عرض مشاركة واحدة
  #8  
قديم 10-20-2015, 12:22 AM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي لطيف من الطفرات في UBE3A تسبب متلازمة Angelman

 

http://hmg.oxfordjournals.org/content/8/1/129.full

https://translate.googleusercontent....FEn572NFmphaSw



وتتميز متلازمة أنجلمان (AS) التي التخلف العقلي، وغياب خطاب، والمضبوطات، وضعف المحرك. AS ينجم عن الحذف الأم لكروموسوم 15q11-Q13، disomy أحد الأبوين الأب (UPD)، يطبع عيوب أو الخسارة من وظيفة الطفرات في موضع UBE3A الذي يشفر E6-AP بتحول البروتين يغاز. هو مطبوع الجين UBE3A مع إسكات الأب في دماغ الإنسان وإسكات مماثل من موضع Ube3a في الخلايا العصبية والخلايا العصبية قرن آمون في الماوس. لقد التسلسل إلى exons الترميز الرئيسية للUBE3A في المرضى الذين يعانون مؤشر 56 مع التشخيص السريري للAS ونمط مثيلة الحمض النووي الطبيعي. التعرف على تحليل الطفرات المسببة للمرض في 17 من 56 مريضا (30٪) منها 13 الطفرات مقطوعة، واثنين من الطفرات مغلطة، الأحماض الأمينية واحد الحذف وقفة واحدة كودون طفرة توقع بروتين ممدود. وقد تم تحديد الطفرات في ست من ثماني أسر (75٪) مع الحالة المصابة أكثر من واحد، وفي 11 من 47 حالات معزولة (23٪)؛ لم يتم العثور على طفرة في عائلة واحدة مع اثنين من الأشقاء، واحدة مع نموذجية واحدة مع النمط الظاهري شاذة. وكانت الطفرات دي نوفو في تسع من الحالات المعزولة 11. تم التعرف على تعدد الأشكال الأحماض الأمينية ثريونين استبداله باللاعب ألانين في كودون 178، وتم العثور على 3 بي بي طول تعدد الأشكال في إنترون المنبع من اكسون 8. وفي جميع الحالات بالمعلومات، كان التعبير المظهري يتفق مع يطبع مع النمط الظاهري العادي عندما كانت طفرة على كروموسوم الأب وAS النمط الظاهري عندما كانت طفرة على الصبغي الأمهات. التشخيص المختبري وتقديم المشورة الوراثية للAS معقدة، وتحليل الطفرة هو قيمة في نموذجي سريريا AS المرضى الذين يعانون من تحليل الحامض العادي.
تقديم

وتتميز متلازمة أنجلمان (AS) التي معتدلة إلى التخلف العقلي الشديد، وعدم وجود خطاب، ورعاش، وترنح، ومشية غير طبيعية، والضحك غير مناسب، واضطراب النوم والمضبوطات. ويقدر معدل الإصابة AS أن تكون 1 في 20 000، مع معظم الحالات يجري متفرقة، على الرغم من حدوث العائلية ليست نادرة. استعراض مفصل من النمط الظاهري السريرية (1، 2) والدراسات الجزيئية الأخيرة (3، 4)، وكذلك الدراسات الكثيرة (5) متاحة. AS ينجم عن نقص في التعبير الجيني من الأمهات كروموسوم 15q11-Q13، في حين نقص الأب لنفس المنطقة يسبب متلازمة برادر ويلي. تحتوي هذه المنطقة الكروموسومات العديد من الجينات والنصوص التي يتم التعبير عنها من كروموسوم الأب وأسكت على كروموسوم الأمهات، بما في ذلك الترميز المكاني صغير النووي المرتبط بروتين نووي ريبوزي ببتيد N (SNRPN) وnecdin (NDN). هناك مثيلة الفرق واسع في جميع أنحاء هذه المنطقة وأبرزها في جزيرة الدليل السياسي الشامل في نهاية 5 'من موضع SNRPN حيث كروموسوم الأب هو unmethylated مع أعربت SNRPN بينما ميثليته الكروموسوم الأمهات مع SNRPN إسكاته. ترميز الجين E6-AP بتحول البروتين يغاز (الجينات رمز UBE3A) خرائط داخل المنطقة وتورط باسم AS الجينات على أساس اكتشاف الخسارة من وظيفة الطفرات في المرضى (6، 7). بعد اكتشاف الطفرات المسببة AS، كان من المسلم به أن مركز ومطبوع مع التعبير الأمهات في الدماغ البشري (8، 9) وفي الحصين الماوس والمخيخ (10).
تسمح البيانات الوراثية الخلوية والجزيئية لتحديد العديد من الآليات الجزيئية التي تسبب AS على النحو التالي. (ط) ما يقرب من 70٪ من المرضى لديهم من جديد الحذف الخلالي من ~4 ميجا بايت على كروموسوم الأمهات 15q11-Q13، وعدد قليل من المرضى الذين لديهم الحذف مماثلة ولكنها مختلفة قليلا الناشئة من جديد أو غير متوازنة كما نقل المواقع. (ب) ما يقرب من 3-5٪ من المرضى الذين لديهم disomy أحد الأبوين الأب (UPD) مما أدى إلى نقص الأمهات. (ج) ما يقرب من 7-9٪ من المرضى قد حددت 'الطفرات يطبع' كما الميراث متحدر من والدين ولكن مع كل الكروموسومات التي لها مثيلة والتعبير النمط الأبوي (11). بعض وليس كل من هؤلاء المرضى لديهم الحذف من مركز المفترض يطبع (IC) (12). (د) ما يقرب من 4-8٪ من المرضى الذين لديهم الخسارة من وظيفة الطفرات في UBE3A (6، 7). (ت) وأخيرا، وهو جزء مؤكد من المرضى (~10-15٪) لديها نموذجية سريريا AS النمط الظاهري، ولكن أيا من العيوب الجزيئية من المجموعات الأربع الأولى هي التعرف على الرغم من تسلسل معظم الإكسونات أو كل لUBE3A. كل من تشوهات جزيئية تعرف تتسق مع التفسير الذي ينتج عن نقص AS التعبير الأمهات لUBE3A.
التسبب في AS غير معروف في الوقت الحاضر. اكتشف E6-AP على أساس قدرتها على إبطال نشاط oncoprotein البروتين p53 في وجود البروتين E6 من فيروس الورم الحليمي البشري (13، 14). وفي وقت لاحق، تبين E6-AP أن يكون E3 بتحول البروتين يغاز وأن تكون قادرة على ubiquitinating البروتين p53، وبطريقة E6 المستقلة، وhomolog البشري من البروتين الخميرة RAD23 تعيين HHRAD23A (15). Ubiquitination يستهدف البروتينات للتدهور من خلال مسار proteosomal (16 - 18)، ويمكن الافتراض أن AS النمط الظاهري قد يكون سبب الفشل في ubiquitinate مجموعة متنوعة من البروتينات المستهدفة في تلك الأنسجة حيث يتم إسكات أليل الأب لUBE3A، والتعبير تعتمد على أليل الأمهات. عدم وجود ubiquitination يمكن أن يؤدي إلى فشل للحط من هذه البروتينات أو التعديلات الفنية الأخرى من البروتينات الهدف (19). الدراسات الحديثة من نموذج الفأر من AS على أساس الطفرة فارغة الناتجة عن استهداف الجينات أثبتت الميزات المظهرية مع العديد من أوجه التشابه مع AS البشري، عيب التعلم السياقي، ضعف التقوية على المدى الطويل في شرائح قرن آمون وزادت وفرة من البروتين p53 في الخلايا العصبية والحصين الخلايا العصبية (20).

