصر النشاط، أو areflexive) من العضلات والأربطة • التماثل في أنماط رد الفعل بين اليمين واليسار على جانبي الجسم تم تعيين استجابة كل مشارك على درجة أساسية تتراوح 0-20، كما هو مفصل في الجدول رقم 1. أثناء الدراسة، والمجموعات 1 و 2 و 3 لم تتلق العلاج MNRI. في المجموعة 4، MNRI (neurostructural، والسيارات، والتكامل المنعكس، وكلاهما التكامل المنعكس البصري والسمعي العلاج عن طريق اللمس ؛؛ repatterning لا ارادي) قد أنجز مباشرة بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية (التي سبق وصفها) كانت تدار، تعديلها وفقا لكل مشارك السريرية الحالة. المتغيرات تقييم في جميع المشاركين، قمنا بتقييم التغيرات في معالم العدلة النشاط البلعمة، مجموعات سكانية فرعية من الخلايا الليمفاوية، تترازوليوم نتروبلو (NBT) المستوى، مستوى خلوى في الطرفية الكريات البيضاء وحيدة النواة في الدم (PBMLs)، ومستوى الكورتيزول بلازما الدم، سواء قبل بدء العلاج MNRI وبعد يوم من العلاج MNRI توقفت. النشاط البلعمة العدلة تم تقييم العدلات النشاط البلعمة لتحديد نسبة الخلايا الملتهمة، وعدد بلعمية المطلق، وعدد بلعمية، ومتوسط ​​عدد جزيئات اللاتكس داخل الخلايا (نتيجة لتقسيم جميع الجزيئات بلعمية من قبل عدد من الخلايا المشاركة في البلعمة)، وأكلة مؤشر، وعدد من جزيئات اللاتكس تحسب ل1 بلعمية. حجم الجسيمات تراوحت اللاتكس 1،3-1،5 مم. قدرنا قدرة البالعات لاستيعاب NBT في تحقيق NBT عفوية وNBT التحقيق حفز (باستخدام zimozan [Zycanum]) [36]. زيموزان هو الخميرة البوليمر الحيوي غشاء، خميرة cerevisi التي تتكون أساسا من السكريات. مجموعات سكانية فرعية من الخلايا الليمفاوية وقد تم تحديد مجموعات سكانية فرعية من الخلايا الليمفاوية التدفق الخلوي التي يقوم بها مختبرات Caltag (إينفيتروجن، كارلسباد، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية). تم غسلها الخلايا في الفوسفات مخزنة المالحة الباردة وكانت ملطخة مع الأجسام المضادة مترافق إلى ثيوسيانات فلوريسئين وفيكوإيريترين وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. ثم غسلها تعليق مرتين في الفوسفات مخزنة المالحة الباردة. وتم قياس النتائج مع تدفق عداد الكريات (FACSCalibur، بيكتون، ديكنسون والشركة، فرانكلين البحيرات، NJ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تحديد البوابة خلية السكان من قبل الجبهة والجانب على ضوء تشتت وحجم الخلية. كانت هناك 10000 الخلايا في البوابة. أجريت التحليلات الإحصائية مع WinMDI (الإصدار 2.8، مايكروسوفت، ريدموند، واشنطن، الولايات المتحدة الأمريكية). مستوى خلوى تم تقييم مستوى خلوى في PBMLs باستخدام فحص immunoenzyme مع المجمعات الموحدة لتعريف السيتوكينات. نحن المحتضنة PBMLs (1 × 10 6 خلايا) في مستنبت (RPMI-1640) لمدة 24 ساعة مع 5 ميكروغرام / مل من راصة دموية نباتية (PHA). لم المجموعة الضابطة من PBMLs لا يحتوي PHA (الحث عفوية السيتوكينات). الدم مستوى الكورتيزول البلازما تم تقييم مستويات الكورتيزول بلازما الدم قبل وبعد العلاج في جميع الفئات 4 باستخدام الفحص المناعي (Immulite 2000 عدة الكورتيزول، DPC، لوس أنجلوس، CA، الولايات المتحدة الأمريكية). تقييم إحصائي أجريت جميع التقييمات الإحصائية مع مان ويتني U اختبار، وذلك باستخدام STATISTICA (الإصدار 6.0؛ ستات لينة المؤتمر الوطني العراقي، تولسا، OK، الولايات المتحدة الأمريكية). قيم P (M ± SD) تعتبر أقل من 0.05 كبيرا. النتائج النشاط البلعمة العدلة وكان سبب ROB عن طريق عدوى فيروس الجهاز التنفسي الحادة في 94٪ من المشاركين في الدراسة والتي تعقدت بسبب عدوى بكتيرية في 72٪ من هؤلاء الأفراد. تعرض أعضاء مجموعة 3 انخفاض ملحوظ إحصائيا في مستوى العدلات phagocytosing وقدرة استيعاب بها (جدول 4) بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية فقط. بالإضافة إلى ذلك، لوحظ وجود زيادة ذات دلالة إحصائية الخلايا phagocytosing وفي مؤشر البلعمة في مجموعة 4 بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية بالإضافة إلى MNRI (الجدول 5). تعرض أعضاء مجموعة 3 انخفاض ملحوظ إحصائيا في النشاط جراثيم من الكريات البيض نتيجة لتثبيط آليات ميكروبات التي تعتمد على الأكسجين (الجدول 5) بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية فقط، وعند مقارنة مع مجموعة 1، أظهرت مجموعة 3 انخفاضا الرقم القياسي العام لتحفيز كرات الدم البيضاء في المرضى الذين يعانون من ROB، مما يدل على تثبيط الجهاز المناعي للتفاعل. عاد مؤشر إلى أن القيم ضمن المعدل الطبيعي بعد الانتهاء من العلاج MNRI في مجموعة 4. السكان الفرعي من الخلايا الليمفاوية وكشف تقييم بنية سكانية فرعية لمفاوية في مجموعات 2 و 3 انخفاض عدد CD3، CD4، CD8، القاتلة الطبيعية، والقاتلة الطبيعية الخلايا التائية قبل وبعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية (الجدول 6). زيادة عدد الخلايا معربا عن جزيئات في وقت مبكر (CD25) وأواخر (مستضد الكريات البيض البشرية DR-1 [-DR HLA]) لوحظت تفعيل وزيادة في B-اللمفاويات والخلايا T-التنظيمية الأرقام مرة أخرى في مجموعة 3 قبل وبعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية. بعد أعضاء مجموعة 3 قد أكملت العلاج من تعاطي المخدرات القياسية، بدأ النمط الظاهري خلية لتطبيع تدريجيا، على الرغم من أنه لا يزال لاحظ تعزيز الجهاز المناعي للتفاعل. في المجموعة 4، اختفى التفاعل بعد العلاج MNRI. مستويات CD3 والخلايا القاتلة الطبيعية (بعد MNRI بالإضافة إلى العلاج بالعقاقير القياسية) كانت أعلى بكثير مما كانت عليه في المجموعة 3 (بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية وحدها)، ومستويات HLA-DR وخلايا T التنظيمية كانت في مجموعة 4 أقل في مجموعة 4 من في مجموعة 3. إنتاج PBML انترلوكين 1β (IL-1β)، انترفيرون γ (IFN-γ)، وIL-12 بنسبة عاملا من 2.3 في مجموعات مع ROB (P <0.01).لم المجموعة 4 لا تختلف كثيرا عن المجموعة 1 (المجموعة الضابطة) ولكن لم تختلف كثيرا عن مجموعة 3 (العلاج من تعاطي المخدرات القياسية). كانت IL-4 و IL-10 مستويات أعلى في المجموعات 2 و 3. المجموعة 4 (MNRI زائد القياسية علاج إدمان المخدرات) لا تختلف كثيرا عن المجموعة الضابطة. في المجموعة 3 كان إنتاج IL-4 و IL-10 أعلى منه في المجموعة 4 (p <0.05)، وبالتالي تحفيز إنتاج IL-4 وكان 1.2 أضعاف في مجموعة من 3 في المجموعة 4 (P> 0.05). الدم مستوى الكورتيزول البلازما وكانت مستويات الكورتيزول في الصباح والمساء عينات بلازما الدم من مجموعة 2 و 3 أقل بكثير من تلك الموجودة في المجموعة 1 (الشكل 2). وكانت معاملة Immunocorrective مع MNRI بالإضافة إلى العلاج بالعقاقير القياسية أدى إلى زيادة تدريجية في مستوى الكورتيزول من أعضاء جماعة 4. ومع ذلك، في مجموعة 3 مستوى الكورتيزول من العينة صباح اليوم بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية أقل بكثير من العينة المأخوذة من مجموعة 4 بعد العلاج MNRI قد أضيفت إلى نظام المعالجة. نقاش فقد كان من تجربتنا أن المرضى الذين يعانون من أمراض الجهاز التنفسي المزمن غالبا ما يكون اضطراب في الجهاز المناعي. بعد أن أضاف العلاج MNRI للعلاج بالعقاقير القياسية في مجموعة 4، لوحظت التغييرات التالية في المعلمات المناعي: انخفاض مستويات CD3، CD4، CD8، CD16، والقاتلة الطبيعية الخلايا التائية وزيادة مستويات CD19، CD25 علامات تفعيل و HLA- DR، وخلايا CD4 immunoregulatory و CD25. وينظم الخلل في عدد من القطعان الخلية عن طريق العلاج MNRI، وبعد ذلك بلغ عدد سكان الخلايا معربا عن CD3، CD4، CD19، CD25 وعلامات المعدل الطبيعي .في المجموعة 4، تم تصحيح مستوى الكورتيزول غير كاف إلا بعد العلاج MNRI. في الأعضاء المجموعة 3، التي لم تتلق سوى العلاج من تعاطي المخدرات القياسية، كان مستوى الكورتيزول 1،2 حتي 1،35 مرات أقل مما كانت عليه في مجموعة 4. ومن المعلوم أن المضادة للالتهابات والجهاز المناعي آثار هرمون الكورتيزول في التركيز الفسيولوجي ترتبط مع التوليف lipocortin، التي كتل تشكيل أكسيجيناز شحمية وانزيمات الأكسدة الحلقية (منتجات من حمض الأراكيدونيك) [37].المرحلة الكيميائية المرضية من ROB يؤدي إلى إطلاق واسعة من الليكوترين B 4 (LTB 4)، والتي لها دور مهم في تشكيل عوائق الشعب الهوائية [38]. تركيز الكورتيزول منخفضة في البداية في المرضى الذين يعانون من ROB قد تنظم غير فعال في تشكيل LTB 4 ، الجلوبيولين، ومؤثرات أخرى، وبالتالي بالتالي يؤدي إلى نوع من الخلايا تي المساعد 2 (TH2) الاستجابة [39]. ويؤكد هذه الحقيقة عن طريق انخفاض في معدل إنتاج proinflammatory سايتوكاين IL-1β والتنظيمية IFN-γ، و IL-12 التنظيمي وتعزيز مستوى السيتوكينات المضادة للالتهابات IL-4 و IL-10 في الطرفية الدم وحيدات النوى ثقافات الكريات البيض في الأطفال الذين يعانون ROB (جدول 4). وعلى الرغم من تغيير إيجابي في مستويات خلوى في المشاركين الذين تلقوا العلاج من تعاطي المخدرات القياسية، وكان تركيز هذه السيتوكينات في مستنبت الكريات البيض يختلف كثيرا عن ذلك في السيطرة على المجموعة. عندما أضيف العلاج MNRI إلى نظام العلاج، ومستويات السيتوكينات التنظيمية والمضادة للالتهابات تطبيع.ولذلك، بعد العلاج من تعاطي المخدرات التقليدية وعلى الرغم من تحسن سريري، واصل أعضاء مجموعة 3 لعرض من أعراض عدم كفاية الكورتيزول وتثبيط وقت واحد من الحصانة T- الخلية. بعد إضافة MNRI للعلاج بالعقاقير القياسية ل ROB، لوحظ وجود زيادة ذات دلالة إحصائية في العدد المطلق للعدلات segmentonuclear في مجموعة 4 (جدول رقم 5). MNRI في تركيبة مع العلاج القياسي أدى إلى زيادة في النشاط استيعاب العدلات وتطبيع وظيفة الكريات البيض التمثيل الغذائي، وكلاهما مما أدى إلى تحسن مؤشر التحفيز للاختبار NBT إلى قيمة ضمن المعدل الطبيعي (0،97 حتي 1،3). بالإضافة إلى ذلك، لوحظ وجود زيادة ذات دلالة إحصائية في عدد الخلايا معربا عن مستضدات التمايز والخلايا القاتلة الطبيعية (CD16). الخلايا القاتلة الطبيعية هي المؤثرات الرئيسية المناعة الفطرية، لديهم دور حيوي هام في آليات المراقبة المناعية (استهداف الخلايا السرطانية )، في تدمير الفيروسات والخلايا المصابة الطفيلي، وفي تنظيم وتمايز خلايا نخاع العظام (فإنهما ينفيان تنتشر بسرعة خلايا مكونة للدم) في الأشخاص الذين يعانون من رد فعل الكسب غير المشروع ضد المضيف [40]. بالإضافة إلى تأثير immunoregulating لها، وزيادة العلاجية MNRI مستوى الكورتيزول لتركيزات الفسيولوجية في مجموعة 4.IL-1β، الذي تنتجه الكريات البيض وحيدات النوى، ويعزز من إفراز هرمون قشر الكظر وأشارت glucocorticoids.38 نتائجنا أن العلاج MNRI ينشط كرات الدم البيضاء وحيدة النواة. وهكذا، مضيفا MNRI إلى نظام العلاج من تعاطي المخدرات القياسي ل ROB تحسين آثار عدم كفاية ان العلاج على خلايا الجهاز المناعي وزيادة الاستقطاب الاستجابة المناعية لنوع TH1.تم رصد الأطفال في هذه الدراسة لمدة 1 سنة بعد أن تم الانتهاء من العلاج. حدث تفشي ROB في كل مجموعة على النحو التالي: • المجموعة 1 (المجموعة الضابطة): لا تفشي ROB • المجموعة 2 (خط الأساس، قبل العلاج): تم نقل نصف لمجموعة 3 ونصف تم نقلها إلى مجموعة 4 • المجموعة 3 (العلاج من تعاطي المخدرات القياسية): كان ROB بمتوسط ​​7.8 مرات في السنة قبل العلاج، بعد 1 سنة من العلاج الطبي، ومتوسط ​​انخفض إلى 6 مرات في السنة، لا فرق دال إحصائيا • المجموعة 4 (العلاج من تعاطي المخدرات القياسية بالإضافة إلى MNRI): كان ROB ما معدله 8 مرات قبل العلاج باختصار، كشفت نتائج دراستنا أن مستوى IL-1β التي تنتجها كريات الدم البيضاء وحيدة النواة كان أعلى بشكل ملحوظ بعد العلاج MNRI بالإضافة إلى العلاج بالعقاقير القياسية من بعد العلاج من تعاطي المخدرات القياسية وحدها. ونقترح أن MNRI ينظم إنتاج ايل 1β والسيتوكينات التنظيمية IFN-γ و IL-12، وبالتالي يؤثر إيجابيا على تفاعل المناعي، والغدد الصماء، والجهاز العصبي، وفي نهاية المطاف التوازن. لا يمكننا استبعاد الأثر المباشر لل MNRI على الدورة الدموية والجهاز الليمفاوي، لأن نتائجنا أظهرت انخفاضا كبيرا في ارتفاع ضغط الدم في العضلات، وأعراض مائي، تشنجات السفينة، والتهاب الأنسجة بعد العلاج MNRI. نقترح أن إضافة MNRI لعلاج الأطفال الذين يعانون من ROB يمكن تصحيح آليات نظام المناعة الضعيفة، والمساهمة في حل الأمراض التنفسية المزمنة، وتمكين مغفرة أطول من المرض المتكرر. ومع ذلك، هناك حاجة لدراسات إضافية من آثار العلاج MNRI على آليات تنظيم المناعة، والغدد الصماء، وظيفة الجهاز العصبي في الأطفال الذين يعانون ROB.

