التحقيق في الاختلاف في الجينات نقل الدوبامين (DAT1) هو من أهمية خاصة في دراسة اضطراب نقص الانتباه وفرط الحركة (ADHD)، لأن العقاقير المنشطة تتفاعل مباشرة مع البروتين الناقل. ولذلك، من اهتمام كبير وأفادت العديد من الدراسات العلاقة بين ADHD و10-تكرار أليل من تعدد الأشكال VNTR 40-BP التي تقع ضمن 3'-UTR من DAT1. حتى الآن، كانت هناك 11 دراسة نشرت في عينات ADHD السريرية، الستة التي تدعم وجود ارتباط مع أليل 10-تكرار والخمسة التي لا.
1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9، 10 قمنا بتحليل تعدد الأشكال DAT1 في عينة من 110 probands التايوانية مع تشخيص DSM-IV من ADHD وإيجاد دليل على زيادة انتقال أليل 10-تكرار استخدام TRANSMIT (
2 = 10.8، DF = 1،
P = 0.001، OR = 2.9، CI 1،4-6،3 95٪). تعطي هذه البيانات إلى ارتفاع نسبة الأرجحية مماثلة لتلك التي لوحظت في دراسات سابقة من الأفراد قوقازي، على الرغم من تردد أعلى بكثير من أليل خطر.
على مدى 5 سنوات الماضية تم إحراز تقدم كبير في تحديد التباين متعدد الأشكال ضمن الجينات نظام مونوامين التي ترتبط مع النمط الظاهري ADHD. على وجه الخصوص، تم الإبلاغ عن جمعيات تكرارها مع D4 الدوبامين ومستقبلات D5 (DRD4 وDRD5)،
4، 11، 12، 13 ونقل الدوبامين (DAT1) ومستقبلات السيروتونين 1B (5HT1B)
14، 15 الجينات. على الرغم من أن تحديد هذه النتائج متسقة أمر غير معتاد في دراسة اضطرابات سلوكية الإنسان، لا تزال الشكوك صلاحيتها ومطلوب مزيد من الأدلة قبل أن نتمكن من أن تكون على ثقة من أن النتائج الواردة في التقرير تمثل الجمعيات الوراثية الحقيقية. لعلامات معروفة يتم الإعلام عنها حاليا لتترافق مع ADHD، وقد تم تقدير نسب الأرجحية في 1.4، 1.16، 1.4 و 1.48 للDRD4،
11 DAT1،
5 DRD5 (بيانات غير منشورة) و5HT1B،
14 على التوالي، على أساس الفوقية -analyses البيانات المتاحة. من هذه، وأدنى نسبة الأرجحية التقدير يأتي من التحليل التلوي من تعدد الأشكال VNTR داخل المنطقة 3'-غير مترجمة من DAT1، حيث تم الإبلاغ كلا من العمر وصلة وارتباط بين أليل 10-تكرار وADHD (
2 = 3.45،
P = 0.06، OR = 1.16). على الرغم من تدني المستوى العام من الأدلة، ولا تزال هذه الجمعية للاهتمام لأن عدد مكررات عالية مع ستة من أصل 11 مجموعات بيانات مستقلة العثور على أدلة هامة للجمعية.
1، 2، 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9 ،
10 وعلاوة على ذلك، أبلغنا أدلة كبير من عدم التجانس بين مجموعات البيانات، مما يشير إلى أنه قد يكون هناك أسباب تعريفية عن الاختلافات بين الدراسات (
2 = 22.64، DF = 8،
P = 0.004).
5
هنا، ونحن التقرير البيانات من عينة التايوانية التي تردد 10-تكرار الأليل هو أعلى بكثير من تلك التي وجدت في عينات القوقاز. وكان التحقيق رابطة VNTR DAT1 في هذه العينة باستخدام مفردات القائمة على النمط الفرداني النسبي
16 واختبار اختلال التوازن الإرسال (TDT).
17 كما هو الحال في دراستنا السابقة،
5 نحن يقتصر التحليل على فرضية واحدة ولدت من التقرير الأصلي لكوك
وآخرون آل 1 وهذا هو، هناك انتقال الزائد من أليل 10-كرر من الآباء والأمهات الذين هم متغايرة لهذا الأليل، لذريتهم مع ADHD. نحن مرمزة ما مجموعه 59 كاملة ثلاثيات بين الوالدين والأبناء، 45 DUOS مع أحد الوالدين فقط وستة سنغلتونس مع عدم وجود DNA الوالدية. تردد أليل 10 تكرار في هذه الفئة من السكان هو أعلى مما كان عليه في عينات القوقازية، مع تواتر 94.5٪ بين probands ADHD 110 و 82.3٪ بين الأليلات الوالدين nontransmitted من ثلاثيات كاملة (
2 = 6.6، DF = 1،
P = 0.01، OR = 2.72، 95٪ CI = 1،2-6،4). كان الفرق التي لوحظت في الترددات أليل بين الأليلات المنقولة وnontransmitted بين ثلاثيات كاملة قليلا أكثر أهمية بسبب تردد المستلفت أعلى من 96.8٪ في هذه المجموعة الفرعية (
2 = 7.9، DF = 1،
P = 0.005، OR = 4.5، 95٪ CI = 1،3 حتي 16،4).