الشكل 1
تحليل الطفرة لأعضاء مختارين من كبير AS الأسرة. تم العثور على حذف 4 سنة مضت (1694del4 في الأسرة H-179) في نسب نشرت كبير مع ثمانية أشخاص المتضررين (22). تم تضخيم الجينوم DNA كما هو موضح في المواد وطرق وتحليلها على 15٪ هلام بولي أكريلاميد. يشار إلى الهجرات من المنتجات PCR العادي ومتحولة وكذلك heteroduplexes. رموز نصف الصلبة تشير تتأثر مع AS وتحمل التحور والرموز نصف تحاك تشير معروفين أو مفترضين حاملات التحور مع النمط الظاهري العادي، وتقسيم حرف مفتوحة تشير إلى وجود النمط الظاهري العادي مع عدم وجود طفرة. النجمة تحديد الأفراد لم تختبر ولكن يتوقع ان تحمل التحور.


الجدول 1
الاشعال لتضخيم والتسلسل المباشر من الحمض النووي الجيني


الجدول 2
الطفرات في متلازمة أنجلمان

درسنا الآن مرضى مؤشر 56 مع التشخيص السريري للAS ومنهم من الحذف كبيرة، كان UPD والطفرات يطبع غير موجود. حددنا 13 الطفرات اقتطاع (ثلاثة عنها سابقا) (6، 21)، واثنين من الطفرات مغلطة، واحد الحذف واحد من الأحماض الأمينية وقفة واحدة كودون طفرة توقع بروتين ممدود. حددنا حذف 4 غليان في نسب نشرت كبير، حدد الطفرات في 75٪ من الأسر متعددة و 23٪ من حالات متفرقة، وحدد تعدد الأشكال طول داخل إنترون وتعدد الأشكال مغلطة.