 

[رافت ابراهيم]

 

COPD (الانسداد الرئوي مرض)

ما هو مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD)؟

COPD هو مرض الرئة التي تجعل من الصعب على التنفس. وهو ناتج عن تلف الرئتين على مدى سنوات عديدة، وعادة من التدخين.
COPD هو في كثير من الأحيان مزيج من اثنين من الأمراض:

• التهاب الشعب الهوائية المزمن (ويقول "برون، KY-طوس"). في التهاب الشعب الهوائية المزمن، الشعب الهوائية التي تحمل الهواء إلى الرئتين (الشعب الهوائية ) الحصول على ملتهبة وجعل الكثير من المخاط. هذا يمكن تضييق أو منع الشعب الهوائية، مما يجعل من الصعب بالنسبة لك للتنفس.
• إنتفاخ الرئة (ويقول "م-FUH-زي-MUH"). في الشخص السليم، حويصلات الهواء الدقيقة في الرئة تشبه البالونات. بقدر ما تتنفس داخل وخارج، ويحصلون على أكبر وأصغر لتحريك الهواء من خلال رئتيك. ولكن مع انتفاخ الرئة وتلف هذه الحويصلات الهوائية وتفقد تمتد بهم. يحصل أقل من الهواء داخل وخارج الرئتين، مما يجعلك تشعر بضيق في التنفس.

COPD يزداد سوءا مع مرور الوقت. لا يمكنك التراجع عن الأضرار التي لحقت رئتيك. ولكن يمكنك اتخاذ خطوات لمنع المزيد من الضرر ويشعر على نحو أفضل.

ما الذي يسبب مرض الانسداد الرئوي المزمن؟

ويتسبب مرض الانسداد الرئوي المزمن دائما تقريبا عن التدخين. مع مرور الوقت، وتنفس دخان التبغ يسبب تهيج الشعب الهوائية ويدمر ألياف بسط في الرئتين.
وتشمل غيرها من الأمور التي قد يضعك في دائرة الخطر يتنفس أبخرة كيميائية أو الغبار أو تلوث الهواء على مدى فترة طويلة من الزمن. التدخين السلبي أيضا قد يؤدي إلى تلف الرئتين.
وعادة ما يستغرق سنوات عديدة لتلف الرئتين لبدء تسبب أعراض، لذلك COPD هو الأكثر شيوعا في الأشخاص الذين تتجاوز أعمارهم 60 عاما.
قد تكون أكثر احتمالا للحصول COPD إذا كان لديك الكثير من التهابات الرئة خطيرة عندما كنت طفلا. الناس الذين يحصلون على انتفاخ الرئة في 30s أو 40S قد يكون لها الفوضى التي تدب في الأسر، ودعا antitrypsin نقص ألفا 1. ولكن هذا أمر نادر الحدوث.

ما هي الأعراض؟

الأعراض الرئيسية هي:

• A طويلة الأمد (المزمنة) السعال.
• المخاط الذي يأتي عند السعال.
• ضيق في التنفس الذي يزداد سوءا عند ممارسة الرياضة.

كما يحصل COPD أسوأ من ذلك، قد تكون قصيرة في التنفس حتى عندما تفعل أشياء بسيطة مثل أرتدي ملابسي أو إصلاح وجبة. ستكون أكثر صعوبة في تناول الطعام أو ممارسة الرياضة، والتنفس يأخذ قدرا أكبر من الطاقة. الناس غالبا ما يفقدون الوزن والحصول على الأضعف.
في بعض الأحيان، قد الأعراض تندلع فجأة والحصول على أسوأ بكثير. وهذا ما يسمى تفاقم مرض الانسداد الرئوي المزمن (ويقول "البيض زاس إيه-BAY-شون"). تفاقم يمكن أن تتراوح بين معتدلة ومهددة للحياة. كلما كان لديك مرض الانسداد الرئوي المزمن، ستكون أشد هذه تفجر.

كيف يتم تشخيص مرض الانسداد الرئوي المزمن؟

لمعرفة ما إذا كان لديك مرض الانسداد الرئوي المزمن، وسوف طبيب:

• هل لاختبار بدني والاستماع إلى رئتيك.
• طرح أسئلة حول صحة السابقة الخاصة بك وما إذا كنت تدخن أو تعرضوا لغيرها من الأمور التي يمكن أن تهيج الرئتين.
• هل لا يتنفس الاختبارات، بما في ذلك قياس التنفس، لمعرفة مدى رئتيك العمل.
• لا بالأشعة السينية وغيرها من التجارب لمساعدة يستبعد المشاكل الأخرى التي يمكن أن تسبب الأعراض الخاصة بك.

إذا كان هناك فرصة هل يمكن أن يكون مرض الانسداد الرئوي المزمن، فمن المهم جدا لمعرفة بأسرع ما يمكنك. هذا يمنحك الوقت لاتخاذ خطوات للحد من الأضرار التي لحقت رئتيك.

كيف يتم علاجها؟

أفضل طريقة لإبطاء COPD هو الإقلاع عن التدخين. هذا هو أهم شيء يمكنك القيام به. فمن لم يفت الاوان بعد الإقلاع عن التدخين. بغض النظر عن المدة التي لم يدخنوا أو مدى خطورة مرض الانسداد الرئوي المزمن الخاص بك هو، والإقلاع عن التدخين يمكن أن يساعد في وقف الأضرار التي لحقت رئتيك.
يمكن أن يصف الطبيب العلاجات التي قد تساعدك على إدارة الأعراض ويشعر على نحو أفضل.

• يمكن الأدوية تساعدك على التنفس أسهل. يتم استنشاق معظمهم لذلك فهي تذهب مباشرة إلى الرئتين. إذا كنت تحصل على الاستنشاق، من المهم جدا لاستخدامه مجرد وسيلة مزود صحتك يظهر لك.
• A الرئة (الرئة) برنامج اعادة التأهيل يمكن أن تساعدك على تعلم كيفية إدارة مرضك. ويمكن للفريق من المهنيين الصحيين تقديم المشورة ويعلمك كيفية التنفس أسهل، وممارسة، وتناول الطعام بشكل جيد.
• في الوقت المناسب، قد تحتاج إلى استخدام الأكسجين بعض أو معظم الوقت.

الناس الذين لديهم مرض الانسداد الرئوي المزمن هم أكثر احتمالا للحصول التهابات الرئة، لذلك سوف تحتاج إلى الحصول على لقاح الانفلونزا كل عام. يجب عليك أيضا الحصول على لقطة المكورات الرئوية. قد لا تبقي لكم من الحصول على الالتهاب الرئوي. ولكن إذا كنت لا تحصل على الالتهاب الرئوي، وربما لن يكون مريضا كما.