حدد تحليل TDT من ثلاثيات كامل 21 meioses الوالدين بالمعلومات، التي 16 10 تكرار الأليلات أحيلت مقارنة مع الخمس التي لم يتم إرسالها (
2 = 5.8،
P = 0.02، OR = 3.2). قدم إدراج DUOS الوالد المستلفت تقدير مماثل من نسبة انتقال العدوى، والتي من المرجح أن يكون تقدير غير متحيز بسبب تردد عال جدا من 10 تكرار أليل (25 المنقولة
مقابل 12 nontransmitted،
2 = 4.6،
P = 0.03، OR = 2.1). للحصول على أقصى قدر من الطاقة من مجموعة البيانات المتاحة وتقليل أي تحيز محتمل من المفقودين الأنماط الجينية الأبوية، وسعنا التحليل لتشمل DUOS وسنغلتونس بالإضافة إلى ثلاثيات كاملة باستخدام برنامج TRANSMIT،
18 على الرغم من أن هذا الاختبار لم يعد قويا لل الآثار المحتملة للالطبقية. يقدر هذا أن 208 10-تكرار الأليلات أحيلت ضد 198.06 الإرسال المتوقع (
2 = 10.8، DF = 1،
P = 0.001، OR = 2.9، CI 1،4-6،3 95٪).
على الرغم من أن فترات الثقة واسعة نظرا لصغر حجم العينة، تظهر هذه البيانات أن تؤدي إلى نسبة الأرجحية مشابهة لتلك التي شوهدت في الدراسات السابقة التي تتكون في الأغلب من probands القوقازية المنحدرين من أصول أوروبية. ونظرا للاختلاف الكبير في وتيرة أليل 10 تكرار في هذه الفئة من السكان، التي قد تعكس الاختلافات في بنية النمط الفرداني الكامنة، والتشابه في نسب الأرجحية يتفق مع الرأي القائل بأن تعدد الأشكال VNTR في حد ذاته هو البديل الوظيفي الذي يمنح خطر لADHD. يتم رفع هذا الاحتمال من قبل اثنين من التقارير الأخيرة التي تشير إلى أن تعدد الأشكال VNTR نفسه قد يؤدي إلى مستويات غيرت من DAT1 التعبير.
19، 20
ومع ذلك، فإن قوة الارتباط هو أعلى قليلا من تلك التي ذكرت في معظم الدراسات، مما يزيد من احتمال أن يظهر 10-تكرار أليل رابطة أقوى مع متغير وظيفي قريب كبير (FSV) في هذه الفئة من السكان التايوانيين بالمقارنة مع شعوب القوقاز. وهذا من شأنه التنبؤ بأن الجمعيات مع المخاطر / النسخ المتنوعة وقائية و / أو FSVs ستكون أقوى من مع علامة VNTR وحدها، وربما تقدم تفسيرا لعدم التجانس في انحاء الدراسات؛ فرضية أن يكسب الدعم من دراسات كاثي بر 7 ومايك جيل (اتصال شخصي)، الذين يظهرون على حد سواء زيادة في قوة الارتباط مع النسخ المتنوعة عبر الجينات DAT1. الجداول السلطة تدعم هذا الرأي يدل على خسارة هائلة من الطاقة للكشف عن الجمعيات، التي تستمد من التفاوت في الترددات أليل أو انخفاض مستويات اختلال التوازن الربط (LD) بين موضع علامة وFSV موضع
(الجدول 1).
الجدول 1 - الجدول السلطة للكشف عن الجمعية إلى المساهمة FSV 1٪ إلى التباين الوراثي في عينة من 5000 أشخاص غير محددة.
الجدول الكامل
بدلا من ذلك، قد الاختلافات في التثبت والاختلافات الثقافية في التعبير عن الظواهر السلوكية و / أو تحديد حالات شرح قوة الجمعية في هذه الفئة من السكان. وتكونت عينة الغالب من بالنوع الثالث من ADHD والتقرير الأولي لتحليل التلوي من البيانات DAT1 في عينات ADHD السريرية، تشير إلى أن قوة هذه الرابطة هي أعلى بكثير مع هذا النوع الفرعي من مع النوع الفرعي تفريط (والدمان، والاتصالات الشخصية ).
نقترح إجراء المزيد من الدراسات رسم الخرائط من هذا التركيز على تحديد الجينات المرتبطة المخاطر / النسخ المتنوعة وقائية وFSVs المحتملة الأخرى التي تؤدي إلى الارتباط بين DAT1 وADHD. وينبغي أن تهدف إلى مزيد من العمل على توضيح دور تعدد الأشكال VNTR في تنظيم النشاط نقل الدوبامين وآلية ADHD الحساسية.
تم تضخيم تعدد الأشكال VNTR على cycler الحرارية MJ PTC-225 (MJ للبحوث) في بروتوكول بدء الساخنة التي تنطوي على تغيير طبيعة الخطوة الأولى 5 دقائق عند درجة حرارة 95 درجة مئوية، تليها 38 دورات من 93 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة و 72 درجة C لمدة 1 دقيقة. وكانت الاشعال المستخدمة 5'- TGT GGT GTA GGG AAC GGC CTG AG-3 "و5'- CTT CCT GGA GGT CAC GGC TCA AGG-3". وشمل هذا المزيج رد فعل 75 نانوغرام من الحمض النووي الجيني، 1.5 ملي MgCl 2 و 20 ملي dNTP، و10 ملي 10XPCR العازلة (PE النظم البيولوجية التطبيقية) و 1 وحدة من بوليميريز طق (المضافة على حدة 30 ثانية في خطوة تغيير طبيعة). تم تشغيل المنتجات PCR من على هلام الاغاروز 2٪.