النتائج

اقتطاع الطفرات

والتسلسل كل من الإكسونات ترميز إطار القراءة المفتوح رئيسيا لE6-AP في 56 موضوعات كانت تعتبر أن يكون التشخيص السريري المرجح جدا من AS وتحليل الحامض العادي. تم تضخيم الجينوم الحمض النووي باستخدام بادئات هو مبين في الجدول رقم 1 يتبعه التسلسل المباشر. وقد تم تحديد ثلاثة عشر الطفرات مقطوعة في هذه المجموعة (الجدول 2). خمس من هذه الحالات شارك فيها أكثر من فرد واحد المتضررين في الأسرة، وفي هذه الأسر خمسة وأمهات الأطفال المصابين قامت الطفرة. في الأسر H-137 و H-179 حيث كان التحليل بالمعلومات، وكانت طفرة على الصبغي الأبوي في أمهات طبيعية ظاهريا وغيرها من شركات النقل طفرة طبيعية في الأسر. وقد تم توثيق هذا أكثر على نطاق واسع في نسب كبيرة المنشورة (22) مع ثمانية أشخاص على الأقل تضررا مع AS. تم العثور على هذه العائلة لتنفيذ عملية حذف أربعة قاعدة يسبب طفرة انزياح الإطار (الشكل 1). توفر هذه العائلة الأدلة الكثيرة للتوريث النمط الظاهري مطبوع، مع العديد من الأفراد وراثة طفرة من الأب ودائما وجود النمط الظاهري العادي بالمقارنة مع العديد من الأفراد الآخرين وراثة طفرة من الأم ودائما تتأثر مع AS. تم العثور على الطفرات اقتطاع كما دي نوفو الأحداث في سبع حالات (الجدول 2).

الطفرات مغلطة، حذف الأحماض الأمينية والبروتين وتوقع ممدود

تم العثور على اثنين من الطفرات مغلطة، واحد حذف الأحماض الأمينية واحد، وطفرة واحدة تؤثر على كودون وقف وتوقع بروتين ممدود في الأفراد مع AS النمط الظاهري (الجدول 2). هو أكثر تعقيدا مما كانت عليه في حالة اقتطاع الطفرات لتحديد ما إذا كانت هذه الطفرات المسببة للمرض أو المتغيرات حميدة. في وقت سابق، أبلغنا (6) إجراء تبديل التيروزين لالسيستين في كودون 21 (C21Y)، ولكن من غير المؤكد ما إذا كان هذا يمثل طفرة مسببة للمرض أو البديل حميدة. لتحديد ما إذا كان هذا كذلك استبدال حمض أميني هو طفرة مسببة للمرض، قمنا بتحليل الأخوة تتأثر وثمانية أقارب الأم (الشكل 2). ويرتبط الطفرة C21Y مع فقدان موقع انزيم التقييد ملعقة شاي 45I، ويمكن أن تقرر أن الطفرة C21Y كانت موجودة فقط في الطفل المصاب والدته. فشل تحليل مماثل لتحديد هذه الطفرة في 50 مواضيع عادية لا علاقة لها. وقد درست هذه العائلة أيضا باستخدام تعدد الأشكال 3 سنة مضت (GATGAT مقابل GAT) التي تم تحديدها في إنترون مباشرة من المنبع اكسون 8 (الشكل 2). وعلى الرغم من المتوفى وجده لأمه، كان من الممكن أن يثبت أنه أحال أليل GAT من تعدد الأشكال 3 بي بي لاثنين من بناته وأليل GATGAT إلى أخرى ابنتان. ولما كانت والدة AS مريض واحد فقط من هذه الأربعة التي تحمل طفرة C21Y، فإنه يمكن استنتاج أن هذا التحور حدث من جديد في حياتها، تورط الطفرة C21Y كما يجري في ابنها المسببة للأمراض. وكانت الطفرة مغلطة الأخرى الوحيدة التي وجدت في مرضانا استبدال يسين ليسوليوكيني في كودون 804 (I804K). حدثت هذه الطفرة من جديد في المريض ولذا فمن المحتمل جدا أن تكون المسببة للأمراض. تم العثور على واحد حذف الأحماض الأمينية للفينيل ألانين في كودون 782 (F782Δ) في شقيقان مع AS وكان حاضرا في الأم وجده لأمه. ونظرا لطبيعة الطفرات والبيانات العائلية، وهذا هو المرجح أن تكون الطفرة المسببة للمرض في هذه العائلة. A الحذف دي نوفو من 15 سنة مضت إزالة رامزة التوقف في حالة واحدة. المنطقة-3'غير مترجم قصيرة، وتسلسل النوكليوتيدات الناتجة يتوقع بروتين ممدود تنتهي في متعدد الليزين المشفرة بواسطة بولي (A) الجهاز من مرنا. ونظرا لطبيعة الطفرات ولها دي نوفو الأصل، فمن المرجح أن تكون الطفرة المسببة للمرض في هذا المريض.

الرقم 2
تحليل الأسرة H-101 للطفرة C21Y مغلطة. تم العثور على طفرة فقط في الصبي المصاب والدته. وأشار تحليل لتعدد الأشكال GATGAT / GAT في إنترون المجاور أن الطفرة C21Y كان من جديد في الأم (انظر النص للمناقشة). رموز النسب هي للالشكل 1.

المتغيرات حميدة

وحددت 3 بي بي طول تعدد الأشكال في إنترون مباشرة من المنبع اكسون 8 كما هو موضح أعلاه في الشكل 2. حذفت ثلاثة أزواج قاعدة بين أزواج قاعدة 405 و 410 من بنك الجينات AF016704 بحيث كان تسلسل GATGAT في أليل أطول وGAT في أليل أقصر. وأشار تحليل الكروموسومات 108 في 54 فردا التحكم التي تردد أليل كان 0.14 لأليل أقصر و 0.86 للأليل أطول.
تم العثور على استبدال الحمض الأميني ثريونين لألانين في كودون 178 (A178T) في وقت سابق في AS الموضوع وكان حاضرا في الأب (H-111) (6). وفي وقت لاحق، حددنا إضافيتين AS الحالات مع الطفرة A178T موجودة في الطفل المصاب والأب (H-163 و H-172). تم العثور على ألانين (A178) مع تردد أليل من 0.97، وثريونين (T178) مع تواتر 0.03 في 106 الكروموسومات من 53 مواضيع عادية.