كيف يمكنك أن تعيش بشكل جيد مع COPD؟

هناك العديد من الأشياء التي يمكنك القيام به في المنزل للبقاء في صحة ما تستطيع.

• تجنب الأشياء التي يمكن أن تهيج الرئتين، مثل الدخان وتلوث الهواء.
• استخدام فلتر الهواء في منزلك.
• احصل على ممارسة التمارين الرياضية بانتظام لتبقى قوية كما يمكنك.
• تناول الطعام بشكل جيد حتى تتمكن من مواكبة قوتك. إذا كنت فقدان الوزن، وتطلب من طبيبك أو أخصائي التغذية عن طرق لجعلها أسهل للحصول على السعرات الحرارية التي تحتاج إليها.

التعامل مع تفجر: كما يحصل COPD أسوأ من ذلك، قد يكون لديك تفجر عندما الأعراض بسرعة سوءا والبقاء أسوأ. من المهم أن تعرف ماذا تفعل إذا حدث ذلك. طبيبك قد تعطيك خطة عمل والأدوية لمساعدتك على التنفس إذا كان لديك اشتعال. ولكن إذا كان الهجوم شديدا، قد تحتاج إلى الذهاب إلى غرفة الطوارئ أو استدعاء 911.
معالجة الاكتئاب والقلق: مع العلم أن لديك مرض يزداد سوءا بمرور الوقت يمكن أن يكون من الصعب. من الشائع أن يشعر بالحزن أو اليأس أحيانا. يمكن أن تواجه صعوبة في التنفس أيضا تجعلك تشعر بالقلق جدا. إذا كانت هذه المشاعر آخر، تأكد من إخبار الطبيب بذلك. يمكن تقديم المشورة، والطب، ودعم الجماعات تساعدك على التعامل معها.

 

[رافت ابراهيم]

 

http://www.nature.com/articles/srep0...P-631-20140211





ارتباط الجزيئي المباشر بين الجينات مرشح التوحد RORA وMIR137 مرشح الفصام

• باولو Devanna
• وسونيا C. فيرنيس

• تقارير علمية 4، رقم المادة: 3994 (2014)
• دوى: 10.1038 / srep03994
• تحميل الاقتباس
• • اضطرابات طيف التوحد |
  • تنظيم الجينات |
  • miRNAs |
  • انفصام في الشخصية

تم الاستلام: 10 ديسمبر 2013 قبلت: 20 يناير 2014 نشرت على الانترنت: 6 فبراير 2014

ملخص

على حد سواء في الآونة الأخيرة تم تحديد الريتينويك ذات الصلة حمض اليتيم جين مستقبلات ألفا (RORA) والرنا الميكروي MIR137 كما جينات مرشحة جديدة للاضطرابات العصبية والنفسية. RORA يشفر اليتيم مستقبلات النووي التي تعتمد على يجند الذي يعمل كمنظم النسخي ومير 137 هو الدماغ إثراء غير الترميز RNA الصغيرة التي تتفاعل مع النصوص الجيني للسيطرة على مستويات البروتين. وبالنظر إلى الأدلة المتزايدة لRORA في اضطرابات طيف التوحد (ASD) وMIR137 في الفصام والتوحد، ونحن التحقيق إذا كانت هناك علاقة بيولوجية وظيفية بين هذين الجينين. هنا، علينا أن نبرهن على مير 137 يستهدف 3'UTR من RORA بطريقة موقع محددة. كما نقوم بتوفير المزيد من الدعم لMIR137 كمرشح التوحد من خلال إظهار أن عددا كبيرا من الجينات التوحد تورط سابقا كما استهدفت مزعومة من قبل مير 137. هذا العمل يدعم دور MIR137 كمرشح ASD ويوضح ارتباط البيولوجي المباشر بين هذه الجينات المرشحة التوحد لا علاقة لها سابقا.

مقدمة

بترميز الريتينويك ذات الصلة حمض اليتيم مستقبلات ألفا (RORA) الجينات لمستقبلات اليتيم النووي التي تعتمد على يجند الذي يعمل كمنظم النسخي، وقد تم التعرف على الجينات مرشح رواية لاضطرابات طيف التوحد (ASD) 1. أدلة على تورط RORA في التوحد يأتي في المرتبة الأولى من الاكتشاف الذي تم تخفيض مستويات RORA في عينات أخذت من المرضى الذين يعانون من التوحد. في كل من خطوط الخلايا lymphoblast المستمدة من الأفراد المتضررين 2 وفي قشرة الفص الجبهي والمخيخ من أدمغة المصابين بالتوحد 1 تم تخفيض RORA مستويات البروتين مقارنة مع الضوابط الملائمة. وعلاوة على ذلك، يشارك أهداف النسخي من RORA في مسارات ضعف في ASD وبعض الجينات تنظيم مباشرة مثل NLGN1 وNTRK2 قد تورطت بشكل مستقل في ASD في جمعية الدراسات 3، 4، 5.
MicroRNAs (miRNAs) هي فئة من الرنا غير المكودة الصغيرة التي تتفاعل عبر مجاني الاقتران الأساسي لمنطقة 3 'غير مترجمة (3'UTR) النصوص الجيني للسيطرة على مستويات البروتينات في الخلايا. ناضجة miRNAs هي 21-25 النيوكليوتيدات في الطول، والتعرف على عزر الأساسية من 7-8 أزواج قاعدة في نصوص متعددة الجينات المستهدفة، مما أدى إلى تدهور إما نص أو قمع الترجمة 6. وحيد ميرنا يمكن تنظيم التعبير الآلاف من الأهداف. أدلة متزايدة تشير إلى تورط miRNAs في علم الوراثة الجزيئية لمجموعة من الاضطرابات العصبية والنفسية العصبية. وأظهر عدد من miRNAs اختلاف مستويات التعبير في عينات من الأفراد المصابين بالتوحد مقارنة مع الضوابط يقابل 7، 8، 9، مما يشير إلى أن التقلبات من miRNAs يمكن أن تكون ذات صلة إلى الأسباب الجزيئية أو عواقب مرض التوحد.
الأهمية المتزايدة للRORA في ASD أدى بنا إلى التحقيق الذي miRNAs تنظيم تعبيرها. هنا، علينا أن نظهر وجود صلة مباشرة بين الجزيئية RORA ومير 137، مما يدل على أن هذا الدماغ المخصب الرنا الميكروي يستهدف 3'UTR من RORA بطريقة موقع محددة. وتبين لنا أيضا أن عددا كبيرا من الجينات التوحد تورط سابقا تنظم مزعومة من قبل مير 137. هذا العمل يدعم دور MIR137 كمرشح ASD ويوضح ارتباط البيولوجي المباشر بين هذه الجينات المرشحة التوحد لا علاقة لها سابقا.

النتائج

في 3'UTR من محضر RORA حددنا توقعت عدة miRNAs المخصب الدماغ لاستهداف نسخة RORA بما في ذلك مير 19ab، مير 34ac ومير 137 باستخدام TargetScan 6.2 خوارزمية 10. وكان لافتا أن هناك وتوقعت عدة مواقع (5) منفصلة ملزمة لمير 137 في RORA 3'UTR، مما يدل غاية من هذا كونه الهدف الحقيقي. وأعرب عن مير 137 غاية في الدماغ، من المهم للنضوج الخلايا العصبية والتنمية المشبك وأظهرت الربط المتكرر مع اضطرابات إدراكية أخرى مثل الفصام والإعاقة الذهنية 11، 12. وعلاوة على ذلك، MIR137 نفسها قد تورطت في الآونة الأخيرة ASD عن طريق التحليل التلوي أن يعتبر تعدد الأشكال النوكليوتيدات واحد (SNP) البيانات عبر خمسة اضطرابات. التوحد اضطراب طيف، اضطراب نقص الانتباه وفرط النشاط، واضطراب ثنائي القطب واضطراب اكتئابي، وانفصام الشخصية واستخدام أفضل نموذج لائقا وجدت الجمعية من SNP مير 137 مع كل من الفصام وASD 13. وعلى الرغم من التخصيب مير 137 التعبير في الدماغ، في المخيخ حيث أعلى RORA التعبير يمكن العثور عليه، مير 137 التعبير منخفض جدا 12. مجتمعة، تشير هذه البيانات ارتباط المفترض بين هذه الجينات المرشحة التوحد اثنين وفي هذه الدراسة نستخدم المقايسات الفنية لإثبات التنظيم المباشر من RORA التي كتبها مير 137.
حددنا خمسة توقع مواقع لمير 137 (M137-BS 1-5) والتي أظهرت عن الحفاظ على ارتفاع (ملزمة الشكل 1A-ب). لمعرفة ما إذا كانت هذه نشطة وظيفيا نحن المستنسخة ثلاث مناطق تحتوي على مواقع مفترضة خمسة مير 137 ملزمة ليكون بمثابة 3'UTR من اليراع مراسل luciferase المراسل الجين (الشكل 1C). لتأكيد آخر من الذاتية وtransfected مير 137، وتقييم حساسية النظام نحن أيضا ولدت مراسل التحكم الإيجابي (M137 التشيك) ​​التي لديها مواقع الربط إجماع متعددة مير 137 المصب من الجين مراسل luciferase المراسل. أدى شارك في ترنسفكأيشن مير-137 مع هذه السيطرة الإيجابية في القمع قوي للنشاط الجين مراسل (الشكل 2A). عندما قدمنا ​​كل إقليم من أقاليم RORA 3'UTR في النظام المراسل في الخلايا العصبية مثل الخلايا رأينا انخفض هذا النشاط مراسل الجينات، سواء في وجود الذاتية أو transfected شارك التعبير مير 137. أظهرت المنطقة 1 فقط القمع خفيف مقارنة مع الشاهد (التي تفتقر إلى المنطقة 3'UTR) وكان هذا التأثير لم يكن كبيرا (الشكل 2B). المناطق 2 و 3 أدى إلى انخفاض كبير في النشاط مراسل مقارنة مع الضوابط (الشكل 2C-د) وأظهرت أقوى الآثار عندما overexpressed مير 137 إلى جانب فحص مراسل (الشكل 2C-د). ومن المثير للاهتمام، أظهرت المنطقة 2 انخفاضات مماثلة في النشاط مع أو بدون مير 137 شاركت في التعبير، مما يشير إلى أن هذه المنطقة هي المستهدفة بكفاءة من خلال المستويات المحلية مير-137. وتشير هذه البيانات إلى أن مير 137 يتفاعل مع مواقع الربط في 3'UTR من RORA لتنظيم التعبير.
الشكل 1: المنطقة غير مترجمة وRORA 3 "(3'UTR) يحتوي على مواقع الربط مير 137 متعددة.

(أ) تم تحديد خمسة مواقع لإجماع مير 137 (BS1-5) ملزمة داخل 3'UTR من RORA باستخدام خوارزمية TargetScan 6.2. (ب) يتم إعطاء تسلسل ناضجة مير 137، الانحياز إلى تسلسل مجاني للخمسة وتوقع المواقع في RORA 3'UTR ملزمة. يشار مجاني قاعدة الاقتران بواسطة خطوط عمودية. لكل موقع ملزم يتم تسطير تسلسل الاعتراف الأساسية. (ج) لاختبار إذا ما كانت نشطة وظيفيا نحن المستنسخة ثلاث مناطق تحتوي على مواقع الربط ليكون بمثابة 3'UTR من اليراع مراسل luciferase المراسل الجين (في ناقلات pGL4.23، PROMEGA). المناطق 1 و 2 الواردة M137-BS 1 و 2 على التوالي، والمنطقة 3 الواردة M137-BS 3-5 (إحداثيات ترد شظايا المستنسخة في جزء منه). وتضمنت بنيات الحذف نفس شظية لكن تسلسل الاعتراف الأساسية (مسطرة في جزء ب) قد تم حذفه.

