بعد تفكك الميكانيكية وجيزة من المنطقة CA3 الحصين، الخلايا العصبية على شكل هرمي كبيرة (> 20 ميكرون في القطر الجسدية) وجود شوهد التغصنات القريبة سميكة (انظر أيضا
جانغ وآخرون 2006). عندما عقدت هذه الخلايا العصبية في H V 0 بالسيارات باستخدام خلية كاملة تقنية التصحيح، المشبك، وسجلت عفوية التيارات متشابك إلى الخارج في ظل وجود 300 نانومتر TTX، 10 ميكرومتر CNQX، و 20 ميكرومتر APV، التي تمنع voltage- القنوات تعتمد نا +، مستقبلات أمبا / KA، ومستقبلات NMDA، على التوالي. وهذه التيارات عفوية تماما وعكسية سدت 10 ميكرومتر SR95531
(ن = 4)، وGABA محدد A خصم مستقبلات
(الشكل 2A). الشكل 2B يبين الأحداث متشابك عفوية نموذجية في مختلف V H القيم وعلى الجهد الحالي (I- V) العلاقة. إمكانية عكس التيارات عفوية، ويقدر من العلاقة I-V، كان -57.4 بالسيارات
(ن = 4)، والذي كان قريبا من الكلورين النظري - التوازن إمكانية (E الكلورين) من -69.9 بالسيارات وتحسب على أساس معادلة نرنست استخدام من خارج وداخل الخلايا الكلور - تركيزات (161 و 10 ملم على التوالي). هذه النتائج تشير إلى أن هذه التيارات متشابك الخارج العفوية هي GABA A mIPSCs بوساطة مستقبلات.
الشكل 2. GABAergic التيارات عفوية مصغرة المثبطة بعد متشابك (mIPSCs) المسجلة من معزولة ميكانيكيا الخلايا العصبية الهرمية CA3. (أ) تتبع ممثل من GABAergic mIPSCs سجلت قبل وأثناء وبعد تطبيق 10 ميكرومتر SR95531 في إمكانية عقد 0 بالسيارات. الحل الخارجي يتضمن 300 نانومتر سم الأسماك الرباعية الأسنان، و 10 ميكرومتر 6-cyano-7-nitroquinozaline-2،3-ديون ثنائي الصوديوم و 20 ميكرومتر دل حمض أميني -2-5-phosphonovaleric. وتمثل الأشكال آثار نموذجية مع النطاق الزمني الموسع. (ثنائية) آثار التمثيلية للmIPSCs المسجلة من نفس الخلايا العصبية في مختلف القيم المحتملة القابضة. (ب) كل نقطة وشريط خطأ في العلاقة I-V تمثل المتوسط وSEM من 10 تجارب.
لتوضيح ما إذا كان ComK لا تؤثر على انتقال GABAergic عفوية على الخلايا العصبية نقيري، لاحظنا أولا تأثير ComK على GABAergic mIPSCs. في جميع الخلايا العصبية الهرمية CA3 اختبارها، ComK (10 ميكرومتر) زيادة كبيرة في وتيرة mIPSC
(الشكل 3A و ج). في ظل وجود 10 ميكرومتر SR95531، ComK (10 ميكرومتر) التي يسببها الصغيرة الحالي الخارج
(الشكل 3B.)، ولكن لم يتم التحقيق فيها التغيير في هذا التيار القاعدي أبعد من ذلك. كما هو مبين في
الشكل. 3C، ComK تحول كبير في توزيع الفاصل الزمني بين الحدث والسعة الحالية إلى اليسار واليمين، على التوالي