تحليل لتقديم المشورة الوراثية

وقد أشار العديد من الأسر لتحليل الطفرة المتعلقة التشخيص قبل الولادة والاستشارة الوراثية لأفراد الأسرة. في الأسرة H-144، وكانت خالة الأشقاء المتضررين الحوامل وطلبت التشخيص قبل الولادة. وأشار تحليل سابق للعلامات وراثية في المنطقة UBE3A أن خالة تحمل نفس النمط الفرداني grandpaternal مثل الأطفال المتضررين في الأسرة. حدد تحليل طفرة حذف قاعدة واحدة (856delG) في واحدة من الأطفال المتضررين والأم، ولكن هذه الطفرة غير موجودة في الأجداد الأم أو الخالة.
في حالة الأسرة H-137، أحيلت عينة لتقييم المخاطر والتشخيص قبل الولادة ممكن. تم التعرف على الطفرات W305X في الطفل المصاب والدتها. ورفضت والدة التشخيص قبل الولادة، وأنه لم يتم اختباره رضيعها. في واحدة من الأسر التي لديها دي نوفو الطفرات وإنهاء عائلة الحمل في وقت سابق بسبب القلق بشأن خطر لAS مع عدم وجود إمكانية للتشخيص قبل الولادة نهائي قبل أداء تحليل الطفرة. ومن شأن ذلك أن الأسرة لديها الآن مخاطر منخفضة نسبيا من وجود طفل مصاب، ويمكن إجراء تحليل طفرة في التشخيص قبل الولادة لمعالجة القلق بشأن الاصباغ الأمهات للطفرة.

مناقشة

حددنا الطفرات في UBE3A في 17 من 56 مريضا مؤشر (30٪) مع التشخيص السريري للAS وطبيعية تحليل الحامض النووي. تم العثور على الطفرات في ست من ثماني أسر (75٪) مع أكثر من شخص المتأثر مع نموذجي سريريا AS، وفي 11 من 47 حالات معزولة (23٪). لم يتم العثور على طفرة في أسرة مع السيب واحد مع نموذجي سريريا AS والسيب واحد مع ميزات شاذة. هذه النتائج مشابهة لنتائج تقرير Malzac وآخرون. (23) والتي تم العثور على طفرات في 80٪ من الحالات الأسرية و 14٪ من حالات متفرقة. هناك الآن 29 طفرات مختلفة ذكرت أن يسبب AS، بما في ذلك 17 انزياح الإطار، خمسة هراء، ثلاثة مغلطة واحد في كل من واحد الإدراج الأحماض الأمينية، واحد حذف الأحماض الأمينية، والربط، ووقف كودون (6، 21، 23، 24) ( الشكل 3). كثرة انزياح الإطار وهراء الطفرات لافت للنظر. Malzac وآخرون. (23) استخدام واحد تعدد الأشكال حبلا التشكل (SSCP) للفحص، في حين أننا قد استخدمت التسلسل المباشر لتضخيم الحمض النووي الجيني. Malzac وآخرون. (23) فحص المنبع الإكسونات غير الترميز والعثور على أي الطفرات، ولدينا تسلسل الإكسونات المنبع المختارة على بعض المرضى أيضا لم تحدد الطفرات. على الرغم من أننا لم تصادف الاصباغ في عائلاتنا باستخدام الأساليب المذكورة، وجد الاصباغ الجسدية وسلالة الجرثومية التي كتبها Malzac وآخرون. (23) في ثلاث عائلات، مما يشير إلى احتمال تكرار في نسل الأمهات ومنهم من الطفرة ليست واضحة. الانتشار الواسع النطاق للخسارة من وظيفة الطفرات في UBE3A في AS موضوعات يوفر دليلا قويا على أن هذه الطفرات تسبب AS النمط الظاهري. وبالإضافة إلى ذلك، فإن البيانات تتفق مع التفسير الذي الحذف، UPD وحالات الطفرة يطبع من AS ينطوي أيضا على فقدان التعبير الأمهات من UBE3A باعتبارها الآلية الأساسية للتعبير المظهري. جميع الآليات الجزيئية تتسق مع غياب التعبير عن UBE3A في تلك الأنسجة حيث يتم إسكات أليل الأب، والنمط الظاهري يشبه بشكل عام لجميع الفئات الجزيئية. ويقدم هذا التقرير أدلة واسعة النطاق (ط) أن التعبير المظهري يتسق مع يطبع مع النمط الظاهري العادي عندما الطفرة على الصبغي الأبوي والنمط الظاهري AS عندما الطفرة على الصبغي الأمهات. (ب) أن الطفرات هي أكثر التعرف غالبا في الأسر التي لديها أكثر من الفرد المصاب. (ج) أن الطفرات في UBE3A تسبب AS موروثة في حوالي نصف الحالات ودي نوفو في الفترة المتبقية. و (د) أن الطفرات اقتطاع تمثل نسبة كبيرة من المجموع.