الصورة بالحجم الكامل

الشكل 2: يتم تنظيم المناطق من RORA 3'UTR التي كتبها مير 137 في خلايا تشبه الخلايا العصبية البشرية.

وأجريت فحوصات luciferase المراسل الصحفي في مثل الخلايا العصبية خط الخلية البشرية (SHSY5Y) لقياس قدرة مير 137 لتنظيم مناطق RORA 3'UTR. خلايا SHSY5Y تعبر عن أجريت الذاتية مير 137 والمقايسات مع أو بدون المشارك ترنسفكأيشن المعدلة وراثيا مير 137 (أ) مراسل السيطرة إيجابي بناء (M137 التشيك) ​​النشاط تم تخفيض بمهارة كتبها الذاتية مستويات مير 137، ولكن كان النشاط بقوة و انخفاض كبير عندما كان يشارك أعرب مير-137 مع المراسل. كانت السيطرة المخفوق (SCR التشيك) ​​تتأثر مير 137 التعبير. تم احتساب أهمية استخدام الطلاب اختبار t حيث *** P <0.001. (ب) لم يقل النشاط مراسل الجين بشكل كبير عندما كانت المنطقة 1 (M137-BS 1) الحالي. لم يلاحظ أي فرق في النشاط عندما كان بقوة شارك اعرب مير-137. (ج) عندما قدم المنطقة 2 (M137-BS 2)، تم تخفيض النشاط بقوة أكبر مع أو بدون مير 137 coexpression، ولكن انخفاض كبير في النشاط لوحظ فقط عندما overexpressed مير 137. كان (د) المنطقة 3 (M137-BS 3-5) وهي المنطقة الأكثر قمع بقوة. قمعت هذا البناء بشكل ملحوظ الذاتية مستويات مير 137 وoverexpression من مير 137 أسفر القمع أقوى بكثير من النشاط مقارنة مع جميع الظروف. تم حساب فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في مناطق ب-د باستخدام اختبار ANOVA تليها بعد خاصة توكي الحساب. يشار أهمية التي كتبها * P <0.05، ** p <0.01 و*** P <0.001. وقد سجلت نتائج جميع حيث بلغ متوسط ​​+/- الانحراف المعياري من 2 مكررات البيولوجية.

الصورة بالحجم الكامل

للتحقق من صحة نتائجنا بشكل مستقل، ونحن اختبار نفس هذه التركيبات في خط الخلية البشرية أخرى؛ خلايا HEK293. هذه الخلايا هي نموذج يشيع استخدامها لاختبار النشاط من البروتينات وmiRNAs ولها فائدة إضافية للتعبير عن أي الذاتية مير 137 (لا تظهر البيانات). وبالتالي لا نستطيع أن نؤكد أن تنظيم شظايا مراسل ويرجع ذلك إلى وجود مير 137 (عن طريق التعاون ترنسفكأيشن مع التعبير البلازميد مير 137). بدأنا باختبار تنظيم دينا مراسل التحكم الإيجابي مع وبدون مير 137 التعبير التحوير. بدون مير 137 المشارك ترنسفكأيشن مراسل السيطرة الإيجابية لم تظهر أي اختلافات النشاط مقارنة لمراسل "سارعت" (SCR التشيك - الذي صمم أن لا تستجيب لمير 137)، مما يعكس عدم وجود الذاتية مير 137 في خلايا HEK293. عندما كان مير 137 شارك في transfected الإيجابية في النشاط مراسل السيطرة انخفض بشكل ملحوظ (من قبل ~ 90٪)، مما يدل على أن transfected مير 137 كان قادرا على تنظيم بشدة هذا النص (الشكل 3A). قمعت جميع المناطق RORA 3'UTR ثلاثة في هذا النموذج الخلية عندما كان يشارك اعرب مير-137. المناطق 2 و 3 أظهر فقط الآثار عندما مير 137 وقد شارك في transfected (الشكل 3C-د). على النقيض من ذلك، المنطقة 1 وقمع مماثل ميرس الذاتية وراثيا مير 137 (الشكل 3B)، ملمحا الى ان القمع وحظ عند هذه المنطقة غير موجودة قد لا يكون بسبب مير 137 ولكن سببه ميرس الذاتية الأخرى الموجودة في هذه الخلايا .
الرقم 3: مطلوب مير 137 التعبير عن تنظيم محدد من RORA 3'UTR.

وأجريت فحوصات luciferase المراسل في خط خلية الإنسان المستقلة، والمستمدة من الكلى الأنسجة (HEK293) هذا هو النموذج المستخدم على نطاق واسع لنشاط جينات الإنسان وmicroRNAs، ولكن هذا لا يمكن كشفها الذاتية مير 137 التعبير. (أ) لم يتأثر نشاط إيجابي بناء مراسل التحكم بمستويات مير الذاتية، ولكن كان النشاط بقوة وخفضت بشكل ملحوظ عندما كان مير 137 شارك في التعبير عنها. تم احتساب أهمية استخدام الطلاب اختبار t حيث *** P <0.001. (ب) كان النشاط مراسل الجينات قليلا، ولكن ليس بدرجة كبيرة عندما كانت المنطقة 1 (M137-BS 1) الحالي. إنتاج مشترك بين التعبير مير-137 تخفيض الحد الأدنى مزيد من النشاط الصحفي. (ج) مراسل بناء المنطقة 2 (M137-BS 2) انخفض بشكل كبير فقط عندما overexpressed مير 137. كان (د) المنطقة 3 (M137-BS 3-5) تتأثر مستويات مير الذاتية، ولكن قوي ولوحظ القمع كبير عندما كان مير 137 شارك في التعبير عنها. تم احتساب فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في مناطق ب-د باستخدام اختبار ANOVA تليها بعد خاصة توكي الحساب. يشار أهمية التي كتبها * P <0.05، ** p <0.01 و*** P <0.001. وقد سجلت نتائج جميع حيث بلغ متوسط ​​+/- الانحراف المعياري من 2 مكررات البيولوجية.

الصورة بالحجم الكامل

لتحديد ما إذا كانت الآثار التنظيمية نتيجة لتفاعل معين بين مير 137 ومواقع الربط المتوقع في RORA 3'UTR، أنشأنا بنيات الحذف التي احتفظت المناطق 3'UTR، ولكنها تفتقر إلى موقع ملزم مير 137 (ق) . لم انقاذ المنطقة 1 النشاط حذف الموقع مير 137 ملزم (M137-BS 1؛ الشكل 4A)، مؤكدا أن التأثير المحتمل بسبب ميرس الآخرين والتفاعل مع المنطقة 1 - مثل مير 19ab وهو ما ثبت ل تنظيم RORA عبر التفاعل مع مواقع الربط في المنطقة 1 14 أو مير 34ac التي تم العثور على مواقع مفترضة أيضا في هذه المنطقة. عندما كانت المنطقة 2 الحالية، تم تخفيض النشاط مراسل بشكل ملحوظ. هذا التأثير ألغيت تماما بالحذف من 137 مير موقع ملزم (الشكل 4B)، مما يدل على تفاعل معين من مير 137 مع M137-BS 2. منطقة 3 تضمنت ثلاثة مواقع الربط مير 137 منفصلة (M137-BS 5/3 ) وكان المنطقة 3'UTR قمع بشدة. لتحديد أي من هذه المواقع كانت نشطة بيولوجيا أنشأنا سلسلة من التركيبات التي تحتوي على كل تركيبة من الحذف موقع ملزمة. نمط التعبير مراسل الجين عبر هذه بنيات مختلفة تشير إلى أن جميع المواقع ملزمة ثلاثة نشطة وظيفيا وتساهم بنفس القدر على قدرة مير 137 لتنظيم RORA (الشكل 4C). معا وتظهر هذه النتائج أن مير 137 يتفاعل بشكل خاص مع 4 مواقع الربط (M137-BS 2-5) ضمن RORA 3'UTR من أجل تعدل تعبيرها. وجود العديد من المواقع المستهدفة وظيفية في 3'UTR يدل على وجود دور مهم لمير 137 في تنظيم RORA.
الرقم 4: مير 137 ينظم 3'UTR من RORA بطريقة موقع معين.

وتمت مقارنة النشاط النسبي للبنيات مراسل تحمل المناطق RORA 3'UTR إلى بنيات الحذف أو متجه دون تسلسل 3'UTR كمجموعة تحكم. (أ) لوحظ انخفاض خفية من luciferase النشاط عند منطقة 1 موجودة (M137-BS 1) ولكن هذا لم يكن انقاذهم من قبل حذف موقع ملزم مير 137 (M137-BS 1 Δ)، مما يوحي بأن مير 137 هو غير مسئول عن هذا التأثير. (ب) تم تخفيض النشاط مراسل بشكل ملحوظ (من قبل ~ 20٪) عندما كانت المنطقة 2 الحالية (M137-BS 2)، وألغيت هذا الأثر تماما عندما تم حذف موقع ملزم مير 137 (M137-BS 2 Δ) (ج ) المنطقة 3 (M137-BS 3-5) يحتوي على ثلاثة توقع مواقع الربط، وكان بناء الأكثر تضررا بشكل كبير. (~ تخفيض 80٪ من النشاط تحكم luciferase المراسل). لتحديد أي من المواقع وظيفية، وأنشأنا سلسلة من بنيات الحذف تحتوي كل مجموعة من الحذف موقع ملزمة. حذف الفردي للمواقع الربط زيادة النشاط التي كتبها ~ 10٪ في كل حالة (M137-BS 3-5 Δ3، M137-BS 3-5 Δ4، M137-BS 3-5 Δ5)، وحذف أي مزيج من 2 من 3 مواقع زيادة النشاط بمبلغ إضافي ~ 20٪ (M137-BS 3-5 Δ3 / 4، M137-BS 3-5 Δ3 / 5، M137-BS 3-5 Δ4 / 5). حذف جميع مستويات التعبير ثلاثة مواقع ملزمة عاد إلى ~ 90٪ من النشاط تحكم luciferase المراسل (M137-BS 3-5 Δ3 / 4/5). تم احتساب فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات باستخدام اختبار ANOVA تليها بعد خاصة توكي الحساب. يشار أهمية التي كتبها * P <0.05، ** p <0.01 و*** P <0.001. لاحظ أنه في الجزء ج أهمية الفرق بين بناء المنطقة 3 (M137-BS 3-5) وتأثير حذف مواقع الربط الفردية على النحو التالي: M137-BS 3-5 Δ3 (P <0.05)، M137- BS 5/3 Δ4 (P <0.01)، M137-BS 3-5 Δ5 (P <0.001). لقد لخصت هذا في الشكل كما يجري كل ثلاث p <0.05 لوضوح. النتائج هي ممثل من اثنين على الأقل من تجارب مستقلة وذكرت بأنه متوسط ​​+/- الانحراف المعياري من 3 مكررات البيولوجية.