(ع <0.01، كولموجوروف-سميرنوف الاختبار)، مما يشير إلى زيادة في التردد والسعة من GABAergic mIPSCs. في 18 الخلايا العصبية التي الآثار ComK على mIPSCs GABAergic تم تحليل بالكامل، ComK (10 ميكرومتر) زيادة وتيرة متوسط GABAergic mIPSCs إلى 546.4 ± 63.4٪ من سيطرة
(ن =
18، ص <0.01)
(الشكل 3C الأشكال) . ComK أيضا زيادة طفيفة السعة المتوسطة للmIPSCs إلى 111.8 ± 5.4٪ من سيطرة
(ن = 18)، ولكن هذه الزيادة لا يعتد به إحصائيا
(P = 0.16)
(الشكل 3C الأشكال). بالإضافة إلى ذلك، لم ComK (10 ميكرومتر) لا تؤثر على السعة القصوى GABA (100 ميكرومتر) التيارات يسببها (I GABA، 102.0 ± 0.9٪ من السيطرة،
ن = 8، ص = 0.37)، على الرغم من أنها تسارع إلى حد ما الاضمحلال مرحلة I GABA
(الشكل 3D-I). وتشير هذه النتائج إلى أن ComK، على الأقل، لم تتغير التيارات ذروة بوساطة آخر متشابك مستقبلات GABA A. زيادة ComK وتيرة GABAergic mIPSCs بطريقة تعتمد على التركيز
(الشكل 3E)، حيث ComK حتى بتركيز 3 ميكرومتر زيادة كبيرة تردد GABAergic mIPSC (264.7 ± 33.9٪ من السيطرة،
ن = 13،
ع <0.01). معا، وتشير هذه النتائج إلى أن ComK يعمل قبل synaptically لزيادة الإفراج GABA عفوية على معزولة تماما الخلايا العصبية الهرمية CA3.
الشكل 3. مجمع K (ComK) يعمل قبل synaptically لزيادة وتيرة GABAergic mIPSC. (منظمة العفو الدولية) تتبع نموذجية من GABAergic عفوية مصغرة المثبطة التيارات ما بعد المشبكية (mIPSCs) التي سجلت قبل وأثناء وبعد تطبيق 10 ميكرومتر ComK. وتمثل الأشكال آثار نموذجية مع النطاق الزمني الموسع. (ب) إن كل نقطة مبعثر مؤامرة من mIPSC السعة كما هو مبين في منظمة العفو الدولية. تم التخطيط 2401 الأحداث. (ب) تتبع نموذجية من التيارات الغشاء القاعدي سجلت قبل وأثناء وبعد تطبيق 10 ميكرومتر ComK في ظل وجود 10 ميكرومتر SR95531. لاحظ أن ComK لا تثير أي تيارات عفوية. (ج) التوزيعات الاحتمالية التراكمية للفترة بين الحدث (يسار؛ P <0.01، كولموجوروف-سميرنوف الاختبار) والسعة الحالية (الصحيح؛ P <0.01، اختبار كولموجوروف-سميرنوف) من mIPSCs GABAergic هو مبين في منظمة العفو الدولية. تم التخطيط للسيطرة على 655 و 320 أحداث لComK. إدراجات، ComK (10 ميكرومتر) يسببها تغير في وتيرة mIPSC (يسار) والسعة (يمين). يمثل كل شريط عمود والخطأ المتوسط وSEM من 12 تجارب. ** ف <0.01، نانوثانية: غير الهامة. (دي) أثر نموذجي من 100 ميكرومتر التيارات التي يسببها GABA (I GABA) في ظل غياب (يسار) وجود 10 ميكرومتر ComK (يمين). لاحظ أن ComK زيادة GABAergic mIPSCs، كما يتضح من السهم. (ب) وكان كل عمود المتوسط وSEM من أربع تجارب. (ه) العلاقات تركيز استجابة من ComK. يمثل كل شريط نقطة والخطأ المتوسط وSEM 6-12 الخلايا العصبية. ** ف <0.01، نانوثانية: غير الهامة.