الشكل (3)
الطفرات ذكرت أن تسبب متلازمة أنجلمان. كل الطفرات ذكرت (6، 21، 24 ومعروضة). وصفت الإكسونات بما يتناسب مع حجمها، ولكن لا تظهر الإكسونات المنبع، وإنترونات ليست في نسبة. ويرد بدء ATG كودون تسمى الأحماض الأمينية 1 سد الإكسونات 7 و 8. اثنين من الطفرات (*) وقد تكررت بشكل مستقل. تم تغيير رقم للطفرة 3093ins5 من المنشور الأصلي على أساس التسميات موصى بها (32).

على الرغم من أن هناك معلومات البيوكيميائية كبيرة بشأن النشاط يغاز بتحول والبروتين من E6-AP، بما في ذلك قدرته على ubiquitinate البروتين p53 وHHRAD23A (15، 25)، والسبب في غلبة اقتطاع الطفرات في UBE3A تسبب AS ليست واضحة. وقد تم تحديد عدة مجالات وظيفية للE6-AP. شريحة حامض 18 الأمينية (الأحماض الأمينية 391-408) ضروري لتوجيه جمعية E6 مع البروتين p53 وتعزيز تدهور E6 التي تعتمد على البروتين p53 (26). وكان الحاخام هيشت (ح omologous إلى E 6-AP ج arboxyl- ر erminus) نطاق يشمل ~350 الأحماض الأمينية في الجزء C-محطة من E6-AP، وحفظها للغاية بين البروتينات من الخميرة، وذبابة الفاكهة، ايليجانس Caenorhabdi-تيس والثدييات (27) ويمكن أن تتفاعل مع بعض الأنزيمات E2 على شكل مجمعات لubiquitination من ركائز (15). يحتوي المجال وكان الحاخام هيشت بقايا السيستين في موقف 820 الذي يعتبر موقع نشط لتشكيل ثيو إستر مع بتحول. أحد الاحتمالات هو أن الطفرات مغلطة تحدث بتواتر معقول في UBE3A، ولكن لديهم أي تأثير المظهرية أو تسبب النمط الظاهري أكثر اعتدالا غير معترف بها بأنها تتعلق AS. ذات أهمية خاصة سيكون احتمال أن المرضى الذين يعانون من الظواهر الأكثر اعتدالا التي تشمل التخلف العقلي، والمضبوطات أو ميزات أخرى قد يكون الطفرات مغلطة في UBE3A. على الرغم من أن أقل احتمالا، فمن الممكن أن تسلسل الرئيسي للمكان يهيئ إلى تردد أعلى من اقتطاع طفرات من الطفرات مغلطة.
على الرغم من أن يتم تحديد الطفرات في 75-80٪ من الأسر التي لديها أفراد متعددين المصابين AS، ولم يتم العثور على طفرات في بعض الأسر، كما في حالة عائلتين أننا دراستها. أسر أخرى مع sibs المتضررة وليس من المعروف طفرة تعريفية (7، 23)، وفي حالة واحدة تقترح إعادة التركيب أن الطفرة نحو 5 "نهاية موضع إذا كان في رابطة الدول المستقلة مع UBE3A على كروموسوم الأمهات (7) . فمن المحتمل أن بعض الحالات المتبقية من AS ديهم طفرات على كروموسوم الأمهات التي يتم حتى الآن الكشف عن هويته. المظاهرة الحذف تسبب الطفرات يطبع ~0.8-1 ميغابايت القسيم المركزي لUBE3A يؤكد أن هذه الطفرات يمكن أن يؤثر العناصر التنظيمية رابطة الدول المستقلة بعيدة تماما عن مكان. تحديد الطفرات في جزء صغير من حالات معزولة يوحي إما أن هناك الأساس الجزيئي مجهولين آخر لAS التي لا ترتبط مع خطر تكرار عالية، كما هو الحال بالنسبة الحذف الخلالي أو محدث، أو أن جزءا كبيرا من المرضى سريريا تشخيصها على أنها AS ديك شرط غير ذات صلة. الآليات الجزيئية إضافية محتملة وبالتالي تنطوي UBE3A تشمل الطفرات من 15q11-Q13 لم يتم تحديدها بعد، والطفرات في الجينات على الكروموسومات الأخرى التي تنظم التعبير الأمهات من UBE3A والأحداث جينية تؤدي إلى إسكات أليل الأمهات لUBE3A دون تغيير النوكليوتيدات الأساسي. التفسيرات المحتملة لعدم تحديد الطفرات لا تورط UBE3A سيشمل التقييم السريري غير دقيقة أو genocopies مشروعة أو المظاهر النسخية تلبية معايير التشخيص القياسية دون تغيير في التعبير عن UBE3A.
التشخيص المختبري وتقديم المشورة الوراثية للAS هي معقدة بشكل غير عادي. على الرغم من أن الدراسات طفرة لا تحدد الخلل في جميع الحالات، فهي قيمة وأشارت في المرضى الذين يعانون من الطبيعي تحليل الحامض النووي.