الصورة بالحجم الكامل

لمزيد من التحقيق في دور MIR137 كمرشح التوحد نحن مصممون إذا الجينات المستهدفة من قبل مير 137 كانوا هم أنفسهم متورطين في التوحد. من التوحد قاعدة المعرفة (AutismKB) 15 استخرجنا الجينات المتورطة في التوحد المتلازمات وغير المتلازمة (N = 3067). باستخدام TargetScan 6.2 خوارزمية 10 حددنا الأهداف المتوقعة للمير 137 (N = 1144). وعند مقارنة هذه القوائم الجينات اثنين لاحظنا تداخل واسع النطاق (N = 263) التي تم حسابها أن تكون كبيرة للغاية (ع <7.130e-23) (الجدول التكميلي S1). وأظهرت قائمة الجينات المتداخلة تمثيل الإفراط في مهمة لفئات GO بما في ذلك انتقال متشابك (adjP = 4.58e-07) والجهد الموجبة بوابات النشاط قناة (adjP = 7.36e-06)، وإثراء للبروتينات مترجمة إلى المشبك (adjP = 8.53e-07) ومقصورة محور عصبي (adjP = 4.25e-06) (انظر التكميلية الجدول S2 للحصول على نتائج GO الكاملة). وشملت هذه القائمة الجينات المتداخلة أيضا بعض المرشحين التوحد الأكثر التحقق جيدا مثل NRXN1، SHANK2، SCN2A وCACNA1C. وهكذا بالإضافة إلى تنظيم RORA، مير 137 قد تكون مسؤولة عن السيطرة على مستويات عددا من الأهداف التي تعمل في شبكات التوحد الجينات.

نقاش

أي إس دي إس هي مجموعة من العاهات الخلقية التي تتميز التفاعل ضعف الاجتماعي والتواصل، والسلوكيات النمطية المتكررة والمصالح مقيدة. أي إس دي إس يبرهن على وجود عنصر وراثي قوي لكن الأسس الجينية معقدة وارتبطت العديد من الجينات مع ASD قابلية حتى الآن 15، 16. يعكس التعقيد الجيني وراء ASD، وقد أظهرت العصبية التشريحية والوظيفية الدراسات انخفاض في العديد من الوظائف البيولوجية المختلفة مثل تمايز الخلايا العصبية والتصاق، والربط العصبي synaptogenesis، و، انتقال متشابك واللدونة.
قد تورطت عدد من مناطق الدماغ في أمراض الأعصاب من أي إس دي إس، ولكن المخيخ يمثل واحدة من أكثر المناطق المتضررة بدعم قوي في التوحد. وقد لوحظ في كثير من الأحيان تشوهات التشريحية في المخيخ عن طريق الرنين المغناطيسي (MRI) والدراسات النسيجية في مرضى التوحد 17، 18، 19. يتأثر تفعيل المخيخ قياس عبر وظيفية التصوير بالرنين المغناطيسي الوظيفي (fMRI) كما في الأفراد المصابين بالتوحد خلال المهام الحركية 20، 21. يتم تخفيض الخلايا العصبية (أجهزة الكمبيوتر) في المخيخ في عدد في أدمغة المصابين بالتوحد (على النحو الذي استعرضه Palmen وآخرون 22)، ولقد لوحظت تغيرات شكلية في الخلايا العصبية للدماغ نوى عميقة 23. مرضى التوحد عرض عادة خلل الأداء وغيرها من الظواهر التحكم في المحركات، ولكن تم أيضا تورط المخيخ في معالجة غير الحركية المتعلقة endophenotypes التوحد مثل اللغة والتعليم العالي بغية معالجة الاجتماعي أو العاطفي 17. وعلاوة على ذلك، فإن العديد من الجينات التي ترتبط بقوة إلى أي إس دي إس (مثل SHANK3، EN2 وMET) تلعب دورا هاما في تنمية دماغ والصيانة.
التحليل الجزيئي للالتعبير الجيني وعلامات جينية مرتبطة ASD حالة المصاب قد تورط RORA كما رواية جين مرشح التوحد. RORA غير منظم النسخي وكما تم ربط الجينات المستهدفة لالقابلية للASD ولها أدوار في مسارات المرتبطة ASD 3. وأعرب ومن المثير للاهتمام RORA عالية جدا في المخيخ وفقدان كامل للRORA في نماذج الماوس يؤدي إلى ضمور المخيخ واسعة النطاق والنمط الظاهري رنحي 24، 25. كشفت الفئران المعدلة وراثيا المشروط الذي خسر RORA التعبير في الخلايا العصبية في مراحل ما بعد الولادة (> P10) دورا هاما في استمرار بقاء أجهزة الكمبيوتر وصيانة الدولة التمايز ناضجة 26. وضعف القدرات الحركية بقوة في هذه الفئران، ويرجع ذلك إلى خسارة هائلة من الخلايا العصبية وانخفاض التورق والعمود الفقري كثافة الأشجار الجذعية في أجهزة الكمبيوتر على قيد الحياة 26. وقد لوحظ انخفاض التعبير RORA في القشرة وcerebelllum في أدمغة المصابين بالتوحد. ونظرا للدور مير 137 في استهداف وdownregulating RORA، فمن الممكن أن التعبير خارج الرحم أو غير مناسب مير-137 وبعدها RORA mysregulation، على سبيل المثال في المخيخ، يمكن أن يسهم في ASD.
مير-137، الدماغ المخصب ميرنا، وقد تبين أن من المهم في الخلايا العصبية نضوج والهجرة والاتصال من خلال تنظيم الجينات مثل KLF4 - عامل النسخ تشارك في نمو محور عصبي 12. وربطت دراسات عديدة بما في ذلك GWAS التحليل التلوي MIR137 مع الاضطرابات المعرفية مثل الفصام وآخرها ASD 27. كما تم تحديد الحذف متداخلة من موضع MIR137 في المرضى الذين يعانون من إعاقة ذهنية 12. وحددت دراسة GWAS على نطاق واسع علاقة قوية بين وثيقة SNP إلى MIR137 والفصام 27 ومتابعة لاحقة حتى اقترح أن SNP التي تم تحديدها كان مرتبطا مع انخفاض مير 137 مستويات التعبير في عينات من المرضى بعد الوفاة 28. ومن المثير للاهتمام، عرضت الجينات الأخرى التي تظهر بالاشتراك مع الفصام في هذه الدراسة GWAS ان يكون هدفا للمير 137 29، 30، مما يشير إلى أن مسارات متقاربة يمكن أن تسهم في هذا الاضطراب العصبية معقدة.
على الرغم من واضح سريريا، والفصام والتوحد يبدو أن أشاطركم بعض العوامل العصبية الخلوية و / أو وراثية. على سبيل المثال، والتغيرات في كثافة العمود الفقري شجيري قد تورطت في كل من الاضطرابات، مع فقدان العمود الفقري شجيري لاحظت في الفصام، ولكن زيادة أعداد العمود الفقري في عينات التوحد 31، 32. وقد تبين أن مستويات عالية من مير 137 ليكون حاضرا في المشبك، والتي تلعب دورا في السيطرة مباشرة شجيري النضج العمود الفقري وكثافة 33. ومن المثير للاهتمام، وجدناها هنا لتخصيب كبير من الجينات المترجمة synaptically التي كانت على حد سواء التوحد الجينات المرشحة وتوقع مير 137 أهداف، بما في ذلك SHANK3 - جين مهم لتشكيل المشبك وظيفة. وبالمثل، فإن مير 137 NRXN1 الجين المستهدف هو أحد عوامل الخطر لكلا التوحد وانفصام الشخصية وارتبط لSNP في هذا الجين مع التغيرات في جبهة حجم المادة البيضاء - وهو endophenotype المشترك لكلا اضطرابات 34.
هنا، علينا أن نظهر وجود صلة مباشرة بين الجزيئية اثنين من الجينات المرتبطة سابقا مع التوحد، RORA وMIR137. ويرتبط انخفاض RORA إلى الظواهر التوحد ومير 137 أعمال لقمع RORA، وبالتالي فمن الممكن أن الازدواجية أو الطفرات التي تنتج overexpression من مير 137 في المرضى، لا سيما في المخيخ، يمكن أن يؤدي إلى آثار مماثلة. الجمعيات ذكر سابقا بالإضافة إلى البيانات الوظيفية لدينا والإفراط في تمثيل التوحد الجينات المرشحة التي تستهدفها هذه مير توفر الدعم لMIR137 كمرشح ASD. الاختبار المباشر لمير 137 المتغيرات ومستويات التعبير في مرضى التوحد قد تسلط الضوء على مساهمة هذا الرنا الميكروي إلى النمط الظاهري معقدة من ASD وتكشف مسارات الوراثية المشتركة التي تكمن وراء الاضطرابات العصبية المعقدة مثل التوحد وانفصام الشخصية.

طرق

استنساخ

تم إنشاء تعبير بناء مير 137 عن طريق تضخيم المنطقة ترميز النسخة الأولية من الحمض النووي الجيني البشري باستخدام بادئات التالية: تطلعية 5'-TTACTACCGGTGAGCAGCAAGAGTTCTGGTG-3 "و العكسية 5'-AGTTACGAATTCGAAAGTGCTACCTTGGCAACCAC-3". تم استنساخ جزء تضخيم في ناقلات pLKO.1 باستخدام AgeI وEcoRI، وكان يستخدم التسلسل المباشر لتأكيد وجود تسلسل المرجوة. وأكد تعبير عن السلائف وتنضج مير 137 عبر QPCR (لا تظهر البيانات).
تم إنشاء إيجابي بناء مراسل التحكم (M137 التشيك) ​​التي تحتوي على مواقع 4 متتابعة مير 137 ملزمة المصب مباشرة لمراسل luciferase المراسل اليراع في ناقلات pGL4.23 التعبير (PROMEGA) للتحقق من حساسية مقايسة. تم إنشاؤه في بناء وفقا لبروتوكولات نشرت سابقا 35. لفترة وجيزة، تم تصميم الدوبلكس بنسبة ضئيلة لاحتواء اثنين من ذات حساسية عالية مير 137 مواقع الربط مفصولة فاصل 6 النوكليوتيدات. عندما صلب، والدوبلكس تشكل يتدلى متوافقة مع تقييد نوكلياز داخلية KflI لتمكين الإدراج الاتجاه إلى ناقلات الوجهة. منذ pGL4.23 الأصلي لا تحتوي على أي تقييد مواقع KflI نحن المهندسة هذه النواقل إضافة موقع واحد KflI التقييد في 3'UTR من الجينات luciferase المراسل اليراع. استخدمت oligos المجانية التالية: تحسس: 5'-GACCCCTACGCGTATTAAAGCAATAAATATTCCTACGCGTATTAAAGCAA TAAGG-3 "، العقاقير: 5'-GTCCCTTATTGCTTTAATACGCGTAGGAATATTTATTGCTTTAATACGCG TAGGG-3". تم ligated oligos صلب في الموقع KflI وبسبب حجم جزء صغير وتسلسل غير المتناوب، نسخ متعددة من لجنة التحقيق (تمثل 2 مواقع الربط لكل منهما) يمكن إدراجها في ناقلات. نحن فحص عدد من البلازميدات الناتجة عن طريق التسلسل المباشر واختيار التركيبة التي تحتوي على أربعة مير 137 مواقع متتابعة ملزمة لاستخدامها سيطرتنا بناء إيجابي (M137 التشيك). باستخدام نفس التقنية، ومراقبة سلبية "سارعت" تم إنشاء ملزم مراسل موقع بناء (SCR التشيك) ​​باستخدام oligos التالية: تحسس: 5'-GACCCTCCTCTGTCACTACATCTTAGAATATTCTCCTCTGTCACTACATC TTAGAGG-3 "، العقاقير: 5'-GTCCCTCTAAGATGTAGTGACAGAGGAGAATATTCTAAGATGTAGTGACA GAGGAGG-3". يحتوي هذا البناء تكوين قاعدة مشابهة جدا ومراقبة إيجابية لكن تم تعديلا على قواعد لضمان عدم مواقع الربط مير 137 لا تزال قائمة.
تم استنساخ المناطق RORA 3'UTR في ناقلات pGL4.23 التعبير (PROMEGA) المصب من اليراع مراسل luciferase المراسل الجينات باستخدام بادئات من الجدول 1 وتقييد مواقع XbaI / FseI. تم إنشاء بنيات الحذف باستخدام عدة QuickChange الموقع الموجه الطفرات (Stratagene) حسب تعليمات الشركة الصانعة مع الاشعال المفصلة في الجدول 2. وقد استخدم التسلسل المباشر لتأكيد وجود الحذف المطلوب.
الجدول 1: الاستنساخ من المناطق RORA 3'UTR