لاحظنا المقبل سواء ginsenosides أخرى، مثل RB1 جينسنوسيدي، أحد المكونات الرئيسية الجينسنغ سابونين، وجينسنوسيدي Rg3، أحد المكونات الرئيسية الجينسنغ الأحمر، يمكن أن يؤثر على انتقال GABAergic عفوية. في حين جينسنوسيدي Rg3 (10 ميكرومتر) زيادة كبيرة تردد mIPSC إلى 296.3 ± 5.9٪ من سيطرة
(ن = 11،
ع <0.05)، جينسنوسيدي RB1 (10 ميكرومتر) لم يكن لها تأثير على وتيرة GABAergic mIPSC (95.2 ± 5.1٪ من السيطرة ،
ن = 8، ص = 0.38)
(الشكل 4A و ب). لاحظنا أيضا ما إذا كان ComK يمكن أن تعدل الإفراج عن الناقلات العصبية الأخرى، مثل الصوديوم والجلايسين. في ظل وجود 300 نانومتر TTX، 10 ميكرومتر SR95531 و 20 ميكرومتر APV، سجلت mEPSCs glutamatergic من معزولة تماما الخلايا العصبية الهرمية CA3 في H V -60 بالسيارات. وهذه التيارات متشابك تماما وعكسية سدت 10 ميكرومتر CNQX، مما يشير إلى أنها أمبا / KA mEPSCs بوساطة مستقبلات
(الشكل 4C). في حين ComK (10 ميكرومتر) زيادة كبيرة في وتيرة mEPSC إلى 1052.9 ± 161.2٪ من سيطرة
(ن =
9، ص <0.01)، جينسنوسيدي RB1 (10 ميكرومتر) لم يكن لها تأثير على وتيرة mEPSC glutamatergic (106.1 ± 2.0٪ من السيطرة،
ن = 8، ص = 0.11)
(الشكل 4C ود). نحن أيضا لوحظ تأثير ComK على الإفراج الجلايسين عفوية. في معزولة تماما الخلايا العصبية العجزية النواة الظهرية صواري من الحبل الشوكي (انظر
جانغ وآخرون 2002)، ComK (10 ميكرومتر) زيادة كبيرة تردد mIPSC glycinergic إلى 801.7 ± 247.5٪ من سيطرة
(ن =
4، ص <0.05،
الشكل. 4D)، ولكن جينسنوسيدي RB1 (10 ميكرومتر) لم يكن لها تأثير على وتيرة mIPSC glycinergic (لا تظهر البيانات).
الرقم 4. تأثير مركب K (ComK) وginsenosides أخرى على الإفراج العصبي التلقائي. (أ) تتبع نموذجية من GABAergic عفوية مصغرة المثبطة التيارات ما بعد المشبكية (mIPSCs) سجلت قبل وأثناء وبعد تطبيق 10 ميكرومتر ComK، 10 ميكرومتر جينسنوسيدي RB1، أو 10 ميكرومتر جينسنوسيدي Rg3. (ب) تغيرات في وتيرة GABAergic mIPSC جنسنوسد التي يسببها. كان كل عمود المتوسط وSEM من 18 لComK، 8 لجينسنوسيدي RB1، و 11 تجارب لجينسنوسيدي Rg3. * P <0.05، ** p <0.01، نانوثانية: غير الهامة. (ج) تتبع نموذجية من glutamatergic عفوية مصغرة مثير التيارات ما بعد المشبكية (mEPSCs) التي سجلت قبل وأثناء وبعد تطبيق 10 ميكرومتر ComK أو 10 ميكرومتر جينسنوسيدي RB1. لاحظ أن جينسنوسيدي كان RB1 أي تأثير على انتقال glutamatergic. (د) ComK (10 ميكرومتر) يسببها تغير في وتيرة GABAergic mIPSCs (ن = 18)، mEPSCs glutamatergic (ن = 9)، وmIPSCs glycinergic (ن = 4). ** ف <0.01.