المواد والأساليب

السكان المريض

وقد رأيت الكثير من المرضى شخصيا من قبل واحدة من الكتاب، وأحيلت ما تبقى من مدن بعيدة في العديد من البلدان. السجلات الطبية، وفي كثير من الحالات أشرطة فيديو، من المرضى تم استعراضها من قبل المؤلفين وبالدرجة الأولى من جانب واحد محقق (CB)، وتميزت المرضى عن وجود النمط الظاهري يتفق مع AS على أساس معايير التشخيص القياسية (28). وشعر بعض المرضى المشار إليها من غير المحتمل أن يكون AS بناء على مراجعة السجلات الطبية وأشرطة الفيديو، ولم تدرج للدراسات الجزيئية. وكانت المعلومات تاريخ الأسرة المتاحة في جميع الحالات.

تحليل الطفرة

تم عزل الجينوم DNA من الدم المحيطي أو من الابيضاض اللمفاوي مثقف باستخدام SDS / بروتين K الهضم واستخراج الفينول كلوروفورم (29). وتضخمت الإكسونات 7-16 من UBE3A باستخدام بادئات المرافقة حدود إنترون-إكسون (الجدول 1)؛ تسلسل المعلومات أكثر اتساعا متاح (بنك الجينات الانضمام غ AF016703 - AF016708). كانت الظروف PCR 10 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 8.3، 1.5 ملي MgCl 2، 50 ملي بوكل، 0.2 ملي dNTPs، 1 ميكرومتر التمهيدي لالإكسونات 9 و 10 و 0.5 ميكرومتر التمهيدي لالإكسونات أخرى. كانت الظروف PCR 95 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة، 55 أو 58 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة و 72 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة لدورات 30-35. تم تنقية المنتجات PCR باستخدام PCR تنقية أو مجموعات استخراج الهلام (QIAGEN، لوس أنجلوس، CA أو PROMEGA، وميلووكي، ويسكونسن). شملت معظم الاشعال PCR ذيول التسلسل عالمية أو عكس كما هو مبين في الجدول 1. والتسلسل منتجات PCR مباشرة باستخدام الصبغة التمهيدي ABI PRISM أو صبغ فاصل دورة تسلسل مجموعات رد فعل التحضير (بيركن، إلمر، شيكاغو، IL). تم تنفيذ التسلسل الآلي باستخدام المنظم DNA ABI 377 (النظم البيولوجية التطبيقية، فوستر سيتي، كاليفورنيا). وقد أكد كل الطفرات المفترضة عن طريق الاستنساخ وتسلسل أليل متحولة لكل موضوع.
بالنسبة لكثير من الطفرات، وقد تم تأسيسها تحليل PCR لتحليل أفراد الأسرة وكذلك تأكيد طفرة استخدام تحدث بشكل عفوي الاختلافات في مواقع انزيم التقييد، مصطنع الاختلافات في مواقع الانزيم تقييد أو طول اختلاف المنتج. لتحليل الطفرة 1694del4، تم تضخيم الحمض النووي الجيني باستخدام بادئات لاكسون 9B من الجدول 1 وأجريت متداخل PCR مع الاشعال إضافية 5'-CAAATGTAGTGGGAGGGGAAGTGG-3 "و5'-CAGCTCGCTGGACTCAGGGATGGG-3". للدراسات طفرة C21Y، كانت الاشعال لتضخيم 5'-ACTGTGCTTATTGTTTGAATGTTTG-3 "و5'-CTCATTCGTGCAGGCTTCATTTCC-3"، وحللت الطفرة التي الانزيم تقييد الهضم مع ملعقة شاي 45I. لتحليل 3 سنة مضت تعدد الأشكال intronic، كانت الاشعال 5'-CACAGGTTAACTACTTCAGTGC-3 "و5'-TAAGCACAGTGATTAGTACA-3".
يتم ترقيم الإكسونات والنيوكليوتيدات كدنا] وفقا لKishino واغستاف (بنك الجينات انضمام رقم U84404) (30)، والذي يختلف من بعض الاستنساخ وطفرة تقارير سابقة (6، 21، 24، 31)، ولكن هو في اتفاق مع ترقيم من Malzac وآخرون. (23). رامزة ATG سد الإكسونات 7 و 8 هي كدنا] بي بي 587-589 وكودون 1 لترقيم الأحماض الأمينية. يتم تصنيف الطفرات وفقا لتسمية موصى بها (32) مع جميع أرقام النوكليوتيدات على أساس كدنا].