الجدول بالحجم الكامل

الجدول 2: الموقع موجه الطفرات الاشعال المستخدمة لإنشاء بنيات الحذف

الجدول بالحجم الكامل

ثقافة الخلية وترنسفكأيشن

ما نمت الخلايا HEK293 في Dulbecco لتعديل النسور المتوسطة (DMEM) (إينفيتروجن) والخلايا SH-SY5Y في DMEM: وسائل الإعلام F12 (إينفيتروجن). واستكملت وسائل الإعلام مع 10٪ من الجنين العجل المصل (سيغما)، 2 مم L-الجلوتامين (سيغما) و 2 ملي البنسلين / الستبرتوميسين (سيغما). وقد نمت الخلايا عند 37 درجة مئوية في وجود 5٪ CO2. أجريت Transfections الخلايا SHSY5Y وHEK293 باستخدام GeneJuice® (Novagen)، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.

فحص luciferase المراسل

كانت المصنفة الخلايا في مناطق ذات كثافة من 2.5 × 10 4 خلايا لكل سم 2 (60-70٪ confluency)، 24 ساعة قبل ترنسفكأيشن. ويبني مراسل شارك transfected-في الخلايا البشرية (SHSY5Y أو HEK293) جنبا إلى جنب مع Renilla مراسل الجين (ااا-TK) للتطبيع الداخلي. 48 ساعة بعد ترنسفكأيشن اليراع تم قياس الأنشطة luciferase المراسل و luciferase Renilla حسب تعليمات الشركة الصانعة (المزدوج luciferase المراسل مقايسة مراسل النظام، PROMEGA). وأجريت التجارب luciferase المراسل في وجود أو عدم وجود المشارك ترنسفكأيشن مع overexpression بناء مير 137.

تحليل الجينات الأنطولوجيا

تم إجراء الجينات علم الوجود (GO) التحليل باستخدام برنامج Webgestalt (http://bioinfo.vanderbilt.edu/webgestalt/). تم تحديد أكثر من تمثيل فئات الأنطولوجيا الجينات عن طريق اختبار فوق الهندسي باستخدام Benjamini وهوشبرج متعددة تصحيح الاختبار 36.

المراجع

• 1.
  نغوين، A.، راوخ، TA، فايفر، GP & هو جين تاو، VW العالمية التنميط مثيلة من خطوط الخلايا lymphoblastoid يكشف المساهمات جينية لاضطرابات طيف التوحد والجينات رواية مرشح التوحد، RORA، التي يتم تخفيض في الدماغ التوحد البروتين المنتج. FASEB J 24، 3036-3051، 10.1096 / fj.10-154484 (2010).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 2.
  هو جين تاو، VW. وآخرون يفرق التنميط الجيني التعبير التوحد حالة على الضوابط والمتغيرات المظهرية لاضطرابات طيف التوحد: دليل على ضعف إيقاع الساعة البيولوجية في التوحد الشديد. التوحد الدقة 2، 78-97، 10.1002 / aur.73 (2009).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 3.
  Sarachana، T. & هو جين تاو، VW تحديد الجينوم على نطاق الأهداف النسخي من RORA يكشف التنظيم المباشر للجينات متعددة مرتبطة مع اضطراب طيف التوحد. مول التوحد 4، 14، 10،1186 / 2040-2392-4-14 (2013).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 4.
  Ylisaukko-أوجا، T. وآخرون تحليل أربع جينات neuroligin كمرشحين للتوحد. اليورو J همهمة جينيه 13، 1285-1292، 10.1038 / sj.ejhg.5201474 (2005).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 5.
  كوريا، CT آخرون زيادة مستويات BDNF وتكوين الجمعيات الجين NTRK2 تشير إلى اختلال BDNF / TrkB يشير في التوحد. جينات الدماغ Behav 9، 841-848، 10.1111 / j.1601-183X.2010.00627.x (2010).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 6.
  بيلاي، RS، باتاشاريا، SN وFilipowicz، W. قمع تخليق البروتين من قبل miRNAs: كم عدد الآليات؟ اتجاهات خلية بيول 17، 118-126، 10.1016 / j.tcb.2006.12.007 (2007).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 7.
  Sarachana، T.، تشو، R.، تشن، G.، منجي، HK & هو جين تاو، VW التحقيق في شبكات الجينات التنظيمية بعد النسخي مرتبطة باضطرابات طيف التوحد من قبل الرنا الميكروي التنميط التعبير من خطوط الخلايا lymphoblastoid. الجينوم ميد 2، 23، 10.1186 / gm144 (2010).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 8.
  أبو Elneel، K. وآخرون. ديسريغولاتيون غير المتجانسة من microRNAs عبر طيف التوحد. Neurogenetics 9، 153-161، 10.1007 / s10048-008-0133-5 (2008).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 9.
  Talebizadeh، Z.، بتلر، MG & تيودورو، MF جدوى وأهمية فحص خطوط الخلايا lymphoblastoid لدراسة دور من microRNAs في التوحد. التوحد الدقة 1، 240-250، 10.1002 / aur.33 (2008).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 10.
  لويس، BP، بورج، CB & بارتل، DP الاقتران البذور المحفوظة، وغالبا ما يحيط بها adenosines، يشير إلى أن الآلاف من الجينات البشرية هي أهداف الرنا الميكروي. سيل 120، 15-20، 10.1016 / j.cell.2004.12.035 (2005).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 11.
  أخضر، MJ آخرون على نطاق الجينوم بدعم MIR137 البديل وأعراض سلبية حادة التنبؤ الانتماء إلى سلالة المعرفي ضعف الفصام. مول الطب النفسي 18، 774-780، 10.1038 / mp.2012.84 (2013).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 12.
  فري، MH آخرون. كروموسوم ترتبط 1p21.3 microdeletions تضم DPYD وMIR137 ذوي الإعاقة الفكرية. J ميد جينيه 48، 810-818، 10.1136 / jmedgenet-2011-100294 (2011).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 13.
  عبر اضطراب المجموعة من الأمراض النفسية الجينوم الكونسورتيوم. تحديد مواضع الخطر مع الآثار المشتركة على خمسة الاضطرابات النفسية الكبرى: تحليل الجينوم على نطاق. لانسيت 381، 1371-1379، 10.1016 / s0140-6736 (12) 62129-1 (2013 ).
• 14.
  Baumjohann، D. آخرون الكتلة الرنا الميكروي مير 17 ~ 92 يعزز مرفأ تونس المالي تمايز الخلايا ويقمع-فرعية غير ملائمة التعبير الجيني. الطبيعة المناعة 14، 840-848، 10.1038 / ni.2642 (2013).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 15.
  شو، LM وآخرون. AutismKB: على المعرفة القائمة على الأدلة من علم الوراثة التوحد. الأحماض النووية بحوث 40، D1016-1022، 10.1093 / النار / gkr1145 (2012).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 16.
  وون، H.، ماه، W. & كيم، E. التوحد أسباب اضطراب طيف، آليات وعلاجات: التركيز على نقاط الاشتباك العصبي العصبية. الجبهة مول Neurosci 6، 19، 10،3389 / fnmol.2013.00019 (2013).
  • • مجلات
    • مقالة
• 17.
  فاطمي، SH. وآخرون رقة توافق: دور المرضية من المخيخ في التوحد. المخيخ 11، 777-807، 10.1007 / s12311-012-0355-9 (2012).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 18.
  ويتني، ER، كمبر، TL، بومان، ML، Rosene، DL & بلات، GJ يتم تخفيض الخلايا العصبية في مخيخي جزء من السكان من أدمغة المصابين بالتوحد: تجربة stereological باستخدام calbindin-D28k. المخيخ 7، 406-416، 10.1007 / s12311- 008-0043-ص (2008).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 19.
  بيلي، A. وآخرون دراسة إكلينيكية للمرض التوحد. الدماغ 121 (حزب العمال 5)، 889-905 (1998).
• 20.
  Mostofsky، SH آخرون الربط انخفاض والنشاط الدماغي في مرض التوحد خلال مهمة محرك الأداء. الدماغ 132، 2413-2425، 10.1093 / الدماغ / awp088 (2009).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 21.
  ألين، G. & Courchesne، E. الآثار التفاضلية من خلل المخيخ التنموي على الوظائف الإدراكية والحركية في المخيخ: دراسة الرنين المغناطيسي الوظيفي لمرض التوحد. آم J الطب النفسي 160، 262-273 (2003).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 22.
  Palmen، SJ، فان Engeland، H.، هوف، PR & شميتز، C. النتائج عصبية مرضية في التوحد. الدماغ 127، 2572-2583، 10.1093 / الدماغ / awh287 (2004).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 23.
  كمبر، TL & بومان، M. أمراض الأعصاب التوحد الطفولي. J Neuropathol ااستعمال Exp Neurol 57، 645-652 (1998).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 24.
  Doulazmi، M. وآخرون. دراسة مقارنة للخلايا العصبية في اثنين من الجينات RORalpha فئرانا معدلة وراثيا: يترنح وRORalpha (- / -). الدماغ بحوث الدماغ ديف الدقة 127، 165-174 (2001).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 25.
  Sidman، RL، لين، PW & ديكي، MM المترنح، طفرة جديدة في الماوس التي تؤثر على المخيخ. العلوم 137، 610-612 (1962).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 26.
  تشن، XR آخرون تتطلب الخلايا العصبية الناضجة والريتينويك ذات الصلة حمض اليتيم مستقبلات ألفا (RORalpha) للحفاظ على تسلق الألياف أحادية تعصيب والكبار الخصائص الأخرى. J Neurosci 33، 9546-9562، 10.1523 / JNEUROSCI.2977-12.2013 ( 2013).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 27.
  الفصام النفسي الجينوم على نطاق الرابطة دراسة (GWAS) الكونسورتيوم. وتحدد الدراسة رابطة الجينوم على نطاق خمسة الفصام مواضع جديدة. نات جينيه 43، 969-976، 10.1038 / ng.940 (2011).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 28.
  Guella، I. آخرون تحليل مير 137 التعبير وrs1625579 في ظهراني جانبي قشرة الفص الجبهي. J Psychiatr الدقة 47، 1215-1221، 10.1016 / j.jpsychires.2013.05.021 (2013).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 29.
  كوون، E.، وانغ، W. & تساي، LH التحقق من الجينات المرتبطة الفصام CSMD1، C10orf26، CACNA1C وTCF4 كما مير 137 أهداف. مول الطب النفسي 18، 11-12، 10.1038 / mp.2011.170 (2011).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 30.
  كيم، AH آخرون التحقق التجريبي من الفصام مرشح ZNF804A الجينات كهدف لهائل سعيد أنعم-مير 137. Schizophr الدقة 141، 60-64، 10.1016 / j.schres.2012.06.038 (2012).
  • • ISI
    • مجلات
    • مقالة
• 31.
  Hutsler، JJ & تشانغ، H. زيادة الكثافة العمود الفقري شجيري على الخلايا العصبية الإسقاط القشرية في اضطرابات طيف التوحد. الدماغ الدقة 1309، 83-94، 10.1016 / j.brainres.2009.09.120 (2010).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 32.
  Glantz، LA & لويس، DA انخفاض كثافة العمود الفقري شجيري على الفص الجبهي الخلايا العصبية الهرمية القشرية في الفصام. قوس الجنرال الطب النفسي 57، 65-73 (2000).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 33.
  SMRT، RD وآخرون. الرنا الميكروي مير 137 ينظم نضوج الخلايا العصبية من خلال استهداف بتحول يغاز العقل قنبلة-1. الخلايا الجذعية 28، 1060-1070، 10.1002 / stem.431 (2010).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 34.
  Voineskos، AN. وآخرون Neurexin-1 والفص الجبهي المادة البيضاء: النمط الظاهري وسيطة تداخل لاضطرابات الفصام والتوحد. بلوس واحد 6، e20982، 10.1371 / journal.pone.0020982 (2011).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 35.
  Kluiver، J. آخرون جيل السريع من الإسفنج الرنا الميكروي لتثبيط الرنا الميكروي. بلوس واحد 7، e29275، 10.1371 / journal.pone.0029275 (2012).
  • • CAS
    • مجلات
    • مقالة
• 36.
  تشانغ، B.، كيروف، S. & Snoddy، J. WebGestalt: نظام متكامل لاستكشاف مجموعات الجينات في سياقات البيولوجية المختلفة. الأحماض النووية بحوث 33، W741-748 (2005).
  • • ISI
    • CAS
    • مجلات
    • مقالة