Ginsenosides يؤثر على عدد من القنوات الأيونية ومستقبلات ionotropic (للمراجعة،
وقام خلاله وآخرون 2007). إذا يولد ComK تصرف الموجبة بوساطة نا + و / أو الكالسيوم 2+، يمكن ComK يزيل الاستقطاب محطات العصبية GABAergic لزيادة احتمال الإفراج GABA عفوية. لاختبار هذا الاحتمال، درسنا تأثير نا + خالية حل خارجي على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC. في حل خارجي نا + خالية، تردد GABAergic mIPSC انخفض قليلا، ولكن كان التأثير ليس له دلالة إحصائية (80.8 ± 12.7٪،
ن = 6، ص = 0.16). في حل خارجي خالية نا +، ومع ذلك، ComK (10 ميكرومتر) لا تزال زيادة تواتر mIPSC إلى 395.1 ± 83.4٪ من حالة خالية من نا +
(ن =
6، ص <0.01،
الشكل 5A-II ونصف). كانت بدرجات من الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC بين في غياب وجود الخلية نا + يست ذات دلالة إحصائية
(ن =
6، ص = 0.52،
الشكل 5B-ط)، يشير إلى أن الاستقطاب قبل متشابك التي تحدثها لا تشارك تدفق نا + في زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC. للتحقيق عما إذا كانت ComK يزيد من تركيز الكالسيوم intraterminal 2+ ([كا 2+] محطة) عن طريق تفعيل ما قبل متشابك تعتمد على الجهد الكالسيوم 2+ قنوات (VDCCs)، درسنا تأثير الكادميوم 2+، وهو VDCC عام مانع، على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC. مؤتمر نزع السلاح 2+ (100 ميكرومتر) انخفض كل من تردد GABAergic mIPSC (62.7 ± 10.0٪ من السيطرة،
ن = 5، ص <0.05) والسعة (85.8 ± 7.1٪ من السيطرة،
ن = 5، ص <0.01). انخفاض في GABAergic mIPSC السعة يمكن أن يكون نتيجة لتثبيط المباشر للGABA A مستقبلات التي كتبها الكادميوم 2+
(فيشر وماكدونالد 1998). في ظل وجود 100 ميكرومتر الكادميوم 2+، ومع ذلك، ComK (10 ميكرومتر) لا تزال زيادة تواتر mIPSC إلى 484.0 ± 30.1٪ من حالة القرص المضغوط 2+
(ن =
6، ص <0.01،
الشكل 5A-الثالث وب-II ). كانت بدرجات من الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC بين في غياب وجود الكادميوم 2+ يست ذات دلالة إحصائية
(ن =
6، ص = 0.14،
الشكل 5B-ب). وأخيرا، درسنا تأثير الكالسيوم 2+ خالية (زائد 2 ملي EGTA) حل خارجي على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC. في كاليفورنيا 2+ حل خارجي خالية، على وتيرة واتساع mIPSCs خفضت بشكل ملحوظ (31.3 ± 4.7٪،
ن = 5، ص <0.05، و81.3 ± 1.5 ٪٪ من السيطرة،
ن = 5، ص < 0.05 على التوالي). في كاليفورنيا 2+ حل خارجي خالية، ومع ذلك، ComK (10 ميكرومتر) لا تزال زيادة تواتر mIPSC إلى 559.1 ± 109.3٪ من حالة خالية من الكالسيوم 2+
(ن =
5، ص <0.01،
الشكل 5A-د ب -iii). كانت بدرجات من الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC بين في غياب وجود الكالسيوم خارج الخلية 2+ يست ذات دلالة إحصائية
(ن =
5، ص = 0.37،
الشكل 5B-ج). معا، وتشير هذه النتائج إلى أن تدفق الكالسيوم 2+ من الفضاء خارج الخلية لا علاقة لزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC، مشيرا إلى أن ComK قد تزيد [كا 2+] محطة عبر الكالسيوم 2+ إطلاق سراح من مرحلة ما قبل متشابك كا 2 + المخازن.
الرقم 5. آثار نا + خالية حل خارجي، الكادميوم 2+، والكالسيوم 2+ حل خارجي خالية على مجمع K (ComK) زيادة يسببها في التيارات المثبطة مصغرة عفوية بعد متشابك (mIPSC) تردد. (أ) آثار النموذجية لmIPSCs سجلت من قبل (يسار) وخلال (يمين) تطبيق 10 ميكرومتر ComK في السيطرة الحل الخارجي (ط)، في حل خارجي خالية نا + (ب)، في ظل وجود 100 ميكرومتر مؤتمر نزع السلاح 2+ (ج)، وفي كاليفورنيا 2+ حل خارجي خالية (رابعا). (ب) التغيرات الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC في كل حالة (ط، نا + خالية، ن = 6؛ الثاني، الكادميوم 2+، ن = 5؛ الثالث، كا 2+ خالية، ن = 5) . الدوائر المفتوحة وخطوط متصلة تمثل النتائج الفردية، في حين أن الدوائر المغلقة وأشرطة الخطأ تشير المتوسط وSEM. نانوثانية: غير الهامة.