شكر وتقدير

ونود أن نشكر العديد من الأسر والأطباء لتوفير الوصول إلى السجلات الطبية والعينات. نشكر ديان ديكس، سكوت دوديك وشياو يون وانغ للحصول على المساعدة الفنية. وأيد هذا العمل عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة لمركز أبحاث التخلف العقلي (HD24064) ومركز البحوث السريرية العام (RR00188).
  • © 1999 مطبعة جامعة أكسفورد
المراجع

    • روب SA،
    • بول KRE،
    • ويلسون BJ،
    • بريت EM
    و"دمية سعيدة" متلازمة Angelman: استعراض الملامح السريرية القوس. ديس. الطفل 1989؛ 64: 83-86.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • وليامز CA،
    • زوري RT،
    • هندريكسون J.،
    • مطارد H.،
    • ماروم T.،
    • Whidden E.،
    • دريسكول DJ
    متلازمة أنجلمان. داء. Probl. Pediatr 1995؛ 25: 216-231.
    ميدلاين الباحث العلمي من Google
    • جيانغ Y.،
    • تساي T.-F.،
    • Bressler J.،
    • Beaudet AL
    يطبع في Angelman والمتلازمات-برادر ويلي. داء. Opin.Genet.Dev 1998؛ 8: 334-342.
    منحة جوجل
    • نيكولز RD،
    • Saitoh S.،
    • Horsthemke B.
    يطبع في برادر ويلي والمتلازمات Angelman اتجاهات جينيه عام 1998؛ 14: 194-200..
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • يدبيتر DH،
    • Ballabio A.
    علم الوراثة الخلوية الجزيئية من المتلازمات الجينية متجاورة: الآليات والنتائج المترتبة على اختلال التوازن جرعة الجينات. في: Scriver CR، Beaudet AL، ماكر WS، فالي D.، المحررين والأيضية والجزيئية أسس ورثت مرض نيويورك: ماكجرو هيل، 1995.. ص 811 - 839.
    منحة جوجل
    • ماتسورا T.،
    • ساتكليف JS،
    • فانغ P.،
    • Galjaard R.-J.،
    • جيانغ Y.-H.،
    • بينتون CS،
    • Rommens JM،
    • Beaudet AL
    دي نوفو اقتطاع الطفرات في E6-AP بتحول البروتين يغاز الجين (UBE3A) في متلازمة أنجلمان الطبيعة جينيه 1997؛ 15:.. 74-77.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Kishino T.،
    • لند M.،
    • اغستاف J.
    الطفرات UBE3A / E6-AP تسبب متلازمة أنجلمان الطبيعة جينيه 1997؛ 15: 70-73..
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • فو TH،
    • هوفمان AR
    يقتصر يطبع من هذا الجين متلازمة أنجلمان، UBE3A، إلى الدماغ الطبيعة جينيه 1997؛ 17: 12-13..
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Rougeulle C.،
    • جلات H.،
    • لند M.
    هو مطبوع على Angelman متلازمة الجينات مرشح، UBE3A / E6-AP، في الدماغ الطبيعة جينيه 1997؛ 17:.. 14-15.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • ألبرخت U.،
    • ساتكليف JS،
    • Cattanach BM،
    • بيتشي CV،
    • ارمسترونغ D.،
    • ايشيل G.،
    • Beaudet AL
    التعبير مطبوع من الفئران الجينات متلازمة أنجلمان، Ube3a، في قرن آمون والخلايا العصبية الطبيعة جينيه 1997؛ 17: 75-78..
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Horsthemke B.،
    • ديتريتش B.،
    • Buiting K.
    يطبع الطفرات على الكروموسوم البشري 15. همهمة. Mutat 1997؛ 10: 329-337.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Buiting K.،
    • ديتريتش B.،
    • جروب S.،
    • ليش C.،
    • بوتشولز T.،
    • سميث E.،
    • ريس A.،
    • برغر J.،
    • Abeliovich D.،
    • بارت-ويت U.،
    • يانسن B.،
    • ليرر I.،
    • فان دن Ouweland بلغ متوسط ​​الأجر الشهري،
    • هالي DJJ،
    • Schrander-Stumpel C.،
    • سميتس H.،
    • Meineri P.،
    • مالكولم S.،
    • غاردنر A.،
    • لند M.،
    • نيكولز RD،
    • صديق K.،
    • شولز A.،
    • ماتيس G.،
    • Kokkonen H.،
    • هيلبرت P.،
    • فان Maldergem L.،
    • غلوفر G.،
    • كاربونيل P.،
    • ويليمز P.،
    • Gillessen-Kaesbach G.،
    • مقبلات-themke B.
    عيوب يطبع متفرقة في متلازمة برادر ويلي ومتلازمة أنجلمان: الآثار المترتبة على نماذج بصمة التبديل، وتقديم المشورة الوراثية، والتشخيص قبل الولادة AM. J. هوم. جينيه عام 1998؛ 63: 170-180.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Huibregtse JM،
    • Scheffner M.،
    • هاولي PM
    A البروتين الخلوي يتوسط جمعية البروتين p53 مع oncoprotein E6 من أنواع فيروس الورم الحليمي البشري 16 أو 18 EMBO J 1991؛ 10: 4129-4135.
    ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Huibregtse JM،
    • Scheffner M.،
    • هاولي PM
    الاستنساخ والتعبير عن كدنا] لE6-AP، وهو البروتين الذي يتوسط تفاعل الورم الحليمي البشري E6 oncoprotein مع البروتين p53. مول. الخلية. بيول 1993؛ 13: 775-784.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • كومار S.،
    • كاو WH،
    • هاولي PM