تحميل مراجع

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من قبل ماري كوري منحة التكامل الوظيفي (CIG) منحت لSCV

معلومات الكاتب

الانتماءات

• اللغة وعلم الوراثة الإدارة، معهد ماكس بلانك لعلم اللغة النفسي، Wundtlaan 1، 6525 XD، نيميغن، وهولندا
  
  
  • باولو Devanna
  • وسونيا C. فيرنيس
• معهد Donders عن وظيفة الدماغ والسلوك، جامعة رادبود، 6525 EN، نيميغن، وهولندا
  
  
  • سونيا C. فيرنيس

مساهمات

PD تصور تصميم الدراسة، التي نفذت العمل التجريبي والتحليلي وصياغة المخطوط. SCV تصور تصميم الدراسة، يقوم العمل التحليلي وصياغة المخطوط.

تضارب المصالح

الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

المؤلف المقابلة

المراسلات إلى سونيا C. فيرنيس.

معلومات تكميلية

وثائق وورد

• 1. معلومات تكميلية
  
  
  البيانات التكميلية

ملفات اكسل

• 1. معلومات تكميلية
  
  
  التكميلية S1 الجدول. قائمة الأهداف مير 137 حددت أيضا الجينات المرشحة التوحد.
• 2. معلومات تكميلية
  
  
  التكميلي S2 الجدول. كامل جين علم الوجود (GO) تحليل الجينات من الجدول S1.

تعليقات

عن طريق تقديم التعليق فإنك توافق على الالتزام من قبل لدينا شروط وتعليمات مجتمع. إذا كنت تجد شيئا المسيئة أو التي لا يتوافق مع شروطنا أو المبادئ التوجيهية إرضاء العلم أنها صورة غير ملائمة.

هذا العمل مرخص تحت رخصة التشارك الإبداعي العزو غير التجارية المشاركة بالمثل 3.0. لعرض نسخة من هذا الترخيص، زيارة http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/

أدوات المقال

• PDF
• في الفيسبوك حصة
• على تويتر حصة
• عدد وادوات

 

[رافت ابراهيم]

 

النوم على نحو سليم مع التوحد

نشر يوم 1 يونيو 2007

المجلد. 16 • العدد 5 • صفحة 53
النوم على نحو سليم مع التوحد

يمكن لتلقي العلاج من اضطرابات النوم أن يكون مجزيا للأطفال وأسرهم.
بقلم بيث Malow، MD، MS
تكتسب اضطرابات التوحد والنوم المزيد من الاهتمام في الأوساط العلمية والإعلامية، ولكن فقط في الآونة الأخيرة يحدد الباحثون انهم مترابطة.
تتأثر بعض الأطفال الذين يعانون من اضطرابات طيف التوحد (ASD) من خلال قلة النوم، والتي يمكن أن تؤدي إلى تفاقم السلوكيات الإشكالية النهار وتسهم في زيادة التوتر العائلي. ارتبط قصر فترة النوم مع السلوك النمطي، وكذلك تضخم عشرات التوحد العامة وعجز المهارات الاجتماعية. 1
ومع ذلك، فإن تحديات كوالد لطفل يعاني من التوحد قد تتداخل مع وجود الوقت والطاقة لتعليم الطفل على النوم والعودة إلى النوم على حضارته. تحديد وعلاج اضطرابات النوم قد يؤدي ليس فقط في مزيد من النوم الموحد، المزيد من الوقت السريع لتغفو، وتجنب يلة wakings، ولكن أيضا قد تؤثر بشكل إيجابي السلوك خلال النهار والتوتر العائلي.
يستريح غير مستقر
أسباب مشاكل النوم في ASD هي المتعددة العوامل. (انظر الجدول، صفحة 56.) أعراض الأرق، الذي يعرف بأنه صعوبة بدء أو الحفاظ على النوم، ومشاكل النوم الرئيسية التي أبلغ عنها آباء وأمهات الأطفال الذين يعانون من التوحد.
ASD يؤثر على العديد من أنظمة العصبي المتورطين في تعزيز النوم وإقامة دورة النوم واليقظة العادية. وتشمل هذه الميلاتونين والسيروتونين.
الميلاتونين، وهو مادة المعززة النوم تصنيعه من مادة السيروتونين، وصدر عن الغدة الصنوبرية، وتثبيط من الضوء ويفرز في الليل. انخفاض إفراز ليلية من 6 sulphatoxymelatonin، المستقلب الرئيسي من الميلاتونين، وقد لوحظ في الأطفال الذين يعانون من التوحد مقارنة مع الأطفال غير المصابين بالتوحد. 2
شارك في القائمة الظروف النفسية والصرع والأدوية النفسية، واضطرابات النوم الأساسية، جنبا إلى جنب مع عادات النوم السيئة، كما يمكن أن تسهم في النوم القلق.
تقييم مشاكل النوم
عند تقييم الأطفال المصابين بالتوحد، ينبغي أن التاريخ النوم تتضمن النوم، الوقت الاستيقاظ، وأي الاستيقاظ أثناء الليل مع فترات المقدرة والسلوكيات المرتبطة بها. وينبغي تقييم أداء النهار، بما في ذلك فرط النشاط، والنعاس، والقيلولة.
ينبغي تشجيع الآباء والأمهات للحفاظ على مذكرات النوم لتقييم الكمون النوم، ووقت النوم الكلي، ليلة wakings، والاستجابة للعلاج. استبيان النوم مثل الطفل عادات النوم الاستبيان هو أداة إضافة مفيدة لتقييم مجالات متعددة من مشاكل في النوم، بما في ذلك الاضطرابات المرتبطة بالنوم في التنفس والقلق والنوم، ومقاومة النوم، والنعاس أثناء النهار. 3
الاستبيانات واليوميات النوم الانتهاء من الآباء توثيق باستمرار أن الأطفال الذين يعانون من التوحد أكثر عرضة من عادة وضع الأطفال في المعرض:

<li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأرق مع مرور الوقت الطويل لتغفو <li style=";text-align:right;direction:rtl"> انخفضت مدة النوم والاستمرارية مع زيادة الاستيقاظ <li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعراض-المختلين التنفس أثناء النوم مع الشخير بصوت عال أو التنفس صاخبة <li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الصباح الباكر الوقت أعقاب <li style=";text-align:right;direction:rtl"> توقف التنفس أثناء النوم <li style=";text-align:right;direction:rtl"> حركات الساق <li style=";text-align:right;direction:rtl"> صريف الأسنان (طحن الأسنان). 4-9

كما وصفت آباء الأطفال الناجمة عن النوم مع الارتباك، تجول، أو الصراخ، وكذلك النعاس أثناء النهار. مقاومة النوم أو مخاوف ليلية أيضا تساهم في النوم القلق في هذه الفئة من السكان، وشارك في النوم مع الوالدين هو شائع.
مقياس التصنيف السلوكي مثل المرجعية سلوك الطفل وشاشة المجالات السلوكية الأخرى، بما في ذلك المزاج، والقلق، والعدوان، وفرط النشاط. 10،11
عند الاقتضاء، والتقييم النفسي لتقييم لالاضطراب الثنائي القطب والاكتئاب، أو اضطرابات القلق وينبغي الحصول على، وجميع هذه الشروط يمكن أن تؤثر على النوم.
وينبغي السعي حالات خطيرة مثل اضطرابات متصلة التنفس أثناء النوم، ومتلازمة تململ الساقين، والمضبوطات، والنوم. نسأل الآباء عن وجود الشخير، توقف التنفس أثناء، الشخير أو يلهث، والتعرق، والصراخ، والإفراط حركات الساق أو النشاط.
يجب إحالة الطفل لدراسة النوم إذا كان هناك مصدر قلق للاضطراب التنفس المرتبطة بالنوم أو التشنجات المرتبطة بالنوم. (انظر الشريط الجانبي، أعلاه.) ينبغي أن تدرج A 21-قناة الرصد مخطاط كهربية الدماغ عندما يشتبه المضبوطات لتقييم نشبي والنشاط النشبات. A النوم متعددة اختبار الكمون يمكن أداؤها في صباح اليوم التالي PSG لتقييم النعاس أثناء النهار بموضوعية وأعراض النوم.
التدخل الطبي
تحديد سبب اضطراب النوم أمر بالغ الأهمية للتدخل المناسب. على سبيل المثال، والأرق بسبب سوء النظافة النوم قد يكون استجابة لالتدخلات السلوكية، بينما الأرق بسبب ضعف السيطرة الإيقاعية من النوم قد يكون استجابة للعلاج مع الميلاتونين التكميلي أو غيرها من العلاجات التي تستهدف دورة الساعة البيولوجية.
النعاس أثناء النهار بسبب توقف التنفس أثناء النوم الانسدادي يجب أن تستجيب للعلاج مع استئصال اللوزتين و الغدانيات أو غيرها من العلاجات، والأحداث ليلية بسبب نوبات الصرع يجب أن تستجيب للأدوية المضادة للصرع.
علاج اضطراب النوم قد يحسن السلوك خلال النهار. الجمعيات بين SDB والسلوكيات الشاذة النهار مثل فرط النشاط والعدوانية موثقة جيدا في عادة الأطفال في مرحلة النمو مع تحسن في السلوكيات المشكلة بعد استئصال اللوزتين و الغدانيات 12-14
في الأطفال المصابين OSA، استئصال اللوزتين و الغدانيات هي الخط الأول من العلاج. في فاندربيلت مركز اضطرابات النوم، ناشفيل، تينيسي، قمنا بتقييم فتاة مع ASD وOSA الذي كان يعالج مع استئصال اللوزتين و الغدانيات توقف التنفس أثناء النوم. 15
على الرغم من أنها لا تزال تحتفظ لها التوحد التشخيص على جدول مراقبة تشخيص التوحد، ادائها في هذا الاختبار وموثقة تحسين سلوك الطفل المرجعية في مجموعة متنوعة من المجالات، بما في ذلك التفاعل الاجتماعي والقدرة على التركيز. 10،16
وبالنسبة للأطفال حيث استمرت الأعراض أو الجراحة ليست خيارا، فإنها قد تكون مرشحة للضغط مجرى الهواء الإيجابي المستمر. مطلوب ويمكن أن يتحقق، في كثير من الأحيان جنبا إلى جنب مع المعالج التنفسي أو تقني النوم الحساسية من المرضى إلى CPAP.
وقد أظهرت الميلاتونين التكميلي، والمكملات الغذائية، وعد في علاج الأرق، وبخاصة ما يتعلق منها الشروع في النوم. ومع ذلك، لا ينظم الميلاتونين من قبل إدارة الغذاء والدواء، ولم تثبت الجرعات والآثار السلبية.
العلاجات غير الدوائية دائما يجب أن يسبق العلاج مع الأدوية لتعزيز النوم. ومع ذلك، في بعض الحالات، يمكن أن الأدوية تكون مفيدة.
وهناك مجموعة واسعة من الخيارات لمعالجة دوائية تستخدم أفضل بالاشتراك مع التقنيات السلوكية مصممة خصيصا لسبب المشكلة نوم الطفل الفردية وأي أمراض المصاحبة للأمراض النفسية (على سبيل المثال، استخدام مثبطات امتصاص السيروتونين في الأطفال المصابين بالتوحد والتعايش القلق).
مع جميع الأدوية، فإنه من المهم أن تبدأ مع الجرعات المنخفضة وزيادة تدريجيا، ومراقبة بعناية عن الآثار السلبية لأطفال المصابين بالتوحد قد تكون حساسة لفئات معينة من الأدوية وغير قادر على التواصل آثار جانبية.
النظافة النوم
يجب تثقيف الآباء والأمهات في المبادئ الأساسية للنظافة النوم.
وتشمل هذه العملية النهار، والنوم منتظم ومتسق، سرير ثابت لا يستخدم لأنشطة أخرى مثل مشاهدة التلفزيون أو المهلة، وهو منظم مهدئ النوم الروتين، والأضواء الخافتة مساء. يجب على الأطفال تجنب الكافيين وأنشطة محفزة في ساعة قبل النوم.
العلاج السلوكي من مشاكل النوم لدى هؤلاء الأطفال يقلل من الإجهاد الوالدين، وزيادة رضا الوالدين مع وبها الطفل من النوم، ويزيد من إحساسهم السيطرة والقدرة على التعامل مع النوم طفلهم. 8
تثبيط استخدام الوسائل النوم مثل النوم مع التلفزيون أو مع والديه في الاتصال الجسدي. هذه المساعدات النوم قد تعزز النوم عند النوم ولكن تسهم أيضا في ليلة wakings. عندما التلفزيون أو الأم غير موجود، والإثارة وجيزة من النوم قد تصبح الاستيقاظ ليلا لفترات طويلة.
يدعم البصرية تبين ما هو متوقع من الطفل هي جزء هام من هذا النهج في التوحد. جدول البصرية للروتين وقت النوم والبصرية "العودة إلى السرير" والتذكير على باب التواصل للطفل توقعات الوالدين. المكافآت الصباح أو استخدام "تمرير النوم" للحد من الليل wakings قد تكون مفيدة. 17
للحصول على قائمة المراجع، انظر أسفل "من طباعة" شريط الأدوات على الجانب الأيسر من الصفحة الرئيسية لدينا في www.advanceweb.com/respmanager.
بيت Malow، MD، MS، أستاذ مشارك في علم الأعصاب والمدير الطبي في اضطرابات فاندربيلت النوم مركز، ناشفيل، تينيسي فريق البحث الدكتور Malow وحاليا تجري دراسات النوم لدى الأطفال المصابين بالتوحد، بما في ذلك دروس تعليم الآباء ومسارات الميلاتونين لتعزيز نوم. لمزيد من المعلومات حول أبحاثها، يرجى الاتصال autismsleepresearch@vanderbilt.edu.
الطاولة. أسباب اضطراب النوم في التوحد
الأرق
العوامل البيولوجية الذاتية لمرض التوحد (على سبيل المثال، نقص الميلاتونين)
فرط الحساسية للمؤثرات البيئية
عادات النوم السيئة
اضطراب نفسي (على سبيل المثال، والقلق، والاكتئاب)
الأدوية النفسية
تتعايش الصرع
اضطراب النوم الأساسية (على سبيل المثال، توقف التنفس أثناء النوم، وحركات الأطراف الدورية من النوم)
النهار النعاس
النوم الكافي
النوم تعطلت من اضطراب النوم الابتدائي
كآبة
نوبات الصرع
الأدوية
الخدار
فعاليات ليلية
نوبات الصرع
اضطرابات الإثارة اللاريمي
REM اضطراب السلوك
اضطراب حركة الإيقاعي
اختبار النوم ناجحة في الأطفال الذين يعانون من التوحد
على الرغم من أن للوهلة الأولى يبدو أن الأطفال المصابين بالتوحد لا تكون قادرة على تحمل دراسات النوم بسبب القلق وحساسية اللمس، يمكن تحقيق نجاح اختبار النوم.
في دراسات التوحد والنوم أجريت في جامعة فاندربيلت في ناشفيل بولاية تنيسي، التكنولوجيين النوم تفريد تجربة دراسة النوم لتحفيز الطفل من خلال توفير المعززات وdistractors. ويمكن أن تشمل هذه اللاصق والنشاط الكتب والألعاب الحساسية. كما أنها خلقت الكتب المصورة باستخدام نهج "قصة اجتماعية" للمساعدة في إعداد الأطفال لتجربة دراسة النوم والرجوع إلى الإجراء باستخدام لغة الصديقة للطفل. 1
من الضروري في بعض الأحيان للسماح للطفل لتغفو قبل وضع أجهزة الاستشعار. في الغالبية العظمى من الأطفال، ولكن، وأجهزة الاستشعار يمكن وضعها قبل النوم للمساعدة في تحديد زمن النوم.
وقد أظهرت الدراسات البحثية فاندربيلت من النوم ومرض التوحد تقارير النوم الأبوية (على سبيل المثال، جيدة مقابل الفقراء) ترتبط مع النتائج باريس سان جيرمان. ينامون جيدة مع التوحد تشبه عادة تتطور ينامون جيدة على باريس سان جيرمان وأظهرت تحسن السلوك النهار والتوحد الأعراض بالمقارنة مع الأشخاص الذين ينامون الأكثر فقرا. 2 ومع ذلك، قد تعكس النتائج فاندربيلت تأثير ايجابي في السلوك خلال النهار في النوم أو أن يفسر شدة مرض التوحد بدلا من تأثير النوم على السلوك خلال النهار.
وستكون هناك حاجة الدراسات التدخلية التي تقيس السلوك خلال النهار والنهاية الأخرى بعد التحسينات النوم لتوثيق الآثار أن تحسين النوم بشكل إيجابي على السلوك خلال النهار في هذه الفئة من السكان.
Actigraphy
Actigraphy هو بديل لباريس سان جيرمان لتوثيق اضطرابات النوم لدى الأطفال المصابين بالتوحد. في actigraphy، والطفل ترتدي عداد النشاط على المعصم يحدد مقدار الحركة والراحة. هذه بمثابة بدائل من النشاط والنوم. Actigraphy هو أكثر ملاءمة وأقل تدخلا وتكلفة من باريس سان جيرمان، ويمكن جمع البيانات ليال متعددة. 3
على الرغم من أن توصف بأنها مقياس موضوعي لدورة النوم واليقظة، actigraphy ديه يجوز تأويله حدوده في ذلك فترات من اليقظة هادئة من قبل الجهاز كما النوم، ويجوز تأويله فترات النوم لا يهدأ من قبل الجهاز كما اليقظة. لذلك، من الأفضل تفسير البيانات من actigraphy في سياق اليوميات النوم. 4
القياس في وقت واحد actigraphy وفي المنزل أو في مختبر باريس سان جيرمان يمكن أن توفر التحقق من صحة إضافية داخل الفرد من خلال المساعدة في تفسير فترات اليقظة أو النوم الهادئ لا يهدأ. هذا يحسن من تفسير ليال متعددة من actigraphy لم يكن مصحوبا باريس سان جيرمان.
المراجع
1. Zaremba EK، باركي ME، ميسا C، K Sanniti، روزين CL. مما يجعل دراسة النوم أكثر "بالأطفال ودية:" نهج الرعاية التي تركز على الأسرة J كلين النوم ميد 2005؛ 1 (2):. 189-98.
2. Malow BA، Marzec ML، McGrew سان جرمان، وانغ L، ستون W. تميز النوم عند الأطفال الذين يعانون من اضطرابات طيف التوحد: 2006 نهجا متعدد الأبعاد النوم؛ 29 (12): 1563-1571.
3. Ancoli إسرائيل S، كول R، اليسي C، غرف M، موركروفت W، بولاك CP. . دور actigraphy في دراسة النوم وإيقاعات الساعة البيولوجية النوم 2003؛ 26 (3): 342-92.
4. سديه A، Acebo C. دور actigraphy في طب النوم. النوم ميد القس 2002؛ 6 (2): 113-24.
-Beth Malow، MD، MS
التوحد في لمحة
التوحد هو اضطراب النمو العصبي تتميز العجز الأساسية في ثلاثة مجالات رئيسية هي: التفاعل الاجتماعي، والاتصالات، والمصالح المقيدة مع السلوكيات المتكررة.
بسبب هذه الميزات المشتركة، ويعرف التوحد بأنه اضطراب الطيف. وهو يشمل اضطراب التوحد، متلازمة اسبرجر والطفولة اضطراب التفكك، متلازمة ريت، واضطراب النمو المتفشي لا ينص على خلاف ذلك. 1
الأفراد المصابين بالتوحد تختلف في شدة الأعراض. بعض الأطفال غير اللفظي تماما، في حين أن البعض الآخر العجز الاتصالات خفية فقط. قد يكون الذكاء العادي أو فوق المتوسط، على الرغم من أن نسبة الأطفال الذين يعانون من التوحد تعبر عن التخلف العقلي.
مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها تقدير معدل انتشار اضطراب طيف التوحد (ASD) ليكون بين ثلاثة وستة حالات لكل 1000 طفل. 2 اعتبارا من عام 2004، 300،000 أمريكي على الأقل طفل تتراوح أعمارهم بين 4-17 قد تم تشخيص ASD.
المراجع
1. الرابطة الأمريكية للطب النفسي. الدليل التشخيصي والإحصائي للاضطرابات النفسية. إد 4TH. واشنطن: الجمعية الأمريكية للطب النفسي. 2000.
2. مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها. الصحة النفسية في الولايات المتحدة: تقرير الوالدين التوحد تشخيص في الأطفال الذين تتراوح أعمارهم 4-17 سنة - الولايات المتحدة الأمريكية، 2003-2004 MMWR 2006؛ 55 (17): 481-6..
-