بشكل عام، واحتمال الإفراج العصبي يتناسب طرديا مع التغير في [كا 2+] محطة
(وو وSaggau 1997). لذلك، لاحظنا تأثير BAPTA-AM، على نفاذية الغشاء الكالسيوم 2+ خالب، على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC. المعالجة المسبقة لل10 ميكرومتر BAPTA-AM ل> 10 دقيقة انخفض تدريجيا وتيرة mIPSC القاعدية 37.9 ± 11.6٪ من سيطرة
(ن =
8، ص <0.05،
الشكل 6A). في تواجد مستمر من 10 ميكرومتر BAPTA-AM، ومدى الزيادة ComK التي يسببها في تردد mIPSC والموهن تدريجيا (تطبيق 1ST ComK؛ 321.7 ± 64.1٪ وتطبيق ComK 2ND؛ 207.0 ± 47.5٪ من BAPTA-AM
شرط، ن =
7، ص <0.01)
(الشكل 6A و CI). لذلك، من المرجح أن تزيد من [كا 2+] محطة لتسهيل عفوية الإفراج GABA على الخلايا العصبية الهرمية CA3 ComK. لاحظنا بجانب تأثير thapsigargin، وهو لا رجعة فيها شبكية الهيولى العضلية / هيولي باطني الكالسيوم 2+ إطعام الفئران (SERCA) مانع، على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC. تطبيق thapsigargin (1 ميكرومتر) زيادة كبيرة في وتيرة القاعدية من GABAergic mIPSCs (311.8 ± 67.8٪ من السيطرة،
ن = 10،
ع <0.05، الشكل 6B.)، بما يتفق مع الزيادة في [كا 2+] محطة من خلال منع SERCA كما ذكرت سابقا
(Emptage وآخرون 2001). تطبيق لفترات طويلة من 1 ميكرومتر thapsigargin (> 30 دقيقة) انخفض تدريجيا وتيرة GABAergic mIPSCs
(الشكل 6B)، بما يتفق مع استنزاف ما قبل متشابك الكالسيوم 2+ المخازن. في هذه الحالة، كانت الزيادة ComK التي يسببها في تردد mIPSC (776.9 ± 105.9٪ من السيطرة،
ن = 10) انخفضت بشكل ملحوظ إلى 172.5 ± 29.2٪ من حالة thapsigargin
(ن = 10،
ع <0.01، الشكل 6B و ج-ب). من ناحية أخرى، تم رفض زيادة في وتيرة mIPSC التي كتبها ComK تدريجيا مع التطبيق لفترة طويلة من 10 ميكرومتر ComK
(الشكل 6D). في هذه الحالة، لم thapsigargin (1 ميكرومتر) لا تزيد تردد GABAergic mIPSC (59.5 ± 10.0٪ من حالة ComK،
ن = 7، ص = 0.08،
الشكل 6D). وتشير هذه النتائج إلى أن ComK يزيد من [كا 2+] محطة عبر تعتمد على تخزين آلية كا ما قبل متشابك 2+.
الرقم 6. تأثير BAPTA-AM وthapsigargin على مجمع K (ComK) زيادة يسببها في عفوية مصغرة تيارات ما بعد متشابك المثبطة (mIPSC) تردد. (أ) A مدار الساعة من تردد GABAergic mIPSCs قبل وأثناء وبعد تطبيق 10 ميكرومتر ComK في غياب وجود 10 ميكرومتر BAPTA-AM. وتمثل الأشكال آثار نموذجية من GABAergic mIPSCs في المنطقة مرقمة. (ب) دورة وقت تردد GABAergic mIPSC قبل وأثناء وبعد تطبيق 10 ميكرومتر ComK في غياب وجود 1 ميكرومتر thapsigargin. وتمثل الأشكال آثار نموذجية من GABAergic mIPSCs في المنطقة مرقمة. (ج) التغيرات الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC في غياب وجود 10 ميكرومتر BAPTA-AM (ط، ن = 8) أو 1 thapsigargin ميكرومتر (ب، ن = 5). الدوائر المفتوحة وخطوط متصلة تمثل النتائج الفردية، في حين أن الدوائر المغلقة وأشرطة الخطأ تشير المتوسط وSEM. ** ف <0.01. (د) A مدار الساعة من تردد GABAergic mIPSC قبل وأثناء وبعد التطبيق من 1 ميكرومتر thapsigargin في وجود فترات طويلة من 10 ميكرومتر ComK. لاحظ أن thapsigargin لا زيادة تردد GABAergic mIPSC.
سوف كاليفورنيا 2+ بيان من قبل متشابك كاليفورنيا 2+ مخازن يتم بوساطة ryanodine المستقبلات أو إينوزيتول-1،4،5-trisphosphate (IP 3) مستقبلات
(باردو وآخرون 2006). ولذلك، درسنا تأثير TMB-8، مانع ryanodine مستقبلات
(شيميزو وآخرون 2008)، على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC. تطبيق TMB-8 (100 ميكرومتر) انخفضت بشكل ملحوظ على وتيرة القاعدية واتساع GABAergic mIPSCs (43.0 ± 10.2٪ من السيطرة،
ن = 9، ص <0.05 و 82.5 ± 3.1٪ من السيطرة،
ن = 9،
ف <0.01، على التوالي). في استمرار وجود 100 ميكرومتر TMB-8، وزيادة ComK التي يسببها في تردد mIPSC (790.6 ± 82.8٪ من السيطرة،
ن = 10) وانخفضت بشكل ملحوظ إلى 406.0 ± 30.2٪ من حالة TMB-8
(ن = 10 ،
ف <0.01، الشكل 7A الثاني ونصف). كما درسنا تأثير 2-APB، والذي يعرف لمنع IP 3 مستقبلات
(ياماشيتا وآخرون 2009. ولكن انظر أيضا
ما وآخرون 2002.؛ Chinopoulos وآخرون 2003.)، على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC . تطبيق 2-APB (100 ميكرومتر) زيادة كبيرة في وتيرة القاعدية من GABAergic mIPSCs (198.8 ± 26.8٪ من السيطرة،
ن = 10،
ع <0.05).في استمرار وجود 100 ميكرومتر 2-APB، وزيادة ComK التي يسببها في تردد mIPSC (980.0 ± 151.4٪ من السيطرة،
ن = 10) وانخفضت بشكل ملحوظ إلى 338.0 ± 40.3٪ من حالة 2-APB
(ن = 10 ،
ص <0.01،
الشكل 7A والثاني والثالث وب-ب). وتشير النتائج إلى أن الزيادة ComK التي يسببها في [كا 2+] محطة هي، على الأقل جزئيا، بوساطة كل من ryanodine وIP 3 مستقبلات. من ناحية أخرى، فإن تطبيق كلا TMB-8 و 2-APB القضاء في نهاية المطاف كل mIPSCs
(ن = 4، لا تظهر البيانات) بحيث أننا لا يمكن تقييم تأثير هذه حاصرات اثنين على زيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC .
الرقم 7. آثار 8- (diethylamino) الأوكتيل-3،4،5-trimethoxybenzoate حمض الهيدروكلوريك (TMB-8) و2-aminoethoxydiphenyl بورات (2-APB) على مجمع K (ComK) زيادة يسببها في عفوية آخر المثبطة مصغرة التيارات -synaptic (mIPSC) تردد. (أ) آثار النموذجية لmIPSCs سجلت من قبل (يسار) وخلال (يمين) تطبيق 10 ميكرومتر ComK في السيطرة الحل الخارجي (ط)، في ظل وجود 100 ميكرومتر TMB-8، مانع ryanodine مستقبلات (الثاني)، وبحضور 100 ميكرومتر 2-APB، وهو مانع إينوزيتول-1،4،5-trisphosphate مستقبلات (ج). (ب) التغيرات الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC في كل حالة (ط، TMB-8، ن = 9؛ الثاني، 2-APB، ن = 10). الدوائر المفتوحة وخطوط متصلة تمثل النتائج الفردية، في حين أن الدوائر المغلقة وأشرطة الخطأ تشير المتوسط وSEM. ** ف <0.01.
وأخيرا، لاحظنا ما إذا كانت الإنزيمات داخل الخلايا، مثل فسفوليباز C (PLC) وبروتين كيناز A (PKA)، هي المسؤولة عن زيادة في [كا 2+] محطة، لأنه من المعروف ginsenosides أن تؤثر هذه الإنزيمات لتنظيم الكالسيوم 2+ إشارات
(تشوي وآخرون2001b؛
شيويه. وآخرون 2006؛
تشانغ وآخرون2008). درسنا أولا تأثير U73122، مثبط PLC معين
(سميث وآخرون 1990)، على زيادة ComK التي يسببها في الإفراج GABA عفوية. U73122 بتركيز 1 ميكرومتر كان معروفا لمنع ردود PLC بوساطة
(إيشيباشي وآخرون2007). انخفض تطبيق U73122 (1 ميكرومتر) تردد القاعدية من GABAergic mIPSCs (52.2 ± 16.1٪ من السيطرة،
ن = 7،
ع <0.05،
الشكل 8A-ب). في استمرار وجود 1 ميكرومتر U73122، ComK (10 ميكرومتر) لا يزال زاد التردد mIPSC إلى 422.2 ± 71.3٪ من حالة U73122
(ن = 7،
ع <0.05،
الشكل 8A الثاني ونصف). كانت بدرجات من الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC بين في غياب وجود U73122 يست ذات دلالة إحصائية
(ن = 7،
ص = 0.45،
الشكل. 8B-I). درسنا القادم تأثير KT5720، وهو PKA المانع معين
(Gadbois وآخرون 1992)، على زيادة ComK التي يسببها في الإفراج GABA عفوية. وقد عرف KT5720 بتركيز 1 ميكرومتر لمنع ردود PKA بوساطة
(لي وآخرون2007). تطبيق KT5720 (1 ميكرومتر) نادرا ما تتأثر وتيرة القاعدية من GABAergic mIPSCs (106.8 ± 14.0٪ من السيطرة،
ن = 6،
ص = 0.29،
الشكل 8A والثاني والثالث). في استمرار وجود 1 ميكرومتر KT5720، ComK (10 ميكرومتر) لا تزال زيادة تواتر mIPSC إلى 535.0 ± 102.4٪ من حالة KT5720
(ن = 6،
ص <0.05،
الشكل 8A والثاني والثالث وب-ب). كانت بدرجات من الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC بين في غياب وجود KT5720 يست ذات دلالة إحصائية
(ن = 6،
ص = 0.10،
الشكل. 8B-ب). بالإضافة إلى ذلك، SQ22536 100 ميكرومتر، مثبط أدينيليل محلقة
(Turcato وكلاب 1999)، لم يكن لها تأثير على زيادة ComK التي يسببها في تردد mIPSC
(ن = 3، لا تظهر البيانات). وتشير هذه النتائج التي لا PLC ولا PKA متورط في الزيادة التي يسببها ComK في الإفراج GABA عفوية.
الرقم 8. آثار U73122 وKT5720 على مجمع K (ComK) زيادة يسببها في عفوية مصغرة تيارات ما بعد متشابك المثبطة (mIPSC) تردد. (أ) آثار النموذجية لGABAergic mIPSCs سجلت من قبل (يسار) وخلال (يمين) تطبيق 10 ميكرومتر ComK في السيطرة الحل الخارجي (ط) في وجود من 1 ميكرومتر U73122، وهو فسفوليباز C المانع محددة (ب) أو في وجود 1 ميكرومتر KT5720، وهو بروتين كيناز معين مثبط (ج). (ب) التغيرات الزيادة ComK التي يسببها في وتيرة mIPSC في غياب وجود 1 ميكرومتر U73122 (ط، ن = 7) أو 1 ميكرومتر KT5720 (الثاني، ن = 6). الدوائر المفتوحة وخطوط متصلة تمثل النتائج الفردية، في حين أن الدوائر المغلقة وأشرطة الخطأ تشير المتوسط وSEM. نانوثانية: غير الهامة.