    التفاعل الجسدي بين E2 وكان الحاخام هيشت E3 إنزيمات معينة يحدد cooperativity وظيفية. J. بيول. علم 1997؛ 272: 13548-13554.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • Hochstrasser M.
    تعتمد على بتحول وتفتت البروتين. أنو. القس جينيه 1996؛ 30: 405-439.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • الباوميستير W.،
    • والز J.،
    • Zühl F.،
    • Seemuller E.
    . وproteasome و: نموذج من البروتياز compartmentalizing النفس خلية 1998؛ 92: 367-380.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • تشيخانوفير A.،
    • شوارتز AL
    المسار بتحول-proteasome و: تعقيد وظائف لا تعد ولا تحصى من البروتينات الموت بروك. Natl أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية عام 1998؛ 95: 2727-2730.
    مجانا النص الكامل
    • Hochstrasser M.
    . تدهور البروتين أو التنظيم: UB القاضي خلية 1996؛ 84: 813-815.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • جيانغ Y.-H.،
    • ارمسترونغ D.،
    • ألبرخت U.،
    • اتكينز CM،
    • Noebels JL،
    • ايشيل G.،
    • Sweatt دينار،
    • Beaudet AL
    تحور يغاز بتحول Angelman في الفئران تسبب زيادة البروتين p53 حشوية وعجز التعلم السياقي وطويلة الأجل التقوية العصبية 1998؛ 21: 1-20.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • تساي T.-F.،
    • رأس روتشيلد A.،
    • بن نيريا Z.،
    • Beaudet AL
    التشخيص قبل الولادة وكشف الناقل للطفرة نقطة في UBE3A تسبب متلازمة أنجلمان. آم. J. هوم. جينيه عام 1998؛ 63: 1561-1563.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Meijers-Heijboer EJ،
    • Sandkuijl LA،
    • برونر HG،
    • سميتس HJM،
    • Hoogeboom AJM،
    • Deelen WH،
    • فان هيميل JO،
    • Nelen MR،
    • سميتس DFCM،
    • Niermeijer MF،
    • هالي DJJ
    تحليل الربط مع كروموسوم 15q11-13 علامات يظهر يطبع الجينومية في متلازمة أنجلمان العائلية. J. ميد. جينيه عام 1992؛ 29: 853-857.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • Malzac P.،
    • ويبر H.،
    • Moncla A.،
    • غراهام JM،
    • Kukolich M.،
    • وليامز C.،
    • Pagon RARLA،
    • Kishino T.،
    • اغستاف J.
    تحليل تحور UBE3A في مرضى متلازمة أنجلمان. آم. J. هوم. جينيه عام 1998؛ 62: 1353-1360.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • فونغ DC،
    • يو B.،
    • تشيونغ KF،
    • سميث A.،
    • ترينت RJ
    UBE3A "طفرات" في اثنين من المرضى متلازمة أنجلمان لا علاقة لها ومختلفة ظاهريا. همهمة. جينيه عام 1998؛ 102: 487-492.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Scheffner M.،
    • Huibregtse JM،
    • Vierstra RD،
    • هاولي PM
    وHPV-16 ET وE6-AP الوظائف المعقدة باعتبارها يغاز بتحول والبروتين في ubiquitination البروتين p53 خلية لعام 1993؛ 75: 495-505.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Huibregtse JM،
    • Scheffner M.،
    • هاولي PM
    توطين المناطق E6-AP أن فيروس الورم الحليمي البشري المباشر E6 ملزمة، بالتعاون مع البروتين p53، وubiquitination من البروتينات المرتبطة بها. مول. الخلية. بيول 1993؛ 13: 49 1 8-4927.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • Huibregtse JM،
    • Scheffner M.،
    • Beaudenon S.،
    • هاولي PM
    عائلة من البروتينات الهيكلية والوظيفية ذات الصلة E6-AP بتحول البروتين يغاز. بروك. Natl أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية عام 1995؛ 92: 2563-2567.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • وليامز CA،
    • Angelman H.،
    • كلايتون سميث J.،
    • دريسكول DJ،
    • هندريك وابنه JE،
    • الربوة JH،
    • Magenis RE،
    • Schinzel A.،
    • اغستاف J.،
    • Whidden EM
    متلازمة أنجلمان: توافق في الآراء بشأن معايير التشخيص صباحا. J. ميد. جينيه 1995؛ 56: 237-238.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • سامبروك J.،
    • فريتش EF،
    • Maniatis T.
    . الاستنساخ الجزيئي: دليل مختبر كولد سبرينج هاربور، NY: كولد سبرينج هاربور مختبر الصحافة، 1989.
    منحة جوجل
    • Kishino T.،
    • اغستاف J.
    منظمة الجينوم من UBE3A / E6-AP الجينات والجينات الكاذبة ذات الصلة الجينوم 1998؛ 47: 101-107.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • ياماموتو Y.،
    • Huibregtse JM،
    • هاولي PM
    والإنسان E6-AP الجين (UBE3A) بترميز ثلاثة إيسفورمس المحتملة البروتين الناتجة عن الربط التفاضلية الجينوم 1997؛ 41: 263-266.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Antonarakis SE
    توصيات لنظام التسمية لطفرات جينية بشرية. التسميات الفريق العامل. همهمة. Mutat 1998؛ 11: 1-3.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس